小龍蝦真菌病害（一）：病原真菌類群

趙楠，巫愛軍，趙桂華,3

（1.江蘇農林職業技術學院，江蘇 句容 212400；2.句容市水產技術推廣站，江蘇 句容 212400；3.句容市潤泰生物科技有限公司，江蘇 句容 212400）

按照小龍蝦病理學和病原學的觀點，引起小龍蝦生病或生長衰弱的生物被稱為病原生物，主要被分為 6 大類，即真菌（fungi）、細菌（bacteria）、病毒（viruses）、類立克次體（Rickettsia-like organism，RLOs）、原生生物(protests)和后生動物（metazoans）[1]，小龍蝦是它們的共同寄主（host），它們引起小龍蝦病害的癥狀、發生規律和傳播途徑各異，應根據小龍蝦生病的實際情況加以診斷，在一般情況下，難以準確鑒別。任何一種有害生物的致病性都取決于寄主的生理學狀態，真菌菌株的侵染能力與毒性，以及小龍蝦生存的水體環境。

真菌是眾多生物中的一類，也被分為不同的類群。在每一個類群中的任何一種真菌與小龍蝦的關系各異，有寄生、共生、內生和腐生4種形式，后3種形式不引起小龍蝦的病害。寄生真菌會引起小龍蝦的病害；共生真菌與小龍蝦長期生活在一起，互為有利，小龍蝦可為真菌提供養分，而真菌菌絲從外界吸收養分，有利于小龍蝦的生長；共生是二者長期進化到高級階段的結果，在動植物上共生現象普遍存在；內生真菌生長在小龍蝦體內，特別是腸道內真菌，有利于維持小龍蝦腸道內微生物群體的微生態平衡，促進小龍蝦的生長；腐生真菌把小龍蝦作為它們的宿主，隨著小龍蝦的移動和傳播，這類腐生真菌也同樣進行移動和傳播，對小龍蝦無害。

在每一類病原生物中都有一種對小龍蝦危害嚴重的代表，如病毒中的白斑綜合征病毒病、卵菌中的瘟疫病（Aphanomyces astaci）、細菌中的嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）與副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）引起的敗血癥、真菌中黑鰓病（Fusarium spp.）和灼斑病,這些病害都是養殖者重點防治的對象。小龍蝦灼斑病的發生，其危害程度雖然不像水霉病和黑鰓病那樣嚴重，但也是一種重要的真菌病害，在歐洲愛沙尼亞大陸和薩阿雷馬島引起流行病，威脅著當地的歐洲高貴小龍蝦（A.astacus）；在澳洲也發生較普遍[2]。

到目前為止，報道了危害小龍蝦的真菌（鞭毛菌、接合菌、擔子菌、半知菌）有36屬70余種[3-5]，分別進行介紹。

1 壺菌目（Chytridiales）

在傳統的真菌分類中，壺菌隸屬于單鞭毛菌[6]，大部分生于水中，少數生于土壤，腐生或寄生于藻類和水生小動物上[7]，有110屬575種。由壺菌引起的病害叫做壺菌病。薩拉曼巴特拉壺菌（Batrachochytrium salamandrivorans）導致火蠑螈（Salamandra salamandra）的死亡。

蛙壺菌（Batrachochytrium dendrobatidis）能引起全世界的兩棲類動物群體衰弱，已證明，在蛙壺菌的傳播中包含了許多非兩棲類寄主[8-9]。小龍蝦、維里利斯鰲蝦（Orconectes virilis）和弗洛里達鰲蝦（Procambarus alleni）都能攜帶侵染源，傳播到當地蝌蚪[9]；McMahon等[9]建議，該真菌可釋放化學物質毒害小龍蝦，出現小龍蝦的死亡，也能降低小龍蝦的生長率，說明在過濾水中仍含有蛙壺菌的游動孢子。Brannelly等[8]記載了壺菌感染養殖和野生小龍蝦有明顯季節性。在自然界，小龍蝦已收到蛙壺菌嚴重威脅。

蛙壺菌生長溫度范圍為4～25℃，最適溫度為17～25℃。在長江以南地區養蝦池底部水溫能保持在5℃左右，因此，它們可以在小龍蝦身上過冬。在25℃以上它們的生長較差，若高于28℃，生長就會停止。受感染的紅眼雨濱蛙（Litoria chloris）只要留在37℃的環境就可以痊愈，這給小龍蝦養殖者一個提示，25℃以上不會發生壺菌病。

