CD4+CD28null T細胞與糖尿病慢性并發癥的關系研究

湯珂珂 洪萍萍 裘雙燕 余筱燕 毛玉山

研究表明，糖尿病患者動脈粥樣硬化具有發病年齡早、進展快、病情重等特點，發生率比非糖尿病患者高出3倍［1］。而糖尿病腎病是2型糖尿?。═2DM）微血管病變的典型臨床表現，是糖尿病患者腎功能衰竭的主要原因，其嚴重性僅次于心腦血管疾病。CD4+CD28null T細胞是有記憶的細胞毒性效應T細胞，近來被發現在多種自身免疫性疾病中發揮致病作用［2］。本研究旨在分析和探討T2DM患者外周血CD4+CD28null T細胞亞群的表達與糖尿病動脈粥樣硬化及糖尿病腎病的相關性，報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 入選標準：選取2013年1月至2015年6月期間在浙江省臺州醫院內分泌科住院的156例T2DM患者，其中男83例，女73例；年齡25～88歲，平均（56.3±11.9）歲。符合中國糖尿病指南分型和診斷標準（2010年版）。根據是否存在血管病變分為單純糖尿病組（T2DM，n=41）、糖尿病動脈粥樣硬化組（DA，n=35）、糖尿病腎病組（DN，n=39）、糖尿病動脈粥樣硬化合并腎病組（DA+DN，n=41）。糖尿病動脈粥樣硬化篩查：以彩色多普勒B超常規檢測2型糖尿病患者頸動脈內-中膜厚度、有無斑塊及其性質。內膜粗糙及厚度＞110mm或局部有斑塊者診斷為頸動脈粥樣硬化。糖尿病腎病篩查：收集患者24h小便，檢測其微量白蛋白濃度，計算24h尿微量白蛋白總量，＞30mg診斷為糖尿病腎病。需排除急慢性腎炎、發熱、泌尿道感染或充血性心衰等引起的蛋白尿和腎功能不全。排除標準：糖尿病急性并發癥患者；妊娠糖尿病患者；急性心梗、嚴重腦血管意外等合并癥患者；合并其他影響糖代謝的疾病患者，如甲狀腺機能亢進癥、庫欣綜合征、生長激素瘤等患者；嚴重胃腸道及肝腎疾病哮；惡性腫瘤及艾滋病等免疫缺陷疾病患者；合并類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、硬皮病等風濕性疾病患者；并發急慢性感染患者。

1.2 方法 （1）檢測患者空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（PBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、24h尿蛋白、尿微量白蛋白、身高、體重、體重指數（BMI）、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓等情況。（2）采用流式細胞儀（美國BD公司FACSCalibur）測定2型糖尿病患者外周血CD4+CD28null T細胞亞群的表達情況：患者于清晨空腹抽取靜脈血2ml，EDTA抗凝。取2支試管（a、b），a試管加入單抗MOUSE IgG1-FITC/MOUSE IgG2-PE（美國BD公司）。b試管加入CD4-PE/CD28-FITC單抗（美國BD公司）各20μl及100μl抗凝血混勻，避光15min。加溶血素2ml避光15min。300r/min離心10min，去上清液，加2ml PBS洗1次。每管加1%多聚甲醛0.5ml。以CD4/SSC散點圖設CD4+淋巴細胞門，分析CD4+CD28null T細胞亞群比率。

1.3 統計學方法 采用SPSS 16.0統計軟件。正態分布參數以（）表示，非正態分布參數以中位數（25%～75%四分位數間距）表示。正態分布參數多組間比較采用方差分析，非正態分布參數比較采用Kruskal-Wallis檢驗。正態分布參數兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，非正態分布參數采用Wilcoxon秩和檢驗。獨立影響因素分析采用Logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組間CD4+CD28null T細胞亞群的表達情況及基本資料對照 見表1。

