酶聯(lián)法在家畜尿液及組織中檢測(cè)瘦肉精的應(yīng)用

楊 丹

（鐵嶺縣市場(chǎng)流通事務(wù)服務(wù)中心，遼寧 鐵嶺 112000）

“瘦肉精”是一種類(lèi)似白色的結(jié)晶體粉末，味微苦，無(wú)臭。化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，只有溫度達(dá)到172℃才會(huì)分解。因此，普通的加熱方法難以將其毒性破壞。它并不是一種特殊的物質(zhì)，而是一類(lèi)簡(jiǎn)單的化學(xué)用品，是一種能加快瘦肉生長(zhǎng)的廉價(jià)藥物添加劑，只要是增加瘦肉率的物質(zhì)都可以稱(chēng)做“瘦肉精”。目前，檢測(cè)瘦肉精的方法有高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等。其中，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)是目前檢測(cè)家畜飼料、產(chǎn)品以及組織、尿液中瘦肉精的最常用、最快速的方法，即利用免疫學(xué)中的抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用，經(jīng)過(guò)化學(xué)方法將植物辣根過(guò)氧化物酶與克倫特羅結(jié)合，結(jié)合成酶偶聯(lián)克倫特羅。大多實(shí)驗(yàn)室采用“篩選”和“確證”相結(jié)合的方法進(jìn)行測(cè)定，通常以前兩種作為“確認(rèn)”方法，后兩種作為“篩選”方法，既可提高測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，又可處理數(shù)量較多的待測(cè)樣品。“瘦肉精”在不同組織中的殘留程度不同，注意測(cè)定時(shí)選取殘留量較高的組織。一般來(lái)說(shuō)，眼睛等組織的樣品中含有極少的殘留量，肌肉中的脂肪量相對(duì)較高，留量較高且容易處理，切記所有試劑及樣品在開(kāi)始檢測(cè)前必須回升至室溫。

1 酶聯(lián)法檢測(cè)家畜血液、尿液中的瘦肉精含量的測(cè)定

取新鮮血液，將其加入15毫升離心管，4000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘，取上清液。取1毫升血清樣品于50毫升離心管中，加入1毫升蒸餾水，振蕩5分鐘，4000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘，取上清液。

采集尿液，過(guò)濾或離心5分鐘，4000轉(zhuǎn)/分鐘，取上清液。

測(cè)定結(jié)果判定。判定陰陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)是以濃度1微克/升標(biāo)準(zhǔn)液的OD值，當(dāng)測(cè)定數(shù)據(jù)小于標(biāo)準(zhǔn)值時(shí)，判定為疑似陽(yáng)性，當(dāng)測(cè)定數(shù)據(jù)大于等于標(biāo)準(zhǔn)值標(biāo)準(zhǔn)值時(shí)，判定為疑似陰性。判定為疑似陽(yáng)性的樣品須通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行確證。大量數(shù)據(jù)表明尿液中可能含有瘦肉精，但并不能夠排除是否含有人為因素，而血液卻大不相同，血液是生物體內(nèi)的“根本”，可以大部分排除人為因素，防止“掉包”事件的發(fā)生。

2 酶聯(lián)法檢測(cè)家畜組織中的瘦肉精含量的測(cè)定

肉組織中瘦肉精的檢測(cè)，肉眼可以看出含瘦肉精的豬肉顏色較為鮮艷，顏色一般呈現(xiàn)出鮮紅色，但符合食品安全生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的豬肉的顏色則是淡紅色。含有瘦肉精的豬肉皮下脂肪層比健康的豬肉要薄很多，基本小于1厘米，因此切下來(lái)的肉也相對(duì)較軟。

毛發(fā)中瘦肉精的檢測(cè)，毛發(fā)較于其他部位的取材比較容易，且藥物代謝較慢可長(zhǎng)期存在，因此為毛發(fā)分析提供了一種擴(kuò)展的追溯性檢測(cè)了可能性。豬毛樣品在進(jìn)行鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解后，以鹽酸二苯拉林為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜可檢測(cè)定量。結(jié)果顯示此方法高靈敏度、強(qiáng)特異性，對(duì)完善瘦肉精檢測(cè)技術(shù)具有非凡意義。

肝臟中瘦肉精測(cè)定，肝臟中瘦肉精測(cè)定必須在室溫下進(jìn)行操作（23℃為最適溫度）。對(duì)于處理樣品中帶有低脂肪的組織肝或肉時(shí)，需進(jìn)行均質(zhì)、離心、混合、再離心等一系列步驟才可以獲得最終樣品。若樣品沒(méi)有完全粉碎，可能與鹽酸等試劑沒(méi)有進(jìn)行充分地混合，使提取的“瘦肉精”丟失了小部分，將會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低；在肝等實(shí)質(zhì)器官，若在采樣時(shí)采取了吸收“瘦肉精”能力較弱部位的樣本，也會(huì)導(dǎo)致最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低，由于操作過(guò)程的主觀原因，也可造成各種誤差。例如，加樣試劑不完全，一些試劑殘留在微孔的邊緣上，在加抗體溶液時(shí)不完全，加入標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品或基質(zhì)時(shí)，顯色底物試劑不完全，也可使最終結(jié)果不準(zhǔn)確。若在加樣時(shí)將液體濺入另一孔中，洗滌液濺入另一個(gè)位置，可能也會(huì)造成的酶標(biāo)板孔之間互相污染，會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。

綜上所述，要想使在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中真正的不再使用瘦肉精，就必要加強(qiáng)生豬在被宰前進(jìn)行尿檢工作，并對(duì)不符合食品質(zhì)量安全的養(yǎng)殖戶(hù)進(jìn)行嚴(yán)重的懲罰，以加強(qiáng)社會(huì)以及政府的大力支持。只有這樣才能將私自添加瘦肉精的違法行為被徹底制止，使人們所食用的豬肉變得愈加健康、安全。