丁香葉/丁香苦苷的肝臟藥理作用及質量標志物(Q-marker)的預測分析

張喜武，竇金金，常馨月，馬婧璇，李永吉，劉振強

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

紫丁香(SyringaoblataLindl.)為木樨科(Oleaceae)丁香屬(Syirgna)植物，收載于黑龍江省中藥材標準(2001年版)中，為哈爾濱市市花，在雞西恒山區也有少量種植。以丁香葉為原料的《炎立消膠囊》制劑具有保肝利膽的功效，炎立消膠囊現收載于1998年《中華人民共和國衛生部藥品標準》[1]，臨床已經證實該藥治療乙型肝炎疾病作用顯著。本課題組前期從丁香葉中分離得到丁香苦苷單體，丁香苦苷的含量占葉子的1.1%，麻鴨體內及HepG2.2.15細胞體外實驗結果表明，丁香苦苷抗乙肝病毒效果顯著，已授權發明專利《丁香苦苷制藥新用途，ZL201010566596.3》[2]，又申請了發明專利《一種丁香苦苷固體脂質納米粒的制備方法，201711483703.4》[3]，且該藥藥效可以與抗HBV藥物拉米夫定相媲美。但丁香苦苷能否成為丁香葉的質量標志物，以及丁香苦苷、丁香葉與肝臟疾病三者之間關系一直不明確，因此，通過對丁香葉和丁香苦苷對肝臟疾病的藥理作用進行歸納總結，為后續的丁香葉質量標志物研究工作提供理論支撐。

1 丁香葉提取物的肝臟藥理作用

1.1 肝炎疾病

吉林醫科大學一院傳染科[4]，將丁香葉提取物制成片劑后，用于治療黃疸型肝炎434例患者，其臨床療效顯著，治愈者388例(占89.4%)，肝功恢復正常者363例(占90.5%)，黃疽恢復正常者424例。高士奇等[5]采用酶聯免疫吸附方法，研究紫丁香葉提取物對HepG2.2.15細胞分泌HBeAg和HBsAg的影響，其結果顯示對HBeAg和HBsAg的分泌具有抑制作用，即提示丁香葉提取物在體外具有抗乙型肝炎病毒的作用。高士奇等[6]采用3H-TdR摻入法檢測HepG2.2.15細胞的存活率。采用ELISA檢測丁香葉在內的3種藥物作用于HepG2.2.15細胞，觀察培養上清中HBeAg和HbsAg水平的變化，并與陽性對照藥干擾素和肝炎靈相比較，紫丁香葉提取物對HepG2.2.15的抑制率介于干擾素和肝炎靈之間，且證實紫丁香葉提取物是一種高效低毒的藥物，具有抗乙型肝炎病毒的作用。

1.2 肝損傷疾病

鄭春梅[7]將丁香葉提取物用于脂多糖和一氨基半乳糖誘導急性小鼠肝損傷模型，提高小鼠血清谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶的活性，以及提高肝臟中SOD的活性、降低MDA的含量，能夠提高小鼠的存活率，對肝臟損傷具有很好的保護作用。姜月紅等[8]將丁香葉提取物給予CCl4誘導的藥物性肝損傷模型大鼠，能夠降低藥物性肝損傷大鼠血清ALT、AST水平，提高藥物性肝損傷大鼠血清中SOD含量、提高GSH-Px含量、降低MDA含量，對肝臟損傷也具有很好的保護作用。李利英[9]從小葉丁香提取液中分離純化得到烯醚萜類化合物，并進行了藥理、藥效學研究，證實烯醚萜類化合物對模型動物肝纖維化有很好的治療作用。郝婷婷[10]對紫丁香葉提取液進行了有效部位篩選，用CCl4進行小鼠肝損傷藥理模型，最后確定丁香總苷為有效部位群，確定提取物1和提取物4為有效部位，可能由于成分保密，未對外公開，即沒有最后確定到某種單體化合物。

2 丁香苦苷的肝臟疾病藥理作用

李永吉等[11]采用沉淀法制備SH-NPs，以異硫氰酸熒光素為熒光標記物，采用流式細胞儀研究Hep G2.2.15細胞對SH-NPs的攝取機制，制備一種肝臟靶向給藥制劑，進一步提高其抗乙肝病毒的能力。秋水仙素與氯喹對Hep G2.2.15細胞攝取有抑制作用，且Hep G2.2.15細胞對SH-NPs的攝取與藥物濃度、孵育時間呈正相關，推斷Hep G2.2.15細胞對SH-NPs細胞的攝取機制為非特異性吸附內吞。李永吉等[12]將Wistar大鼠尾靜脈注射給予丁香苦苷和丁香苦苷PEG-PLGA-NPs后，對具有抗乙肝病毒作用的丁香苦苷單體和丁香苦苷PEG-PLGA-NPs納米粒進行藥動學比較。結果表明丁香苦苷單體與丁香苦苷PEG-PLGA-NPs 在大鼠體內過程均符合二室模型，丁香苦苷 PEG-PLGA-NPs溶液的T1 /2α和T1 /2β是丁香苦苷溶液的1.58倍和11.46倍，AUC是丁香苦苷溶液的2.40倍，進而說明經過PEG-PLGA-NPs修飾后提高了丁香苦苷藥物的生物利用度。