2.2 獨立影響因素分析 以糖尿病動脈粥樣硬化為因變量，以BMI、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓、FPG、PBG、HbA1c、CRP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、尿微量白蛋白、CD4+CD28null T細胞亞群的表達為自變量進行Logistic回歸分析，在校正年齡和病程后所得到的結果顯示CD4+CD28null T細胞亞群的表達、餐后血糖、CRP是糖尿病動脈粥樣硬化的獨立影響因素，見表2。以糖尿病腎病為因變量，以BMI、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓、FPG、PBG、HbA1c、CRP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、CD4+CD28null T細胞 亞 群的表達為自變量進行Logistic回歸分析，在校正年齡和病程后所得到的結果顯示，CD4+CD28null T細胞亞群的表達、腰圍是糖尿病腎病的獨立影響因素，見表3。

表1 各組間CD4+CD28null T細胞亞群的表達情況及基本資料對照

表2 糖尿病動脈粥樣硬化相關危險因素的logistic回歸分析

表3 糖尿病腎病相關危險因素的logistic回歸分析

3 討論

T細胞在糖尿病動脈粥樣硬化和糖尿病腎病中均扮演了重要的角色。多項研究表明，CD4+CD28nullT細胞可能參與大動脈血管結構的改變和動脈粥樣硬化斑塊的發生和發展［3-4］。本研究結果顯示，糖尿病動脈粥樣硬化組相比單純糖尿病組，糖尿病動脈粥樣硬化合并腎病組相比糖尿病腎病組，CD4+CD28null T細胞亞群表達均明顯升高，差異具有統計學意義。Logistic回歸分析顯示，在校正年齡和病程后，CD4+CD28null T細胞亞群的表達、餐后血糖、CRP是糖尿病動脈粥樣硬化的獨立影響因素。近來有研究表明，CD4+CD28null T細胞亞群可以獨立影響糖尿病微血管病變的進展［5］。Cantón A 等［6］提出CD4+CD28null T細胞可能參與糖尿病視網膜病變的發生發展。本研究結果顯示，糖尿病腎病組相比單純糖尿病組CD4+CD28null T細胞表達明顯升高，差異具有統計學意義。Logistic回歸分析顯示，CD4+CD28null T細胞的表達、腰圍是糖尿病腎病的獨立影響因素。因而認為CD4+CD28null T細胞的表達分別是糖尿病動脈粥樣硬化和糖尿病腎病的獨立影響因素。

已有研究表明，CD4+CD28null T細胞是在炎癥環境下產生的，產生很多病理過程，比如動脈粥樣硬化及自身免疫性疾病。國外專家在具有高濃度CD4+CD28null T細胞的眼部玻璃體液中，也發現了高水平的細胞因子和炎癥介質［6］。有研究提出糖尿病大血管病變和微血管病變可能存在一種共通性，即可能都存在一種微炎癥狀態。微炎癥狀態是一種由非微生物因素引起的慢性進展的隱性炎癥狀態，表現為IL-6等細胞因子及CRP等炎癥標志物輕度持續增高，引起各種慢性并發癥的發生［7］。本研究結果表明，糖尿病動脈粥樣硬化組和糖尿病腎病組的炎癥指標CRP均顯著高于單純糖尿病組，證實了微炎癥狀態的存在以及這兩種糖尿病慢性并發癥的共通性。但本研究還發現糖尿病動脈粥樣硬化組的CRP指標明顯高于糖尿病腎病組，差異有統計學意義。Logistic回歸分析顯示，CRP是糖尿病動脈粥樣硬化的獨立影響因素，卻不是糖尿病腎病的獨立影響因素。因而本研究認為炎癥反應可能是CD4+CD28null T細胞影響2型糖尿病患者動脈粥樣硬化進展的主要途徑。但在2型糖尿病腎病中雖然也存在CD4+CD28null T細胞相關的炎癥反應，還可能與其他CD4+T細胞和胞內信號轉導異常、全身因素引起的局部改變等相關，其內在機制仍需要進一步深入研究。