自身免疫性溶血性貧血患者用稀釋法進行抗體分類的應用

楊 宇，吳德靜，陳月寬，張紹基，劉?；郏S美容，熊 杰

(1.遵義醫學院附屬醫院輸血科，貴州遵義 563003；2.遵義市第一人民醫院中心實驗室，貴州遵義 563002；3.遵義醫學院檢驗醫學院，貴州遵義 563003)

自身免疫性溶血性貧血(AIHA)患者體內常常存在一些抗體，這些抗體常導致抗體篩選陽性及交叉配血困難[1-2]，從而延誤臨床的救治時機。采用稀釋法可以快速將患者體內抗體的分類，從而縮短后續抗體鑒定及為選擇合適的血液輸注節約寶貴的時間[3-5]。本研究采用稀釋法對AIHA患者的抗體進行分類，旨在提高臨床輸血的安全性，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月至2017年12月遵義醫學院附屬醫院(以下稱“本院”)AIHA患者36例為研究對象，其中男10例，女26例。年齡37～64歲，中位年齡52歲。36例AIHA患者中，2例血紅蛋白低于30 g/L，28例血紅蛋白為30～49 g/L，6例血紅蛋白為50～59 g/L，貧血貌均較重?；颊呔L期生活在本地區。納入與排除標準：(1)臨床實驗室指標提示有溶血性貧血的證據；(2)排除理化因素及藥物導致的溶血、年齡在37歲以上、患有基礎疾病(系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎)等。

1.2儀器與試劑 不規則抗體篩選紅細胞試劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細胞(上海血液生物醫藥有限公司)；10項譜細胞(上海血液中心)、一次性放免試管、氯喹、試管、生理鹽水、血庫專用離心、移液器等。

1.3方法 對36例AIHA患者進行輸血前3項檢查(血型鑒定、不規則抗體篩選及交叉配血)。其中不規則抗體篩選尤為重要，對于抗篩鑒定結果判斷有困難者，必要的時候將采用“二步抗篩法”[1]：第1步，采用商品試劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規則抗體篩選紅細胞進行抗體篩選；第2步，采用10項譜細胞與不同配比濃度的血漿(清)進行抗體篩選，來確定抗體的特異性，從而選擇相合的血液輸注。試驗均采用試管法：(1)取3支小試管，分別加入經離心后的被檢者血漿(清)100 L；(2)分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規則抗體篩選紅細胞各50 L；(3)混勻，以3 400 r/min離心15 s，肉眼觀察凝集情況；(4)凝集為陽性，無凝集為陰性。稀釋法：(1)將離心后的被檢者血漿(清)進行倍比稀釋，稀釋配比濃度為1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128；(2)稀釋后的每一配比濃度分別與10項譜細胞進行同試管法同樣(1)～(4)的操作，以上操作均按試劑說明書及標準操作規程操作。

2 結 果

2.1“第1步”抗體篩檢結果 在36例AIHA中，1例不規則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細胞，檢測結果全部陰性，未檢出同種抗體及自身抗體；3例不規則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細胞部分陽性、部分陰性，表示檢出同種抗體，再進行譜細胞鑒定其特異性；32例不規則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細胞全部陽性。表明可能有自身抗體或(和)同種抗體。

2.2“第2步”抗體篩檢結果 對第1步中32例AIHA患者不規則抗體篩檢初篩全部陽性的標本，采用稀釋法對患者血漿(清)進行倍比稀釋，然后對相應稀釋倍數后的血漿(清)進行譜細胞鑒定。

將不同稀釋倍數的血漿(清)標本分別與譜細胞反應，如果到某一稀釋倍數濃度時出現格局顯示全部陽性結果，然而下一稀釋倍數濃度時出現反應結果全部陰性，這時表明出現全陰性結果的稀釋倍數自身抗體的效價為0，但也不排除同種抗體此稀釋倍數時效價同樣為0或上一稀釋倍數效價為0，即當同種抗體效價等于或低于自身抗體效價時，與譜細胞的反應格局會出現抗體遮蓋現象，會出現反應格局，見表1。此時需要繼續用自身紅細胞作自身抗體的吸收放散(氯喹放散)，通過反復吸收放散，直到吸收后的自身紅細胞直接抗人球蛋白試驗(DAT)陰性為止，將吸收后的血漿(清)再進行譜細胞鑒定。若存在同種抗體則會出現表2的反應格局。若不存在同種抗體則譜細胞反應格局顯示全部陰性。

表1 對AIHA患者血漿(清)倍比稀釋后的譜細胞結果

注：s表示反應加強；w表示反應變弱

表2 對AIHA患者血漿(清)用自身紅細胞吸收后的譜細胞結果

續表2 對AIHA患者血漿(清)用自身紅細胞吸收后的譜細胞結果

注：s表示反應加強；w表示反應變弱

當稀釋后不同稀釋倍數的標本血漿(清)與譜細胞反應，若出現反應格局到某一稀釋倍數時譜細胞格局出現全部陽性結果，然而下一稀釋倍數濃度時的反應格局出現部分陽性部分陰性，這時表明自身抗體的效價低于同種抗體效價。譜細胞鑒定類似反應格局結果見表3。

表3 血漿(清)倍比稀釋后的譜細胞結果

注：s表示反應加強；w表示反應變弱

3 討 論

AIHA多發于淋巴系統惡性疾病、結締組織性疾病、細菌病毒感染和應用某些藥物后，紅細胞受到藥物、感染等外界因素影響后可產生自身抗體[6-7]。AIHA患者常常因嚴重貧血貌來院就診，在臨床治療中，常常需要反復輸血治療，然而部分患者本身也存在自身抗體，也因多次輸血治療可能會產生同種抗體，因此為交叉配血帶來困擾。

本文采用稀釋法及“二步抗篩法”，旨在能夠進行抗體種類分類。選擇合適供者的血液輸注，對AIHA患者“精準輸血”提供“精準信息”具有重要的意義。通常，AIHA患者在進行輸血前3項檢查時，其中不規則抗體篩檢初篩常有困擾，及Rh血型同型血配血即可；若初篩結果部分陽性、部分陰性，判斷無自身抗體但有同種抗體，此時初篩后還需要鑒別其同種抗體的特異性，隨后交叉配血選擇ABO、Rh同型血配血且不帶同種特異性抗體對應抗原的供者紅細胞與之配血即可[8]。對于需要自身紅細胞反復放散吸收后的患者血漿(清)，該方法對于同種抗體較易區分，但對于同種自身血型抗體不能進行區分，該試驗會出現假陰性的譜細胞結果。文獻[9-11]報道，選擇避開與特異性抗體對應抗原的紅細胞制品輸注，輸注的紅細胞制品在AIHA患者體內存活能達到臨床輸血要求的標準，而大大高于無經選擇性交叉配血其凝集強度低于自身對照管凝集強度的紅細胞制品，無經選擇性的最小凝集強度供者紅細胞輸注后須有一定效果但是達不到輸血要求的標準。在治療期間每例患者平均輸注4～6 U紅細胞制品，輸注期間均無不良反應，輸注順利；次日進行輸血后療效評價，33例患者血紅蛋白均有所提高輸血有效，而3例未達到預期標準輸血無效。為了有效輸血，輸血科人員應在交叉配血時盡可能選擇能避開特異性抗體對應抗原的紅細胞制品輸注后，才能夠有效地避免遲發性溶血性輸血反應的發生而有效輸血。因此對AIHA患者輸血前進行相關抗體分類鑒定非常必要，能夠為臨床患者的治療贏得寶貴的時間，確保輸血安全。