壺菌病是一種兩棲類動物的傳染病，是由一種稱為蛙壺菌的非菌絲游離孢子真菌所引起的疾病。壺菌病與北美洲西部、中美洲及澳大利亞東部多種兩棲類數量大幅下降或滅絕有關，全世界約30%的兩棲類都受到這病的影響。壺菌病能夠造成兩棲類零星的死亡，甚至完全滅絕，目前在野外并無有效的控制方法。

2 接合菌亞門（Zygomycotina）

危害小龍蝦的接合菌分別為接合菌綱（Zygomycetes）和毛菌綱（Trichomycetes）種類。

2.1 接合菌綱（Zygomycetes）

由接合菌綱病原真菌引起的小龍蝦病害被稱為接合菌病（Zygomycosis）；包含被孢霉目（Mortierellales）和毛霉目（Mucorales）的9種真菌，如褐犁頭霉（Absidia fusca）、灰綠犁頭霉（A.glauca），被孢霉（Mortierella sp.），沼澤被孢霉（M.turficola），毛霉（Mucorsp.），凍土毛霉（M.hiemalis），羽裂毛霉（M.plumbleus），根霉（Rhizopus sp.）和匍枝根霉（R.stolonifer）[4-5,10-11]。Garzoli et al.(2014)[10]認為，從小龍蝦消化系統中分離到的許多真菌是潛在的小龍蝦病原，有些真菌有助于腸道中植物組織的分解，有利于選擇廣泛的食物。小龍蝦被認為是潛在的植物病害傳播媒介，已分離到的一些真菌被認為是潛在的病原菌。此外，毛霉（Mucor sp.）和蠅卷霉（Circinella muscae）已從Pacifastacus leniusculus中被分離到[12]。而凍土毛霉（Mucor hiemalis）和總狀毛霉（M.racemosus）已從歐洲高貴小龍蝦（Astacus astacus）上分離到[13]。

2.2 毛菌綱（Trichomycetes）

毛菌綱是昆蟲和水生動物上的寄生菌或共生菌，菌絲體以固著器附著在宿主消化道內或角質層上，并不侵入到寄主組織內[6]，是小龍蝦腸道內的一種微生物[14-16]，一般被認為是節肢動物的非病原菌，也有少數種類例外。Strogman&White（2008）[17]在加拿大命名了毛菌綱的7種新真菌，其中Arundinula opeongoensis是在小龍蝦上發現的。毛菌是世界性分布的真菌，凡有節肢動物的地方都能找到毛菌，多數毛霉與宿主是一種共生或共棲關系。

真菌學家依據無性繁殖器官的類型，將毛菌綱分為4目7科，約40屬。具毛孢子的屬于鉤孢毛菌目，具孢囊孢子的屬于囊孢毛菌目，具節孢子的屬于節孢毛菌目，具變形細胞的屬于變形毛菌目。長期以來，毛菌的分類地位在真菌分類學家之間，一直存在著分歧。

毛菌綱菌體形態為多核、不分枝或具隔膜而分枝，接合孢子為雙錐形，有些接合孢子具有附屬絲。無性繁殖產生毛孢子、孢囊孢子、節孢子和變形細胞。接合孢子僅在鉤孢毛菌目中被發現。

3 擔子菌

擔子菌有性繁殖產生擔子和擔孢子，無性繁殖產生分生孢子、粉孢子、節孢子和芽孢子，大多屬于半知菌；分布廣泛，有極少數種類是小龍蝦的病原菌。一些真菌是根據有性繁殖是否被發現確定其分類地位，如酵母類的真菌可能會存在有性階段的拉丁學名和無性階段的拉丁學名，但是有性階段不易被發現，而看到最多的是無性階段。

4 半知菌

4.1 酵母類

Goodrich[18]認為，革蘭隱球菌（Cryptococcus gammari）對小龍蝦雖有致病性，但未見到引起小龍蝦大規模死亡的報道。在小龍蝦上僅分離到4種酵母菌，即來自白爪小龍蝦（Austropotamobius pallipes）的革蘭隱球菌（C.gammari）[18]，小龍蝦上的月牙隱球菌（C.laurentii）和紅酵母菌（Rhodotorula sp.）[11]，以及高貴小龍蝦（Astacus astacus）上的白吉利絲孢酵母（Trichosporon beigelii（=T.cutaneum絲孢酵母）[19]。

