N-Cadherin、sCD40水平變化與多發性骨髓瘤患者臨床分期的關聯性分析

賈新勇，郭改玲，王秋平，申燕

(漯河醫學高等專科學校第二附屬醫院檢驗科，河南 漯河462300)

多發性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）是惡性漿細胞病的一種常見類型，該病起病緩慢、病情隱匿，且骨髓瘤細胞增生程度、浸潤程度及部位不同，致使臨床表現復雜，缺乏特異性。MM不同臨床分期預后不同，治療方案的選擇及實施亦有差異，故對MM進行準確的臨床分期，可為治療方案的制定提供客觀依據，對改善患者預后極其重要。近年隨臨床對MM研究深入發現，骨髓微環境與細胞因子在其發病及進展中均有重要參與[1，2]。神經鈣黏素（N-Cadherin）是鈣黏附分子家族中的一員，其介導的細胞與細胞間黏附調節著細胞行為，故研究發現N-Cadherin可通過介導成骨細胞及骨髓瘤細胞相互黏附而對成骨細胞分化產生抑制作用，最終導致骨質疏松，參與骨髓瘤黏附、遷移、定居[3]。白細胞分化抗原40（CD40）為腫瘤壞死因子受體超家族Ⅰ型跨膜蛋白，其與表達在CD4+T細胞上的配體結合后可發揮免疫調節作用，同時參與炎癥反應等生理病理過程，且研究發現MM患者血清可溶性白細胞分化抗原40（sCD40）呈異常表達狀態[4]。本研究選取我院79例MM患者，以探討N-Cadherin及血清sCD40與其臨床分期的相關性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年8月-2017年9月我院收治的79例MM患者設為觀察組，均符合《中國多發性骨髓瘤工作組.中國多發性骨髓瘤診治指南(2013年修訂)》中MM診斷標準[5]，其中男35例，女 44 例，年齡 36～67 歲，平均（50.22±10.43）歲；ISS臨床分期[6]：Ⅰ期22例，Ⅱ期29例，Ⅲ期28例。研究經醫院倫理委員會審核同意，且入組對象均知情同意；排除妊娠期或哺乳期女性、合并自身免疫性疾病或其他惡性腫瘤疾病。

1.2 方法

1.2.1 N-Cadherin表達 穿刺抽取0.2ml骨髓液樣本，注入肝素抗凝管內，取50μl骨髓液置入流式試管，同時加入單克隆抗體，避光環境下放置20min，再于試管內加入1ml紅細胞裂解液，室溫下放置10min；離心（1000r/min，5min）后舍棄上清液，并于試管中注入1.5ml 0.9%氯化鈉溶液，再離心（1000r/min，5min）棄去上清液；試管內加入 500μl 0.9%氯化鈉溶液，上機待檢，儀器為Epics XL型流式細胞儀（美國Beckman Coulter公司），以CD45/SSC設門法直接檢測，計算N-Cadherin（CD325）陽性細胞在CD38+/CD138+細胞中比例。

1.2.2 血清sCD40水平 抽取空腹狀態下肘靜脈血 3ml，離心（3000r/min，10min）后上層血清液立即送檢或-70℃凍存待檢；以酶聯免疫吸附法檢測血清sCD40水平，儀器為Bio-Rad iMark酶標儀（美國Bio-Rad公司），試劑盒購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 觀察指標 ⑴對比MM不同臨床分期之間NCadherin表達及血清sCD40水平，分析N-Cadherin表達及血清sCD40水平與MM臨床分期的相關性；⑵根據不同臨床分期選擇手術、化療、放療等方案進行治療，根據預后情況分為預后良好組（n=53）及預后不良組（n=26），治療有效、疾病轉歸或病情穩定為預后良好，治療無效、疾病進展為預后不良。

1.4 統計學方法 以SPSS 18.0軟件統計分析，計量資料（±s）表示，t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，采用Spearman進行相關性分析，計數資料 n（%）表示，χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床分期N-Cadherin表達及血清sCD40水平 MM不同臨床分期N-Cadherin表達無顯著差異（P＞0.05），血清 sCD40水平隨臨床分期增加呈增高趨勢，兩兩比較差異具有統計學意義 （P＜0.05），見表 1。

表1 不同臨床分期N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

表1 不同臨床分期N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期F值P值例數 N-Cadherin（%） sCD40（pg/ml）22 29 28/ /10.72±2.18 11.54±1.19 11.17±1.63 5.514 0.227 236.21±36.24 416.22±62.25 651.46±83.16 256.04 0.000

