忌酸顆粒的藥物依賴性研究

王彥禮，馬旭冉，劉佳星，宋紅新，楊偉鵬

(中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

忌酸丸記載于清代醫(yī)家何書田著《救迷良方》中，在林則徐的禁煙運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮了顯著作用[1]，經(jīng)現(xiàn)代考證，忌酸丸組成為東洋參15 g，炒白術(shù)9 g，白當(dāng)歸7.5 g，真川柏12 g，川黃連12 g，炙甘草9 g，廣陳皮7.5 g，生柴胡10.5 g，明天麻9 g，廣木香7.5 g，炙黃芪9 g，綠升麻0.5 g，沉水香7.5 g，生附子2.1 g，鴉片膏16.8 g組成，各藥以面糊為丸服用，具有溫補(bǔ)脾腎，益氣升陽，滋陰平肝，制癮戒毒的功效。

忌酸顆粒是根據(jù)戒毒古方忌酸丸進(jìn)行組方優(yōu)化而成，在忌酸丸原方基礎(chǔ)上，去鴉片膏，用西洋參等量替代東洋參，加洋金花0.5 g，酸棗仁12 g，延胡索12 g，制成顆粒制劑后，成人日用量為27 g生藥/日，用于阿片類毒品急性戒斷之后稽延性癥狀的治療，經(jīng)藥效學(xué)研究證明具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、提高機(jī)體免疫力、止瀉等作用。

藥物依賴性是指帶有強(qiáng)制性的渴求、追求與不能間斷使用某種或某些藥物或物質(zhì)。藥物依賴是由成癮物質(zhì)和肌體相互作用而產(chǎn)生的精神與軀體狀況，以強(qiáng)制性地使用藥物或物質(zhì)來取得特定的心理效應(yīng)，并借此避免戒斷綜合征的不適感受。對(duì)于新藥尤其是戒毒相關(guān)新藥的研究，為發(fā)現(xiàn)其是否存在潛在的依賴性，應(yīng)進(jìn)行藥物依賴性的試驗(yàn)。所以本研究通過自然戒斷試驗(yàn)和條件性位置偏愛試驗(yàn)來考察和評(píng)價(jià)忌酸顆粒產(chǎn)生藥物依賴性的潛力和相對(duì)于嗎啡的依賴程度。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

SD大鼠， SPF級(jí)，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證編號(hào):SCXK(京)2012-0001。行為學(xué)測試前在測試實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)3 d。

1.2 藥品及試劑

受試藥物：忌酸顆粒，由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所中藥制劑研究中心提供。用無菌注射用水配成所需濃度溶液?，F(xiàn)用現(xiàn)配，常溫保存。鹽酸嗎啡，青海制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20150505。

1.3 儀器

大鼠條件性位置偏愛(CPP)裝置(美國，Med Associates Inc.)由電腦、主機(jī)和訓(xùn)練箱組成。訓(xùn)練箱的大小為70 cm×22 cm×22 cm，被分割為3個(gè)部分，分別為黑盒、灰盒和白盒，灰盒位于黑、白盒之間。黑盒的底部為1 cm寬的鐵絲柵欄，白盒的底部為1 cm見方的鐵絲網(wǎng)，灰盒底部為灰色塑料底板。黑盒和灰盒之間、白盒和灰盒之間均有可打開的門。訓(xùn)練箱分別放在具有通風(fēng)和照明裝置的隔音箱內(nèi)。實(shí)驗(yàn)過程中的數(shù)據(jù)記錄由計(jì)算機(jī)自動(dòng)完成。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠條件性位置偏愛試驗(yàn)

分四步進(jìn)行，采用無偏平衡設(shè)計(jì)[2]。第一步:(Test-0)天然傾向性測定及分組：在第1天，將大鼠放入隔門打開的條件性位置偏愛訓(xùn)練箱內(nèi)，測定大鼠在 15 min內(nèi)在各盒停留時(shí)間，以此判斷大鼠的天然傾向性。計(jì)算大鼠在黑、白盒停留時(shí)間的差值的均數(shù)，去除天然傾向性比較大的(黑、白盒停留時(shí)間大于或接近200 s)。適合要求的45只大鼠共分為5組，每組9只。分10籠飼養(yǎng)。分組依據(jù)：各組大鼠的訓(xùn)前條件性位置偏愛得分值接近，組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5個(gè)組別包括：溶劑對(duì)照組，嗎啡組(陽性藥對(duì)照)組，受試藥物低、中、高三個(gè)劑量組。