白吉利絲孢酵母[Trichosporon beigelii(Küchenm.&Rabenh.)Vuill.1902]分布于全世界，常在土壤、水或其他基質上以腐生的方式生活，但在人和動物體內也常作為一種寄生菌（或病原菌）。Domsch等[20]對該菌的發生和分布進行了系統調查，白吉利絲孢酵母發現于高貴小龍蝦的外殼上，是一種新病原真菌，菌絲侵染小龍蝦外殼后會出現明顯的黑化反應[19]，但也曾從其他蝦（shrimps）、蟾蜍（toads）和兩棲動物組織上分離到[20]。

該真菌在小龍蝦的表皮（或角質層）內生長時可引起組織黑變，但面積很小。黑化菌絲直徑約5～8 μm，而未黑化的菌絲直徑為 3～4 μm。該真菌在歐洲高貴小龍蝦角質層內生長模式，很類似于小龍蝦瘟疫病菌（Aphanomyces astaci）在小龍蝦體內生長模式，給病原真菌鑒定帶來困難。

寄主和寄生物之間的關系是可以轉換的。如通過應力培養，攜帶侵染源的小龍蝦會死亡，因為應力培養可降低免疫保衛反應[21]。

在營養較豐富的麥芽-酵母浸出物蛋白胨培養基上，或在麥芽酵母浸出物瓊脂培養基上，菌落為酵母狀，波浪狀或有皺紋，灰色-橙色。研究證明，在麥芽-酵母浸出物蛋白胨培養基上，芽生分生孢子（Blastoconidia）比在玉米粉瓊脂培養基（CMA）或麥芽浸出物瓊脂（MA2）產生的更多，除了生長稍微快，形態學和生長特性穩定[22-23]。

在MEA培養基上，20℃下10 d的菌落直徑為2.0 cm，白色-乳白色，光滑或有皺紋，節孢子圓筒型-橢圓形，大小為（5～20）×（3～4）μm；菌絲斷裂成節孢子，處產生亞球形的小芽孢子，3.0～4.5 μm；在產孢菌絲上有明顯的孢子痕。大芽孢子球形、卵形或橢圓形無色，壁厚（9～27）×（8～21）μm，類似于厚垣孢子，偶爾被發現[23]。

實驗證明，使用100 mg/L氯化鎂（MgCl2）可阻止白吉利絲孢酵母在高貴小龍蝦和小龍蝦之間的傳播，可延長小龍蝦壽命，處理小龍蝦大約有50%存活率；沒有評估白吉利絲孢酵母對小龍蝦的毒性。白吉利絲孢酵母是在小龍蝦的免疫能力下降時侵染高貴小龍蝦的，此外，生理應力因素以及其他侵染因素也是導致高貴小龍蝦生病的原因之一[19]。

4.2 鐮刀菌及其他半知菌種類

4.2.1 鐮刀菌（Fusarium）

引起小龍蝦病害的鐮刀菌（Fusarium spp.）有5種：由茄鐮刀菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.1881]引起的病害被稱為真菌病（fungal disease），真菌甲殼病（fungal shell disease）和褐腹病（brown abdomen disease）[24]；煙鐮刀菌[F.tabacinum（J.F.H.Beyma）W.Gams 1968]能引起白爪小龍蝦（Austropotamobius pallipes）的黑鰓病；以及由燕麥鐮刀菌[F.avenaceum(Fr.)Sacc.1886][25]、茄鐮刀菌[25]引起的歐洲高貴小龍蝦（A.astacus）和叉肢螯蝦（Orconectes limosus）的灼斑病（burn spot disease）。尖孢鐮刀菌（F.oxysporum Schltdl.1824）、層生鐮刀菌[F.proliferatum(Matsush.)Nirenberg 1976]、串珠鐮刀菌[F.verticillioides(Sacc.)Nirenberg 1976]也報道于小龍蝦上[5]。

4.2.2 其他半知菌

小龍蝦上最常見的病原真菌種類有：腎球葉點霉[Phoma glomerata(Corda)Wollenw.&Hochapfel 1936]、枝狀枝孢菌（Cladosporium cladosporioides Bensch,Crous&U.Braun 2010）、青霉（Penicillium spp.）、曲霉（Aspergillus spp.）、鏈格孢（Alternaria alternata(Fr.)Keissl.1912）、厚垣鏈格孢（A.chlamydospora）、淡紫擬青霉[Paecilomyces lilacinus(Thom)Samson 1974]、束梗霉（Graphium sp.）和內生刺孢殼菌（Chaetomella raphigera Swift 1930）[5]。

根據作者從小龍蝦上分離到的鐮刀菌及其他真菌，有的是我國小龍蝦真菌的新種類和中國真菌新記錄種，將會陸續報道。