水產品中藥物殘留及檢測方法

張桂云，楊偉強

（1.漳州職業技術學院農產品深加工及安全福建省高等學校應用技術工程中心，福建 漳州 363000；2.閩南師范大學化學化工與環境學院，福建 漳州 363000）

我國是漁業養殖生產大國，水產品資源豐富、消費市場巨大。然而在養殖生產過程中，為了防治各類病害、獲取更高的經濟收益，亂用、濫用各種藥物的現象普遍存在。人們若長期食用這些藥物殘留超標的水產品可造成藥物蓄積，導致機體中毒、代謝紊亂、過敏和變態反應、細菌耐藥性等不良后果，嚴重影響消費者的身體健康[1-2]。為此，國家制定了相關的法律法規，對水產品中的藥物殘留限量做出了嚴格的規定[3]。為進一步認識水產品中藥物殘留的危害、提高防控藥物殘留風險的能力，該文總結介紹了幾種重點監測的藥物殘留及其檢測方法，并探討水產品中藥物殘留高效、準確、靈敏檢測的技術方法。

1 水產品中的藥物殘留及檢測標準

水產品的養殖生產過程中使用的藥物種類繁多，一些藥物對人體健康具有明確的毒害作用，因此也被國家列為重點監測的對象。

1.1 孔雀石綠

孔雀石綠（Malachite green,MG）屬于三苯甲烷類染料，具有較強的抗菌效力。曾作為驅蟲劑和殺菌劑，廣泛用于水產養殖業中，以防治魚類的水霉病、鰓霉病、以及小瓜蟲病等。其在生物體內被代謝成隱性孔雀石綠（Leucomalachite green,LMG），兩者在生物體內殘留的時間長、具有顯著的積蓄現象[4]。由于該類染料具有潛在的致畸、致癌、致突變作用，許多國家都已明令禁止其在水產養殖中的使用。但由于這類藥用染料的抗菌效果好、價格低廉、無有效替代藥等原因，其違規使用的現象仍時有發現。目前，孔雀石綠及其代謝產物的標準檢測方法主要為高效液相色譜法（HPLC）和HPLC-MS/MS、GB/T 19857-2005高效液相色譜串聯質譜法[5]。兩者的結果差異性不大，但HPLC-MS/MS方法的樣品前處理操作更為簡單、定性方式更為準確。

1.2 氯霉素

氯霉素（Chloramphenicol,CAP）作為一種抗生素，在水產養殖中能有效防治爛鰓、赤皮病等，具有良好的廣譜抗菌效果。抑菌效果優于其他替代藥物。但氯霉素的毒性較大，可造成人體過敏反應，抑制骨髓造血機能、引發不可逆的再生性障礙貧血等疾病[6]。因此，國家禁止氯霉素在食用性動物中使用，并且規定不得檢出。但由于氯霉素的抑菌效果優于其他替代藥物，在一些貝類水產中仍時有檢出，因此氯霉素仍是水產品質量安全監管的重點對象。水產品中氯霉素殘留量的測定方法較多，其中酶標法可用于氯霉素的快速篩查測定（農業部1025號公告-26-2008），HPLC-MS/MS和氣相色譜質譜聯用法GC-MS和可用于GB/T 22338-2008氯霉素的準確測定[7]。

1.3 磺胺類

磺胺類藥物（Sulfonamides,SAs）是一類具有對氨基苯磺酰胺結構的藥物，主要用于預防和治療細菌感染引發的疾病。在水產養殖中主要用于治療魚、蝦、蟹、鱉等動物的細菌性疾病，防治鯉的赤鰭病，香魚、虹鱒等的弧菌病等[8]?；前奉愃幬镌谏矬w內的作用時間和代謝時間較長，長期食用含磺胺藥物殘留的水產品易導致細菌產生抗藥性，對人體健康造成危害。我國規定動物源食品中磺胺類藥物的最高殘留限量值為100 μg/kg（農業部235號公告）[9]。HPLC和HPLC-MS/MS是檢測磺胺類藥物殘留的主要方法，但由于磺胺類藥物的種類較多且結構相似，因此HPLC-MS/MS可實現多種磺胺類藥物的同時快速檢測（GB/T 21316-2007）[10]。

1.4 喹諾酮類

喹諾酮類藥物（Quinolones,QNs）是人工合成的含4-喹諾酮基本結構的抗菌藥，如環丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星等。其具有抗菌譜廣、抗菌活性強的特點，在水產等養殖中廣泛用于魚、蝦、蟹等的疾病防治。人長期食用含喹諾酮藥物殘留的水產品，易造成人體疾病對該藥物的嚴重耐藥性，影響人體疾病的治療。因此，我國規定動物源食品中磺胺類藥物的最高殘留限量值為10～500 μg/kg（農業部235號公告）[9]。喹諾酮類藥物的種類也較多，因此適用HPLC-MS/MS方法進行檢測，如GB/T 20366-2006[11]。