第二步:條件性位置偏愛訓(xùn)練。第1、3、5、7天，陽性藥物組和受試藥物組動(dòng)物灌胃給予藥物，然后放入CPP設(shè)備的伴藥盒內(nèi)停留45 min；第2、4、6、8天，灌胃給予溶劑放入CPP設(shè)備的非伴藥盒內(nèi)停留45 min。溶劑對(duì)照組均灌胃給予溶劑，其它處置方式與受試藥物組相同。

第三步:(Test-1)條件性位置偏愛效應(yīng)的測定：在第6天, 將各組動(dòng)物放入CPP測試箱內(nèi)測試15 min，記錄大鼠在伴藥盒和非伴藥盒內(nèi)停留時(shí)間和停留次數(shù)。以各組大鼠給藥后伴藥盒與非伴藥盒停留時(shí)間差值，作為評(píng)價(jià)條件性位置偏愛效應(yīng)形成與否的得分。根據(jù)得分情況判斷受試藥物的精神依賴性的有無和相對(duì)強(qiáng)度。

大鼠隨機(jī)分為5組，每組9只，♀♂各半，5組分別為NS對(duì)照組(皮下注射)，嗎啡對(duì)照組(皮下注射，10 mg/kg)，忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg。先進(jìn)行基礎(chǔ)值測試，然后進(jìn)行分組，然后按照以上劑量隔天給予大鼠，共4次，為期8天的訓(xùn)練。訓(xùn)練結(jié)束之后進(jìn)行測試位置偏愛。

2.2 大鼠自然戒斷試驗(yàn)

大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，♀♂各半，5組分別為NS對(duì)照組(皮下注射)，嗎啡對(duì)照組(皮下注射，40 mg/kg)，忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg。以上劑量每天分3次經(jīng)口灌胃給藥(8:00，13:00，18:00)，連續(xù)給藥30 d，第31天停止給藥。第30天給藥結(jié)束之后每天稱量大鼠體質(zhì)量3次(8:00，14:00，20:00)，連續(xù)稱量8 d。以給藥前一天體質(zhì)量均值為基礎(chǔ)值，計(jì)算各組戒斷后各天體質(zhì)量變化率。

2.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均值的比較采用成組t檢驗(yàn)或方差分析，組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較使用重復(fù)測量方差分析。當(dāng)P<0.05時(shí)認(rèn)為均值差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 忌酸顆粒給藥訓(xùn)練大鼠的條件性位置偏愛得分

圖1 忌酸顆粒給藥訓(xùn)練大鼠的條件性位置偏愛得分

t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，嗎啡訓(xùn)練后的CPP值顯著升高(P<0.05)，而生理鹽水(P>0.05)、低劑量組(P>0.05)、中劑量組(P>0.05)和高劑量組(P>0.05)訓(xùn)練后CPP值無顯著差異，提示嗎啡訓(xùn)練能夠形成大鼠CPP，而忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組不能夠訓(xùn)練形成CPP。

在研究劑量范圍內(nèi)(忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥大鼠沒有形成條件性位置偏愛。

3.2 忌酸顆粒給藥大鼠自然戒斷后的體質(zhì)量變化

圖2 忌酸顆粒給藥大鼠自然戒斷后的體質(zhì)量變化

采用重復(fù)測量方差分析，以測試時(shí)間作為組內(nèi)因素(自然戒斷后第1～7天)，以處理方式(生理鹽水組、嗎啡組、忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組)作為組間因素，結(jié)果顯示隨著自然戒斷時(shí)間的延長，大鼠體質(zhì)量顯著增高(時(shí)間效應(yīng)：F6,38=68.775,P<0.001)，且時(shí)間和分組無交互作用(分組×?xí)r間交互效應(yīng)：F6.38=1.522，P>0.05)，說明時(shí)間因素(即戒斷后1～7 d)的作用不隨分組的不同而不同；同時(shí)結(jié)果顯示組間效應(yīng)(F4,43=27.404，P<0.001)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明生理鹽水、嗎啡、忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量對(duì)大鼠自然戒斷后體質(zhì)量變化具有顯著影響。Post-hoc分析顯示，生理鹽水組(P<0.001)、低劑量組(P<0.001)、中劑量組(P<0.001)和高劑量組(P<0.001)的體質(zhì)量變化與嗎啡組相比具有顯著性差異。此外，生理鹽水組、低劑量、中劑量和高劑量組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。進(jìn)一步分析表明自然戒斷后第1～7天，低劑量組、中劑量組、高劑量組和生理鹽水組與嗎啡組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(第1天：F4,43=47.415，P<0.001； 第2天：F4,43=50.574，P<0.001； 第3天：F4,43=32.148，P<0.001；第4天：F4,43=21.103，P<0.001；第5天：F4,43=18.557，P<0.001；第6天：F4,43=20.826，P<0.001；第7天：F4,43=11.855，P<0.001)。此外，低劑量、中劑量和高劑量組與生理鹽水間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。說明嗎啡組在自然戒斷后體質(zhì)量變化明顯低于其他各組。

