枳椇子水提取液對急性酒精中毒家兔離體小腸運動的影響及其解酒機制探討

右江民族醫學院，廣西 百色 533000

枳椇子為鼠李科(Rhamnaceae)枳椇子屬枳椇(HoveniaacerbaLindl.)的干燥成熟種子，又名雞距子，含有黃酮、皂苷和糖苷、生物堿、脂肪酸、粗脂肪、粗蛋白、微量元素等化學成分，具有醒酒安神、止渴除煩、止嘔、利大小便、抗衰老、抗疲勞、抑制癌細胞生長等作用，能清除酒后體內產生的過量自由基，阻礙過氧化脂質的形成[1-2]。元代《本草衍義補遺》中記“一男子年三十余，因飲酒發熱，乃服補氣血之藥，加葛根以解酒毒。微汗出，人反懈怠，熱如故。必須雞距子解其毒，遂煎藥中加而服之，乃愈”。《本草綱目》、《食療本草》、《本草拾遺》等醫學著作中都有對枳椇子的解酒作用有相關記載[3-4]。一次性過量飲酒時，由于酒精的親脂性，可迅速給神經系統造成損害，嚴重者會造成機體功能異常甚至永久性傷害[5]。而酒精經口攝入后首先通過胃腸道進行吸收。目前枳椇子水提取液對酒精中毒的離體小腸運動的實驗未見報道，故本實驗采用在體灌胃法和離體小腸灌流法復制兩種家兔急性酒精中毒模型，觀察枳椇子水提液對急性酒精中毒家兔離體小腸平滑肌收縮活動的影響以及在小腸的解酒機制，以期枳椇子的解酒作用在臨床上以及生活保健中可以更廣泛的應用。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 健康清潔級家兔30只(廣西田東隆祥兔業有限公司生產，許可證號：SCXK桂2014-0003)，雌雄各半，體重1.5～2 kg。

1.2 器材 BL-420F生物機能實驗系統、HW-400E恒溫平滑肌槽、張力換能器等均為成都泰盟科技有限公司產品。

1.3 試劑 無水乙醇(天批號：20170918，津市大茂化學試劑廠)。臺氏液(Nacl 8 g、Kcl 0.2 g、NaHCO□1 g、MgCl□0.1 g、NaH2PO□0.05 g、CaCl□0.2 g，加蒸餾水至1000 mL)

1.4 藥品 解酒靈口服液(批號：20170101，江西光達可信醫藥生物公司)、枳椇子(廣西省百色市市售，經廣西右江民族醫學院民族醫學教研室覃道光教授鑒定為枳椇子)提取液：取枳椇子干品100 g加蒸餾水500 mL浸泡8 h，小火煎煮2次，第1次煮開后再煎煮1.5 h，第2次加300 mL蒸餾水，煮開后再煎煮1 h，兩次煎液合并，濾過，濃縮至2000 g/L，置于5℃冰箱冷藏密閉備用。

