植物內(nèi)源RNAi抑制CRISPR編輯效率

2019年3月14日，深圳大學莫蓓莘教授研究組以擬南芥為模式植物，系統(tǒng)評估了內(nèi)源RNAi對不同啟動子驅(qū)動的Cas9系統(tǒng)編輯效率的影響。研究結(jié)果顯示，組成型表達的強啟動子，如35S CaMV啟動子驅(qū)動的Cas9表達，受內(nèi)源RNAi的影響較大，而胚特異性表達的啟動子，如EC1.2啟動子驅(qū)動的Cas9表達，則不受內(nèi)源RNAi的影響。在擬南芥RNAi突變體rdr6、dcl2、dcl3、dcl4背景下，35S-Cas9系統(tǒng)的基因編輯效率較野生型（WT）背景下有顯著提高；基于此，利用人工miRNA（amiRNA）抑制擬南芥內(nèi)源RNAi通路關(guān)鍵基因RDR6，將amiR-RDR6與Cas9元件構(gòu)建在一起，可以有效提高35S-Cas9系統(tǒng)的基因編輯效率；同時，利用amiR-RDR6的發(fā)育表型，可有效地篩選不含Cas9 T-DNA插入的純合突變體。該研究為CRISPR/Cas9介導的農(nóng)作物基因編輯技術(shù)的改良提供了新思路。

相關(guān)研究結(jié)果在線發(fā)表在《Science China Life Science》上。