張喜武等[13]進行了丁香苦苷在體內抗鴨乙肝病毒的作用研究。篩選先天感染DHBV陽性浙江麻鴨，采用實時熒光定量PCR方法，將麻鴨隨機分為5組，分別是空白對照組、陽性對照組、丁香苦苷高、中、低劑量組，連續給藥15天后停藥觀察5天。在用藥0、5、10、15天及停藥后第5天靜脈取血及取肝臟組織進行病理組織切片，檢測血清DHBV-DNA含量。與空白對照組比較，丁香苦苷高、中劑量組的DHBV-DNA含量都明顯降低，有顯著性差異，并有改善肝臟炎癥反應的作用，作用的強弱與用藥劑量和用藥時間相關，但是低劑量組丁香苦苷未表現出明顯的上述作用。證實了丁香苦苷在鴨體內具有抗鴨乙肝病毒的作用和對DHBV引起的肝損傷具有保護作用。

隨后張喜武等[14]又進行了丁香苦苷固體脂質納米粒在鴨體內抗鴨乙肝病毒的作用研究。具體操作方法同丁香苦苷在體內抗鴨乙肝病毒的作用研究。其結果與空白對照組相比，丁香苦苷固體脂質納米粒高、中劑量組的 DHBV-DNA 含量都明顯下降，有顯著性差異，ALT、AST水平也明顯降低，并有減輕肝臟炎癥反應的作用，作用的強弱與用藥劑量相關，丁香苦苷固體脂質納米粒低劑量組未表現出明顯的上述作用。說明丁香苦苷固體脂質納米粒在鴨體內具有抗鴨乙肝病毒的作用以及對 DHBV 引起的肝損傷具有保護作用，但效果強于丁香苦苷單體。

因丁香苦苷成分較晚被發現具有抗肝臟肝炎病毒和肝損傷作用，其藥理作用的研究報道不如丁香葉提取物多，但其肝臟藥理作用已被證實，因此，基于丁香苦苷抗肝臟肝炎病毒作用，部分藥劑科研工作者已經開展了丁香苦苷肝臟靶向給藥系統研究，并且取得了階段性成果[15-18]。

3 結論

肝臟疾病多表現為病毒性肝炎和肝損傷，發病率高，尤其是病毒性肝炎，且我國是病毒性肝炎的高發國家，約占全世界的1/3。長期病毒性感染可發展為肝炎肝纖維化、肝硬化、肝腹水直至肝癌，是人類健康的主要殺手之一。國內大量實驗研究結果表明丁香葉的有效成分丁香苦苷不僅有抗病毒性肝炎和肝損傷的作用，還有殺傷肝癌細胞的作用，因此，對丁香苦苷的深入研究對于肝臟疾病具有重要的意義。

丁香葉歸經于肝臟，對于肝臟疾病具有較廣泛的治療作用，丁香苦苷為丁香葉中含量最高的有效成分，同樣對肝臟具有很好的治療作用，以及本課題組前期證實丁香苦苷具有天然的肝靶向的特點，《本草綱目》記載“丁香葉解酒毒”，進而說明丁香葉也應具有肝臟靶向性的潛質，明確二者之間的關系具有很重要的意義。丁香葉和丁香苦苷均有極強的苦味，是否因其具有苦味，致使丁香葉和丁香苦苷均具有肝臟的靶向性？或者因其具有環烯醚萜類結構具有肝臟的靶向性？因此，通過對本文的總結為本課題組今后的課題研究提供了更深的研究思路。

質量標志物由劉昌孝院士提出[19-23]，要求滿足五原則，即藥材、飲片以及中成藥均可溯源；藥材的專屬成分；結構清晰、可定性和定量；具有明確的藥效；復方配伍有效。因其以滿足抗乙型肝炎病毒藥效明確、環烯醚萜類結構成分已知、可溯源以及藥材專屬4個原則，因此，丁香苦苷有望成為丁香葉的質量標志物，進一步提高丁香葉的質量標準。