1.5 硝基呋喃類代謝物

硝基呋喃類藥物是一類化學合成的廣譜抗菌藥物，曾廣泛用于水產等動物傳染性疾病的預防與治療。其原藥及代謝產物均具有一定的毒性，有致畸、致癌和致突變的危險，因此被禁止使用[12]。但由于硝基呋喃類藥物價格低廉、治療效果顯著，在水產養殖中違禁使用的現象屢見不鮮。硝基呋喃類藥物在生物體內代謝迅速，難以原藥的形式檢出；因此主要是對其代謝產物進行測定，包括呋喃它酮的代謝物5-嗎啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、呋喃西林的代謝物氨基脲（SEM）、呋喃妥因的代謝物1-氨基-2-內酰脲（AHD）和呋喃唑酮的代謝物3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）。這些代謝物通常需要以2-硝基苯甲醛進行衍生化，用HPLCMS/MS方法進行測定（GB/T 21311-2007[13]、GB/T 20752-2006[14]）。

2 水產品中多藥物殘留檢測方法的研究

按照國家標準規定的檢測方法，水產品中藥物殘留的檢測以分類檢測為主。不同種類的藥物殘留需要采用不同的前處理方法，過程繁瑣且不盡相同。各種檢測方法的適用性、靈敏度存在微小的差異性，易于混淆[8]。為簡化分析步驟，切實提高檢驗的效率，同時保證檢測的準確性，有必要對現有檢測方法進行歸納總結并建立適用的多藥物殘留檢測方法。

2.1 高效液相色譜串聯質譜法

高效液相色譜串聯質譜法綜合了高效液相色譜良好的分離能力以及質譜的高通量、高靈敏度的優點，非常適用于水產品中多藥物殘留的檢測[15-16]。由前面的論述也可以看出，已有多種藥物殘留采用HPLC-MS/MS法進行分析，特別是對于種類多（如磺胺類和喹諾酮類）、檢出限低（如氯霉素、硝基呋喃）的藥物殘留，HPLC-MS/MS法明顯優于HPLC法。此外，水產品中的藥物殘留均為水溶性、不易氣化，因此其前端的色譜分離過程采用液相色譜為主。通過適當的梯度洗脫程序，能實現多種藥物的簡單分離；即使不能實現基線分離，也可通過多通道的質譜檢測器進行分析，無礙檢測結果。農業部1077號公告-1-2008規定了水產品中17種磺胺類和15種喹諾酮類藥物殘留量檢測的HPLC-MS/MS方法[17]，為多藥物殘留的同時檢測提供了一個很好的范例。然而由于各種藥物的理化性質具有差異性，其樣品前處理方法不盡相同，要充分發揮HPLCMS/MS的優勢須要建立相適應的前處理方法。

2.2 分散固相萃取技術

分散固相萃?。―ispersive solid-phase extraction，DSPE）通過在試樣提取液中直接加入N-丙基乙二胺（Primarysecondaryamine，PSA）、石墨化炭黑（Graphitized carbon black，GCB）、C18、中性氧化鋁等固體吸附劑，去除脂肪、色素及碳水化合物等大部分非目標化合物來凈化樣液[18-19]。具有快速、簡單、廉價、有效、穩定和安全的特點，又稱為QuEChERS（Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safty）方法。將 DSPE方法與HPLC-MS/MS相結合，能夠解決樣品分類前處理的問題，同時彌補樣品凈化不完全的不足，是多目標物檢測的有效解決途徑。羅輝泰等[20]用分散固相萃取法處理魚肉樣品，建立了一次提取、同時測定激素及氯霉素類等30種藥物殘留的方法。卜明楠等[21]以酸化乙腈提取、C18為凈化劑，并結合液相色譜串聯質譜技術，建立了蝦肉中72種藥物殘留的檢測方法。由此可見，采用分散固相萃取技術作為樣品前處理方法是建立多藥物殘留檢測的基本辦法，但應根據各待測樣品及目標物的特點選用適當的凈化劑、優化用量。例如為檢測含四環素類的樣品，應在提取液中加入適量的乙二胺四乙酸（EDTA）以降低四環素類藥物同金屬離子的配位作用。

3 總結和展望

水產品養殖生產過程中使用違禁藥物的現象時有發生，濫用藥物、殘留量居高不下的問題屢見不鮮，對人們的身體健康產生了不良的影響。盡管國家相關法律法規和檢測標準對各類藥物殘留限量和檢測方法做出了明確的規定，但這些標準在執行的過程中仍遇到不少問題。尤其是各藥物殘留分類檢測的方法費時費力、成本高昂，給日常的監管帶來繁重的負擔。隨著檢測技術的快速發展，以分散固相萃取技術作為樣品前處理方法，結合高效液相色譜串聯質譜的高通量、高選擇性、高靈敏度分析能力，是建立水產品中多藥物殘留同時檢測的有效分析方法。