2.2 N-Cadherin表達及血清sCD40水平與MM臨床分期的關聯性 N-Cadherin表達與MM臨床分期無明顯相關性（P＞0.05），血清sCD40水平與MM床分期呈明顯正相關（P＜0.05），見表 2。

表2 N-Cadherin表達及血清sCD40水平與MM臨床分期的關聯性（n=79）

2.3 不同預后治療前后N-Cadherin表達及血清sCD40水平 治療前，預后良好組N-Cadherin表達與預后不良組比較差異無統計學意義（P＞0.05），血清sCD40水平低于預后不良組（P＜0.05）；治療后，預后良好組N-Cadherin表達及血清sCD40水平較治療前顯著下降（P＜0.05），預后不良組N-Cadherin表達及血清sCD40水平較治療前無顯著差異（P＞0.05），見表 3。

表3 不同預后治療前后N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

表3 不同預后治療前后N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05。

預后 例數N-Cadherin（%） sCD40（pg/ml）預后良好組預后不良組t值P值53 26/ /治療前11.09±1.35 11.52±1.27 1.356 0.179治療后 治療前 治療后6.35±1.04*10.89±1.25 17.043 0.000 414.25±53.63 574.69±62.22 10.305 0.000 285.31±20.14*565.71±65.87 29.636 0.000

3 討論

MM是血液系統常見腫瘤疾病，由于其治療方案的制定與實施主要由臨床分期決定，故早期診斷并進行準確的臨床分期對指導臨床治療、促進患者預后改善至關重要[7]。目前，MM發病機制尚不清楚，可能與細胞內信號通路傳導異常、骨髓微環境異常等因素有關，因此對MM診斷及臨床分期可從此方向切入研究。

MM患者多伴有骨質破壞，且研究證實骨髓瘤病主要由成骨細胞及破骨細胞功能失調所致[8，9]。動物學試驗則發現，N-Cadherin可表達于成骨細胞，且其過度表達會抑制成骨細胞分化，而在沉默N-Cadherin表達后，可顯著削弱其對骨細胞標志物生成的抑制作用[10]。上述間接提示N-Cadherin可能參與MM發生。此外，亦有研究指出，在MM微環境中，表達于骨髓瘤細胞與基質細胞的NCadherin可介導二者相互作用，以維持MM干細胞靜息狀態，誘導疾病復發[11-13]。細胞因子網絡對骨髓瘤細胞生長、發育有調節作用，腫瘤壞死因子-α可誘導骨髓瘤細胞產生白介素-6，并與白介素-6形成細胞因子網絡，以發揮生物學效應。研究發現，骨髓瘤細胞中CD40及其配體共表達對白介素-6分泌及調節腫瘤壞死因子-α功能具有重要作用，提示CD40參與亦有可能參與MM發病過程[14-16]。本研究中，觀察組N-Cadherin表達及血清sCD40水平較高，證實N-Cadherin及sCD40在MM發病中有重要參與作用。研究結果還顯示，NCadherin表達與MM臨床分期無明顯相關性 （P＞0.05），而血清sCD40水平隨臨床分期增加而上升，呈明顯正相關（P＜0.05），提示 N-Cadherin 過度表達雖參與了MM的發生，但不隨臨床分期而變化，血清sCD40水平則可用于MM臨床分期的診斷與評估。此外，由于預后不良患者多為Ⅲ期患者，且N-Cadherin表達與臨床分期無明顯關聯性，而血清sCD40水平則與臨床分期密切相關，故治療前不同預后MM患者N-Cadherin表達無差異，血清sCD40水平有差異。此外，治療后預后良好組NCadherin表達及血清sCD40水平較治療前降低（P＜0.05），預后不良組則無明顯變化（P＞0.05），提示N-Cadherin及血清sCD40隨疾病轉歸其異常表達有恢復正常的趨勢，故其水平變化預示著MM預后轉歸情況。

綜上，血清sCD40水平隨MM臨床分期增加呈升高趨勢，與臨床分期呈明顯正相關，且可評估預后情況，N-Cadherin表達則與MM臨床分期無明顯相關性，N-Cadherin表達及血清sCD40水平隨預后轉歸而降低，故聯合檢測可為臨床診斷、疾病分期或預后評估提供客觀依據。