腦膠質瘤組織XIAP、Caveolin-1蛋白表達及意義

孫萍，周麗莉，張瑞麗，張乃方，許青霞

(鄭州大學附屬腫瘤醫院檢驗科，河南 鄭州450008)

腦膠質瘤的病情持續性進展，能夠導致患者病死率的顯著上升。流行病學研究顯示，腦膠質瘤的發病率可達323～556/10萬人左右[1]。腦膠質瘤的復發率較高，治療后的病情緩解率較低，整體臨床預后不佳[2]。不同的生物學因子的改變，能夠通過促進癌細胞的浸潤、增殖或者凋亡等病理過程的改變，進而參與到腦膠質瘤的發生發展過程中。X連鎖凋亡抑制蛋白 （X linked apoptosis suppressor protein，XIAP）的高表達，不僅能夠抑制癌細胞凋亡，提高癌細胞的持續性增殖的風險，同時還能夠誘導癌細胞的分化障礙，增加低分化的風險[3，4]；窯蛋白 1（Caveolin－1）的異常表達，能夠提高癌細胞的氧化應激損傷，促進腫瘤相關蛋白myc的上游轉錄因子的激活，參與到腦膠質瘤的擴散及病情復發過程中[5]。部分研究已經探討了XIAP在腦膠質瘤患者中的高表達表現，認為XIAP的高表達是促進患者癌細胞的異型性、病理分級等進展的重要原因，但對于XIAP與腦膠質瘤臨床預后的關系研究不足。為了進一步探討XIAP、Caveolin－1蛋白與腦膠質瘤的關系，從而為臨床上患者的病情評估提供參考，本研究選取2013年1月至2015年12月我院保存的腦膠質瘤標本59例，探討了相關蛋白的差異性表達情況，報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2013年1月至2015年12月我院保存的腦膠質瘤標本59例，其中男性32例，女性27例；年齡29～62歲，中位年齡49歲。納入標準：⑴均為初治治療患者；⑵在我院接受手術治療，術后病理證實為腦膠質瘤；⑶臨床隨訪資料完整。排除標準：⑴術前接受過放化療等治療；⑵合并有其他惡性腫瘤；⑶臨床隨訪資料不完整。同時選取瘤旁組織（距腫瘤組織＞2cm）作為對照組。

1．2 檢測方法 采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入XIAP和Caveolin－1蛋白抗體（鼠來源，ABCUM公司），37℃孵育2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標記的二抗抗體（購自abcum公司），37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液進行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產的顯色劑進行顯色，封片，鏡下觀察。

1．3 結果判斷 XIAP蛋白陽性表達于細胞漿中，Caveolin－1蛋白陽性表達于細胞核；隨機選取5個高倍鏡視野，每個視野計數100個腫瘤細胞，對染色強度和陽性細胞比例進行評分，染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例≤10%為1分，11%～25%為2分，26%～50%為3分，＞50%為4分。最終得分為染色強度和陽性細胞比例得分之積，分數≤4分為陰性表達，＞4分為陽性表達。

1．4 統計學處理 統計分析采用SPSS 19．0軟件，計數資料比較使用χ2檢驗，相關性采用Spearman相關分析。生存曲線采用Kaplan－Meier法描繪，比較采用Log－rank法。以P＜0．05表示差異有統計學意義。

2 結果

2．1 腦膠質瘤和瘤旁組織XIAP和Caveolin－1表達 腦膠質瘤組織XIAP和Caveolin－1蛋白陽性表達率分明顯高于瘤旁組織，差異比較有統計學意義（P＜0．05）。見表 1。

表1 腦膠質瘤和瘤旁組織XIAP和Caveolin-1表達

2．2 XIAP表達與腦膠質瘤患者臨床病理特征關系XIAP表達與腦膠質瘤患者年齡、性別、腫瘤類型和腫瘤直徑無關 （P＞0．05）， 與病理分級有關 （P＜0．05）。見表 2。

表2 XIAP表達與腦膠質瘤患者臨床病理特征關系

2．3 Caveolin－1表達與腦膠質瘤患者臨床病理特征關系 Caveolin－1表達與腦膠質瘤患者年齡、性別、腫瘤類型、病理分級和腫瘤直徑無關（P＞0．05），見表3。

2．4 XIAP和Caveolin－1表達相關性分析 腦膠質瘤XIAP蛋白表達與Caveolin－1蛋白表達無相關性（P＞0．05），見表 4。

2．5 XIAP和 Caveolin－1表達與患者預后的關系截止2018年1月，XIAP蛋白陽性表達患者中位總生存時間為21個月，明顯短于陰性表達患者的33個月（χ2=8．916，P＜0．05），Caveolin－1 蛋白陽性表達患者中位總生存時間為20個月，明顯短于陰性表達患者的 34 個月（χ2=31．972，P＜0．05）。 見圖 1。

