分泌性中耳炎伴腺樣體肥大患兒相關細胞因子的表達水平及臨床意義*

白治田 李慧陳煒 童敏 邱昌明

(1.榆林市第二醫院耳鼻咽喉科, 陜西 榆林719000；2.樂山市人民醫院耳鼻咽喉科, 四川 樂山 614000)

分泌性中耳炎(Otitis media with effusion，OME)是一種非化膿性炎性疾病，主要特征為耳積液及聽力下降，臨床又稱非化膿性中耳炎、滲出性中耳炎，以兒童較為常見。部分患兒在上呼吸道感染后出現聽力減退、耳悶脹感的主要癥狀[1]。國內外眾多研究證實OME的發病機制與免疫功能紊亂具有明顯的聯系。耳鼻喉科專家研究OME的免疫調節探尋OME發病機制已成為研究熱門[2]。IL-5是機體重要的免疫調節因子，具有分化、增殖、活化、趨化嗜酸性粒細胞的作用。Kim等[3]報道稱OME 患者中耳局部IL-5表達水平明顯增強，可能通過觸發堿性蛋白、嗜酸性粒細胞陽離子蛋白等細胞活性物質分泌，造成OME患兒病情遷延，久治不愈。在OME與白細胞介素的研究中，IL-6、IL-8也備受關注，其與機體的炎癥反應與免疫具有明顯的調節作用。IL-6能促進B淋巴細胞分化、生長，加快分泌免疫球蛋白，在早期OME參與防御反應，起到清除病原體及相關產物的作用[4]。IL-8作為一種重要的白細胞趨化因子，在眾多有關炎癥反應疾病的早期發揮重要作用[5]。本文探究OME與腺樣體肥大(adenoidal hypertrophy，AH)患兒IL-5、IL-6、IL-8的表達水平及臨床意義，為探尋分泌性中耳炎的免疫學發病機制提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年1月～2017年月于我們兩院診斷與治療的25例OME伴AH患兒、30例單純OME患兒、30例單純AH患兒以及25例正常兒童，分別設為OME伴AH組、單純OME組、單純AH組與對照組。腺樣體肥大通過鼻咽側位片確診，腺樣體/鼻咽腔比值>0.6[6]；分泌性中耳炎患兒耳鳴、耳悶及聽力下降；鼓膜內陷、積液征以及活動受限；純音測聽結果為傳導性聾；聲導抗結果失去鐙骨[7]肌反射，鼓室壓圖為“B”型；鼓室穿刺有明顯積液抽出。排除標準：腺樣體機械性阻塞；鼻竇炎、鼻炎；支氣管哮喘、蕁麻疹、濕疹、變應性鼻炎等過敏性疾病。四組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 四組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between the four groups

1.2 方法 單純AH及OME伴AH患兒留取腺樣體切除的腺樣體組織，于-70℃恒溫冰箱保存。腺樣體組織IL-5、IL-6、IL-8水平均采用ELISA法檢測，常溫環境下進行腺樣體組織解凍。解凍后切取小塊，用濾紙將標本組織液吸干，隨后進行稱重，并將保證檢測樣本腫瘤50～60mg并進行嚴格標記。隨后制作組織勻漿，腺樣體組織采用無菌蒸餾水按1：20比例稀釋，通過勻漿機制作腺樣體勻漿，離心15min(3500r/min)取上清液待檢。所有受試者均于清晨采集空腹肘靜脈血，每人2ml，保存于含EDTA的抗凝試管中，離心10min(3500r/min)取上清液待檢，留取血清標本并放置于-80℃恒溫箱待檢。血清IL-5、IL-6、IL-8水平均采用ELISA法檢測。均使用人IL-5、IL-6、IL-8ELISA快速檢測試劑盒，試劑盒購自美國強生公司，所有操作均按試劑盒說明書進行。包括標準品的梯度稀釋、加樣、加檢測抗體、洗板、加酶、顯色、終止反應、讀板等步驟，參照文獻[8]。通過標準品所測數值繪制標準曲線，根據標準曲線將樣品測得的OD值對應計算出IL-5、IL-6、IL-8含量。

1.3 統計學分析 數據分析采用SPSS20.00統計軟件，以百分率(%)形式表示計數資料，行2檢驗，計量資料以均數±標準差表示，采用獨立樣本t檢驗，多組比較采用F檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

各組腺樣體及血清IL-5、IL-6、IL-8水平比較 OME伴AH組腺樣體IL-5、IL-6水平高于單純AH組(P<0.05)； OME伴AH組與單純OME組血清IL-5、IL-6水平高于單純OME組與對照組，腺樣體IL-5、IL-6水平均高于血清，檢測結果(P<0.05)；OME伴AH組與單純OME組、單純OME組與對照組IL-5、IL-6水平差異無統計學意義(P>0.05)；OME伴AH組、單純OME組腺樣體、血清IL-8水平差異無統計學意義(P>0.05)；三組患者血清IL-8水平差異無統計學意義(P>0.05)，但均顯著高于對照組(P<0.05)，見表2～4。

