密度儀在血液制品生產中的應用

馬 杰 ，陳 川 ，郭 佳

（1四川大學化學工程學院 四川 成都 610041）

（2成都蓉生藥業有限責任公司 四川 成都 610041）

密度儀在血液制品生產中的應用

馬 杰1，陳 川2，郭 佳2

（1四川大學化學工程學院 四川 成都 610041）

（2成都蓉生藥業有限責任公司 四川 成都 610041）

目的：通過測定供試品密度的物理性質，建立一種密度與蛋白含量相關聯的測定方法，使生產過程中蛋白含量測定簡便、快速，該方法在生產中質量可控。方法：用凱氏定氮法分別十次測量同一批次人血白蛋白配制后原液、同一批次靜注人免疫球蛋白（pH4）配制后原液，分別取平均值，作為工作標準品，建立密度與蛋白含量標準曲線。結果：利用密度儀測定人血白蛋白試驗樣品，靜注人免疫球蛋白（pH4）試驗樣品，各10個批次，并與凱氏定氮法測定結果對比，發現密度儀法測定結果穩定、重復性好，RSD≤0.5%,與凱氏定氮法法對比，相對標準偏差為99%～101%。人血白蛋白實驗品t雙尾檢驗P=0.588，靜注人免疫球蛋白（pH4）實驗品t雙尾檢驗P=0.820。結論：在生產人血白蛋白、靜注人免疫球蛋白過程中，密度儀操作簡便快捷，并與凱氏定氮法結果無顯著性差異，方便在生產過程中進行質量控制，大大的提高了工作效率，適合推廣應用。

密度儀；蛋白含量；凱氏定氮法

1 引言

蛋白質含量的質量控制在人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）生產過程中是非常重要的，測定蛋白質含量的方法主要有凱氏定氮法、福林酚法（Lowry法）、雙縮脲法、考馬斯亮藍法、紫外-可見分光光度法等[1]。凱氏定氮法作為藥典規定的方法，具有高準確度和高精確度的特點，使該方法在血液制品生產過程中被廣泛使用，但凱氏定氮法試驗操作復雜、繁瑣，周期長、速度慢且使用的硫酸具有一定的腐蝕性會對試驗人員具有一定的危害性，故無法滿足生產過程中蛋白含量的質量控制。為了解決這一矛盾，筆者通過實驗實踐，發現密度儀測定蛋白含量可以很好的解決這一問題。

2 設備與材料

2.1 DMA4100M型密度儀，生產廠家：奧地利Anton paar。該密度儀利用U型振蕩管在電磁場的作用下，根據振蕩頻率的強弱測定溶液的密度。

2.2 人血白蛋白超濾配置后原液，通過低溫乙醇法分離精制超濾所得。

2.3 靜注人免疫球蛋白（pH4）超濾配置后原液，通過低溫乙醇法分離精制超濾所得。

2.4 人血白蛋白試驗樣品。

2.5 靜注人免疫球蛋白（pH4）試驗樣品。

3 方法

3.1 建立標準曲線

將材料1.2和1.3分別進行凱氏定氮法試驗10次，得出結果取平均值，作為工作標準品，分別是工作標準品1，工作標準品2。將這兩個工作標準品各取50ml，用純化水1:1稀釋，備用。根據密度儀產品說明書，將工作標準品1注入密度儀中，輸入已知的蛋白含量值，然后將稀釋一倍的工作標準品1注入密度儀中，輸入蛋白含量值，這樣根據兩點確定一條直線的原理就建立了人血白蛋白標準曲線。同理，可用工作標準品2和稀釋液建立靜注人免疫球蛋白（pH4）標準曲線。

3.2 標準曲線精確度確認

分別將工作標準品1、2用純化水進行80%、70%、60%梯度稀釋，然后用對應的曲線檢測蛋白含量，所得結果和理論值對比。

3.3 重復性試驗確認

分別用相對應的標準曲線檢測同一批次人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）實驗樣品，各5次，所得結果求其相對標準偏差。

3.4 用相對應的標準曲線分別檢測材料1.4和1.5各10個批次，所得結果與凱氏定氮法檢測結果相對比。

4 結果

4.1 標準曲線精確度確認，結果如表1，表2。

表1 人血白蛋白標準曲線準確度確認結果

表2 靜注人免疫球蛋白（pH4）標準曲線準確度確認結果

表1、表2說明密度儀測定的人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）中間精密度高，回收率均在99%～101%。

4.2 重復性試驗確認，實驗結果如表3、表4。

表3 人血白蛋白重復性試驗確認結果

表4 靜注人免疫球蛋白（pH4）重復性試驗確認結果

表3、表4說明密度儀測定的人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）重復性好、離散性小。

4.3 人血白蛋白試驗樣品、靜注人免疫球蛋白（pH4）試驗樣品各10個批次，分別用凱氏定氮法與密度儀法測定蛋白含量，結果如表5、表6。

表5 人血白蛋白兩種檢測方法檢測結果對比

表6 靜注人免疫球蛋白（pH4）兩種檢測方法檢測結果對比

表5、表6結果表明：凱氏定氮法檢測的人血白蛋白試驗樣品和靜注人免疫球蛋白（pH4）的含量結果與密度儀檢測結果的回收率在99%～101%，回收率很好，表明密度儀檢測人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）重復性好，精準度高。對實驗結果分別進行t檢驗，人血白蛋白P（雙尾）=0.588，靜注人免疫球蛋白（pH4）P（雙尾）=0.820，P〉0.05，t雙尾臨界=2.26，說明密度計測定這兩種蛋白質含量的結果是準確可靠的。

5 討論

凱氏定氮法檢測蛋白質含量是國際上公認的標準方法，具有準確度高、精準度高的特點，但也有操作復雜繁瑣、周期長、速度慢等缺點。密度法測蛋白質含量只需幾分鐘，可以大大提高蛋白質檢測的效率，對血液制品生產過程中的超濾、濃縮、配制等過程質量控制得到顯著提高。由于密度儀法精密度非常好，在生產過程中用密度法測定蛋白含量，還可以降低不同批次間的差異性，到達良好的成品分裝效果，保證產品不同批次之間的均一性。然而，密度儀法專屬性較差，如鈉離子含量，辛酸鈉含量，以及麥芽糖含量對密度影響較大，即使在相同蛋白含量下，隨著這些輔料、穩定劑的增加，密度值也隨之增高，所以在制備標準品及標準曲線時，應將各種輔料及穩定劑配制成生產過程中制品配制的相似濃度，使制品除蛋白物質以外其他成分含量一致，以排除非蛋白質物質的對實驗、儀器的干擾。

[1]中華人民共和國藥典2015年版四部 [S].中國醫藥科技出版社，2015：96-98.

[2]楊曉東，張金，何彥林，張磷. 密度計在血液制品生產中的應用 [J].現代檢驗醫學雜志，2007，11(3)：72-73.

TQ464.56 【文獻標識碼】A 【文章編號】1009-5624（2018）01-0229-03