表3 Caveolin-1表達與腦膠質瘤患者臨床病理特征關系

表4 XIAP和Caveolin-1表達相關性分析

圖1 生存曲線圖

3 討論

家族遺傳性因素、表觀遺傳學的改變等，均可以促進腦膠質瘤的發生。腦膠質瘤治療后的病情復發率較高，治療后的五年生存率或者中位生存時間等生存指標的改善效果較為局限[6]。包括多中心隨機或者臨床對照研究顯示，腦膠質瘤治療后的無瘤生存期不足24個月，治療后的病死率持續性維持在15%～25%左右[7，8]。而通過對腦膠質瘤的基礎領域方面的研究，能夠為疾病的早期診斷及臨床預后評估提供參考，特別是可以為腫瘤免疫靶向治療或者生物學治療提供新的作用靶點。

XIAP不僅是重要的凋亡抑制因子，其能夠通過修飾染色體末端端粒結構，從而抑制癌細胞的程序性凋亡，同時近年來相關基礎方面的研究也顯示，XIAP表達濃度的改變對于細胞形變能力同樣具有一定的影響，可以提高癌細胞早期發生過程中浸潤臨近正常腦組織的風險，導致癌細胞浸潤周期組織深度的改變，XIAP還能夠誘導癌細胞局部偽足的形成，提高癌細胞的浸潤及轉移能力[9]；Caveolin－1不僅能夠參與到惡性腫瘤早期發生過程中免疫逃逸及免疫紊亂的發生，同時還能夠影響癌細胞的轉錄上游因子如cyc或者啟動子的激活，增加癌細胞的DNA擴增風險[10]。近年來基礎方面的理論認為，XIAP在消化系統或者生殖系統等惡性腫瘤的病情進展過程中具有重要的促進作用，其能夠誘導癌細胞異型性的改變，導致細胞分化成熟障礙[11，12]。 但對于Caveolin－1的分析研究不足，同時本次研究探討了Caveolin－1等與腦膠質瘤患者的生存預后的關系。

本研究通過相關免疫組化分析研究發現，XIAP、Caveolin－1蛋白在腦膠質瘤患者病灶組織中存在顯著的異常高表達趨勢，提示XIAP、Caveolin－1蛋白均參與到了腦膠質瘤的病情進展過程中，XIAP、Caveolin－1蛋白的高表達能夠通過加劇腫瘤細胞DNA的擴增、抑制腫瘤細胞的凋亡比例等，進而促進腫瘤的發生發展[13]：⑴XIAP蛋白的異常高表達能夠提高腫瘤細胞的粘附能力，促進癌細胞內腫瘤相關基因的突變風險；⑵Caveolin－1蛋白的高表達能夠導致腦膠質瘤細胞的基因錯配修復作用的下降，提高腫瘤的復發風險。李世武等[14]研究者在探討了XIAP等腫瘤相關蛋白在腦膠質瘤患者病灶組織中的異常表達時發現，XIAP蛋白的陽性表達率可平均上升25%以上，同時腦膠質瘤患者的病死率越高，放化療治療后的病情緩解率越低，XIAP蛋白的高表達趨勢越為明顯。但在探討相關蛋白與腦膠質瘤患者臨床病理特征關系的過程中發現，Caveolin－1蛋白與腦膠質瘤患者的臨床病理特征并無顯著的關聯，提示Caveolin－1蛋白可能主要參與到了腦膠質瘤的早期發生過程中，而對于疾病的后續臨床進展、臨床分期、腫瘤細胞分化等可能并無明顯的影響。XIAP蛋白與腦膠質瘤患者的腫瘤細胞分級密切相關，XIAP對于腦膠質瘤患者臨床病理分級的影響主要考慮與XIAP影響到了腦膠質瘤患者的神經元細胞的核異型性、核質比及侵襲能力等有關[15]。最后，本研究發現XIAP和Caveolin-1表達與患者的生存預后具有一定相關性，XIAP和Caveolin-1高表達的患者，其中位生存時間明顯縮短，這主要由于相關蛋白的表達影響到了腦膠質瘤的治療敏感性有關，同時高表達的患者腫瘤惡性程度較高，生存時間較短。

綜上所述，腦膠質瘤組織XIAP、Caveolin-1蛋白表達明顯升高，同時XIAP和Caveolin-1蛋白的表達與腦膠質瘤患者的生存預后具有一定相關性。