在研究劑量范圍內(nèi)(忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥30 d戒斷之后大鼠的體質(zhì)量沒有出現(xiàn)明顯的下降。

4 討論

忌酸丸具有溫補(bǔ)脾腎，益氣升陽，滋陰平肝，制癮戒毒的功效，用于久吸阿片成癮之脾腎不足，氣虛陽陷，而見倦怠乏力，食少嘔惡，大便溏瀉，萎黃羸瘦，心煩頭痛，周身痠疼，頭暈?zāi)垦?，盜汗遺精，脈虛無力者。忌酸顆粒是基于戒毒古方忌酸丸進(jìn)行處方優(yōu)化而制成，即在忌酸丸原方基礎(chǔ)上，去鴉片膏，用西洋參等量替代東洋參，加洋金花、酸棗仁、延胡索，用于阿片類毒品急性戒斷之后稽延性癥狀的治療。相比于目前上市的戒毒藥物多針對(duì)急性戒斷癥狀的治療[3]，忌酸顆粒對(duì)于急性戒斷癥狀之后出現(xiàn)的稽延性癥狀具有較好的治療作用。

世界衛(wèi)生組織將藥物依賴性分為精神依賴性和身體依賴性。精神依賴性又稱心理依賴性，凡能引起令人愉快意識(shí)狀態(tài)的任何藥物即可引起精神依賴性，精神依賴者為得到欣快感而不得不定期或連續(xù)使用某些藥物。主要有鎮(zhèn)靜催眠藥，如安定、舒樂安定、巴比妥類、甲喹酮等。身體依賴性也稱生理依賴性，用藥者反復(fù)地應(yīng)用某種藥物造成一種適應(yīng)狀態(tài)，停藥后產(chǎn)生戒斷癥狀，使人非常痛苦，甚至危及生命。常見于麻醉性鎮(zhèn)痛藥(多為阿片類)，如嗎啡、海洛因、哌替啶、曲馬多、美沙酮、丁丙諾啡(布諾啡)等，其中美沙酮和布諾啡因戒斷癥狀輕較而用于戒毒時(shí)的“替代遞減法”。能引起依賴性的藥物常兼有精神依賴性和身體依賴性，阿片類和催眠鎮(zhèn)痛藥在反復(fù)用藥過程中，先產(chǎn)生精神依賴性，后產(chǎn)生身體依賴性。

阿片類藥物、鎮(zhèn)靜催眠藥等長時(shí)間應(yīng)用易產(chǎn)生成癮性[4]，藥物或行為引起的欣快感強(qiáng)化了腦內(nèi)愉快中樞的記憶, 形成一種獎(jiǎng)賞機(jī)制,可使成癮者產(chǎn)生難以抑制的渴求感，臨床表現(xiàn)主要有精神依賴性和身體依賴性。忌酸顆粒中含有洋金花、制附子、延胡索和酸棗仁等具有鎮(zhèn)痛和安神作用的中藥，有必要在肯定藥效作用的同時(shí)考察人體對(duì)其的藥物依賴性。

條件性位置偏愛試驗(yàn)是用來評(píng)價(jià)精神依賴性的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。在本項(xiàng)研究中，通過大鼠的位置偏愛試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在研究劑量范圍內(nèi)(忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥大鼠沒有形成條件性位置偏愛。提示在灌胃給藥方式下，在條件性位置偏愛的模型中，研究劑量范圍內(nèi)的忌酸顆粒無明顯的精神依賴性。自然戒斷試驗(yàn)是評(píng)價(jià)軀體依賴性的實(shí)驗(yàn)。通過大鼠的軀體依賴性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在研究劑量范圍內(nèi)(忌酸顆粒低、中、高三個(gè)劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥30 d戒斷之后大鼠的體質(zhì)量沒有出現(xiàn)明顯的下降。提示在灌胃給藥方式下，在自然戒斷的模型中，研究劑量范圍內(nèi)的忌酸顆粒無明顯的軀體依賴性。

忌酸顆粒作為來源于古方的戒毒候選藥物，其成藥性研究應(yīng)側(cè)重于藥效學(xué)和安全性，本次研究和前期研究證明忌酸顆粒對(duì)于稽延性癥狀相關(guān)藥效指標(biāo)具有較好的治療作用，并且無明顯的藥物依賴性，初步說明其具有較好的新藥開發(fā)的潛質(zhì)，還應(yīng)結(jié)合其他安全性研究進(jìn)行綜合評(píng)估。