高效液相色譜串聯質譜法檢測兒童血清25-（OH）D2+D3結果分析

吳碧濤，蔣文強，向禮芳（.綿陽市中心醫院檢驗科，四川6000；.重慶市公共衛生醫療救治中心急診科 400036）

眾所周知，脂溶性維生素D可通過調節鈣磷代謝影響肌肉骨骼系統的發育，其缺乏可導致兒童佝僂病及成人軟骨癥、骨質疏松等[1]。隨著研究的深入，發現維生素D還具有廣泛的骨骼外效應，其缺乏與免疫性疾病、感染性疾病、代謝性疾病、心血管疾病、皮膚病、神經精神疾病、生殖系統疾病、腫瘤等密切相關[2-3]。因此，越來越多的學科開始關注維生素D的營養狀況。25-羥基維生素D[25-（OH）D]被認為是評價維生素D營養狀況的最佳指標[4-5]。因而準確檢測25-（OH）D水平的需求也就越來越大。不同地區因地域、環境、飲食結構等因素不同維生素D水平差異也較大[6]。基于以上因素，本研究旨在分析綿陽地區0～6歲兒童血清25-（OH）D2+D3水平，為維生素D缺乏性佝僂病及維生素D缺乏性相關疾病的研究和治療提供實驗室依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年5—8月來綿陽市中心醫院兒童保健科體檢的1 002例0～6歲兒童為研究對象。排除可能引起維生素D缺乏病史的患兒。根據性別不同分為男性兒童組和女性兒童組，根據年齡不同分為0～1、＞1～3、＞3～6 歲組。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 所有兒童均于清晨采集空腹靜脈血，待血液凝固后離心分離800 μL血清于eppendorf管，并立即加入5 μL保護劑，4℃保存，3 d內完成檢測。

1.2.2 檢測方法 采用液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）法檢測血清 25-（OH）D2及 25-（OH）D3。API3200 串聯質譜儀購自美國AB SCIEX公司，Shimadzu系列液相色譜儀購自日本島津公司，檢測試劑購自濟南英盛生物技術有限公司。嚴格按儀器操作指南及試劑說明書操作。

1.2.3 判斷標準 參照國內外多數文獻采用的通用判斷標準[7]：血清25-（OH）D＜20 ng/mL為缺乏，20～30 ng/mL為不足，＞30～100 ng/mL 為適宜，＞100～150 ng/mL 為過量，＞150 ng/mL為維生素D中毒。

1.3 統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以表示，經方差齊性檢驗后，2組資料間比較采用獨立樣本t檢驗，3組資料間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 綿陽市1 002例 0～6歲兒童血清25-（OH）D2+D3水平總體分布 血清 25-（OH）D2+D3水平為（25.71±11.85）ng/mL，水平最低為2.58ng/mL，最高為90.84ng/mL，未發現維生素D過量及中毒者。缺乏者共370例，占比36.93%；不足者 346例，占比 34.53%；適宜者僅占28.54%。見表1。

表1 綿陽市1 002例0～6歲兒童血清25-（OH）D2+D3水平總體分布

2.2 不同性別兒童血清25-（OH）D2+D3水平比較1 002例 0～6歲兒童中，男性兒童 557例，血清 25-（OH）D2+D3水平為（25.58±11.61）ng/mL；女性兒童 445 例，血清25-（OH）D2+D3水平為（25.86±12.16）ng/mL。2 組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同性別兒童血清25-（OH）D2+D3水平分布

2.3 不同年齡組兒童血清25-（OH）D2+D3水平比較0～1組兒童血清25-（OH）D2+D3水平為（26.57±12.09）ng/mL，＞1～3 組兒童血清 25-（OH）D2+D3水平為（25.29±11.61）ng/mL，＞3～6 組兒童血清 25-（OH）D2+D3水平為（23.16±10.89）ng/mL，其中僅大于3～6歲組與0～1歲組血清25-（OH）D2+D3水平比較，差異有統計學意義（P=0.01）。見表3。

表3 不同年齡段兒童血清25-（OH）D2+D3水平分布

3 討 論

作為人體必需的營養元素之一，維生素D具有廣泛的骨骼系統和非骨骼系統效應。其適宜的濃度對維持機體多個系統的正常發育非常重要，尤其是對于兒童的健康及體格發育。研究發現，維生素D缺乏已成為全球性的營養問題。據估計，全世界約有10億人處于維生素D缺乏或不足水平[7]。人體內維生素D主要以25-（OH）D2（麥角鈣化醇）與25-（OH）D3（膽鈣化醇）2種形式存在，前者來自于植物性食物及外來補充劑，后者主要來自于動物性膳食及紫外線照射皮膚合成。血清25-（OH）D因其性質穩定、半衰期長、血清濃度高，被用作評價維生素D營養狀況的客觀指標[4]。有研究表明，不同的檢測方法可能導致維生素D檢測結果之間存在較大的差異[8]。因其準確度高，特異性強，可以有效區分25-（OH）D2與25-（OH）D3，甚至能區分3-epi 25羥基維生素D3[3-epi 25（OH）D3]，液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）法被認為是檢測 25（OH）D 的“金標準”[9-11]。

本研究發現，綿陽地區0～6歲兒童血清維生素D缺乏仍非常普遍，其血清25-（OH）D2+D3水平為（25.71±11.85）ng/mL，人群中適宜率僅占28.54%。男性與女性兒童血清25-（OH）D2+D3水平比較差異并無統計學意義（P＞0.05），這與郝新忠等[12]的報道結果一致，而與陳珊珊等[13]的報道結果不一致。這可能與樣本數多少、檢測方法不一致等因素有關。隨年齡增長，兒童血清維生素D水平逐漸降低的趨勢與很多研究一致[14-15]，其中大于3～6歲組與0～1歲組比較，其血清維生素D水平降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。導致這一現象的原因可能與下列因素有關：0～1歲組嬰幼兒以母乳或配方奶為主，乳、奶制品含維生素D相對高，且根據喂養指南，3歲以下嬰幼兒均常規補充魚肝油等維生素D制劑，再者1歲以下嬰幼兒做兒童保健頻率高，能經常從醫生處獲取關于維生素D補充重要性的相關知識，故而家長重視度高；而處于3～6歲組的兒童，隨年齡增長，機體對維生素D的需求增加，而兒童每天奶制品的獲取情況良莠不齊，加之偏食、家長重視不夠等原因，很容易導致血清維生素D缺乏或不足，后一點從大于3～6歲組來院常規體檢人數與0～1歲組比明顯下降也可以佐證。

綜上所述，綿陽地區0～6歲兒童血清維生素D營養狀況較差，應加強血清25-（OH）D2+D3水平的檢測，尤其是對3～6歲兒童應及時補充，為臨床維生素D缺乏性佝僂病及維生素D缺乏性相關疾病的研究和治療提供實驗室依據。當然，因樣本數相對較少，結果可能存在一定偏倚。今后尚需進一步大樣本研究觀察，同時會考慮季節等因素對血清維生素D水平的影響。