表2 各組腺樣體及血清IL-5水平比較Table 2 Comparison of the levels of IL-5 in adenoids and serum in each group

注：與OME伴AH組比較，①P<0.05，與單純OME組比較，②P<0.05，與單純AH組比較，③P<0.05

表3 各組腺樣體及血清IL-6水平比較Table 3 Comparison of the levels of IL-6 in adenoids and serum in each group

注：與OME伴AH組比較，①P<0.05，與單純OME組比較，②P<0.05，與單純AH組比較，③P<0.05

表4 各組腺樣體及血清IL-8水平比較Table 4 Comparison of the levels of IL-8 in adenoids and serum in each group

注：與OME伴AH組比較,①P<0.05，與單純OME組比較,②P<0.05，與單純AH組比較,③P<0.05

3 討論

近年來國內外致力于關于OME發病機制的研究，在免疫學領域取得了一定的研究成果，包括異常的腺樣體免疫功能；細胞因子發生免疫調節作用；變態反應；自身免疫調節障礙；腫瘤壞死因子以及一氧化氮等在分泌性中耳炎免疫學發病機制具有重要作用[9]。其中關于體液遞質-細胞因子(cytokine，CK)受到較高的重視[10]。CK屬于多肽或糖蛋白，分子量較低，主要表現為細胞分化、生長的調節作用，同時對炎癥反應、免疫應答均具有介導和調節作用，已涉及IL-1β、IL-2、IL-5、IL-8等多種白細胞介素[11]。腺樣體病變引發OME的可能機制包括加快咽鼓管逆流、阻塞咽鼓管、貯藏致病微生物、變態反應以及免疫異常等[12]。

IL-5即嗜酸性粒細胞分化因子，由NK細胞與CD+T細胞產生，是調節B細胞晚期分化的細胞因子，能促進嗜酸性粒細胞的生物學活性，并誘導其增殖與分化，有效激活、趨化成熟嗜酸性粒細胞，還能大幅延長其存活時間，抑制凋亡，同時對黏附分子的表達具有上調作用，促進嗜酸性粒細胞、血管內皮細胞的黏附反應[13-14]。馮國飛等[15]研究發現，IL-5水平的上升加快腺樣體局部組織嗜酸性粒細胞增殖、分化以及趨化功能，促進炎性介質分泌的增加，進一步出現腺體分泌亢進及毛細血管滲漏現象，發生上呼吸道變應性炎癥。本研究結果也顯示，OME伴AH組患兒腺樣體IL-5局部高表達。IL-6在CK中能夠發揮多種作用，主要作用是促進B細胞增殖、分化，同時誘導B細胞分泌抗體，促進激活T細胞增殖[16]。謝明等[17]采用ELISA法，測定OME患者中耳滲出液中IL-6和TNF-α濃度，結果提示早期滲出液中以保護性體液遞質為主，參與機體防御反應，有利于清除病原體及產物，在病程的后期,隨著原致病因素的削弱或消失，IL-6 的產生減少，濃度下降,并解除了對 TNF-α抑制作用，TNF-α的產生增多。本研究結果表示，OME伴AH組腺樣體IL-5、IL-6水平顯著高于單純AH組。提示IL-6在早期參與機體防御反應，推測OME早期中耳積液的形成可能與IL-6 的高表達相關。OME伴AH組與單純OME組血清IL-5、IL-6水平顯著高于單純OME組與對照組，腺樣體IL-5、IL-6水平均高于血清檢測結果。提示隨著腺樣體變應性炎癥的加重可能累及中耳黏膜，引發局部中耳發生變應性炎癥，進而出現中耳滲液。

IL-8可使中性粒細胞內的蛋白質發生磷酸化，游離鈣離子濃度增加，細胞發生脫顆粒、釋放儲存酶，引起呼吸暴發,生成活性氧代謝產物，造成咽鼓管和中耳黏膜水腫，增加毛細血管的通透性，破壞纖毛黏液排泄系統，使積液產生并滯留于中耳腔內，故OME早期MEE的形成與IL-8的高表達直接相關[18-20]。本研究結果表示，患兒IL-8均顯著高于對照組，提示OME、 AH均有明顯的炎癥反應，而腺樣體與血清水平無差異還需進一步探究。

4 結論

IL-5、IL-6在OME伴AH、單純AH患兒腺樣體表達明顯高于血清檢測結果，提示其在OME的發生及發展中發揮著重要作用。