2 方法

2.1 家兔小腸在體灌胃酒精中毒離體實驗 取20只家兔，隨機挑10只家兔按8 mL/kg，40%酒精灌胃至兔耳一只或兩只下垂，咀嚼動作遲緩或消失，心跳及呼吸頻率分別較酒精中毒前增加10%至20%，鼾聲大作[7]。剩余10家兔作為正常對照組按等量蒸餾水灌胃。家兔實驗前禁食 24 h，自由飲水，實驗時猛擊其頭枕部致昏，迅速剖開腹腔，找出胃幽門與十二指腸交界處，以此處為起點，取十二指腸20 cm，沖凈腸內容物，先將該腸管相連的腸系膜分離，再將擬取的腸管兩端剪斷，將游離的腸管取出體外，置于盛有保持 38℃的臺氏溶液的燒懷中，用注射器抽取常溫臺氏溶液洗凈腸內容物。將其剪成2 cm的腸段作為實驗標本，每只家兔制備10斷離體小腸平滑肌標本，放于恒溫的臺氏溶液中備用。將在體酒精灌胃的10只家兔小腸標本隨機等分為枳椇子水提取液低、中、高濃度組，解酒靈低、中、高劑量組，模型組，蒸餾水灌胃的家兔小腸標本即為正常對照組。小腸平滑肌標本一端系于通氣管鉤上，另一端垂直連接張力換能器，然后通過升降換能器的高度，以牽張結線，使標本垂直懸掛于38℃的 50 mL恒溫浴管的臺氏溶液中，給予2.5 g負荷平衡組織 30 min，并向其中緩慢通氧 (95%O2和 5%CO2)，速度控制在30個 /分氣泡。每組分別用微量移液器滴加枳椇子水提取液、解酒靈和蒸餾水。枳椇子水提取液和解酒靈的低中高劑量組的終濃度分別為16 g/L、32 g/L、48 g/L，模型組和蒸餾水組滴加等量的蒸餾水，記錄給藥前后2 min小腸運動曲線，實驗結束后用生物機能實驗系統測量小腸收縮的頻率、張力及面積[8]。每給一次藥液實驗記錄結束后，用臺氏液沖洗3次，待小腸管恢復后再進行下一項實驗，每個劑量分別進行10次實驗。

2.2 家兔小腸離體灌流酒精中毒離體實驗[9]取10只家兔制備離體小腸平滑肌標本，腸段制備方法及操作記錄方法同2.1項，將小腸平滑肌標本隨機等分為枳椇子水提取液低、中、高濃度組，解酒靈低、中、高劑量組、模型組和正常對照組。除正常對照組外，滴加相應藥液前先向小腸平滑肌標本中滴加1 ml/L的40%酒精，待小腸收縮穩定后，再滴加相應藥液，藥液滴加、記錄方法及換洗操作方法同上2.1項。

3 結果

3.1 對在體急性灌胃酒精中毒家兔離體小腸的影響 由表1可知，與實驗前相比，枳椇子水提取液及解酒靈組中、高劑量組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)；其余各組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力差異均無統計學意義(P>0.05)。與正常對照組比較，模型組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)；與模型組相比，中、高劑量組的枳椇子水提取液及高劑量組解酒靈對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.01，P<0.05)；其余各組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均無顯著性差異(P>0.05)。

表1 枳椇子水提取液對在體急性灌胃酒精中毒家兔離體小腸的影響

注：與實驗前比較，aP<0.05；與正常組比較，bP<0.05；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01。

3.2 對急性離體酒精中毒家兔離體小腸的影響 由表2可知，實驗前相比，枳椇子水提取液、解酒靈各劑量組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)；其余組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力差異均無統計學意義(P>0.05)。與正常對照組比較，模型組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)；與模型組相比，枳椇子水提取液、解酒靈各劑量組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.01、P<0.05)；其余組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力差異均無統計學意義(P>0.05)。

表2 枳椇子水提取液對急性離體酒精中毒家兔離體小腸的影響

注：與實驗前相比，aP<0.05；與正常組比較，bP<0.05；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01。

4 討論

文獻報道，我國急性酒精中毒患者占同期急診患者的0.5%，占急性中毒患者的49%[10-11]。在美國，急性酒精中毒是位居前五的公共衛生事件，且近幾年趨于年輕化[12-13]。目前，人們一直都在尋找高效、快速解除酒精中毒的方法。由于人體經口攝入乙醇后大約25%通過胃粘膜吸收，75%通過小腸吸收[13-14]。因此，從消化系統著手酒精中毒的研究是個值得探討的課題。

在體急性灌胃酒精中毒家兔離體小腸實驗結果顯示，與實驗前比較，枳椇子水提取液及解酒靈組中、高劑量組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)。與正常對照組比較，模型組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)；與模型組相比，中、高劑量組的枳椇子水提取液及高劑量組解酒靈對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.01，P<0.05)。制作離體小腸標本前小腸收縮活動主要依靠壁內神經叢、迷走神經、交感神經調節和胃泌素、膽囊收縮素等激素的調節作用[15]，并且胃黏膜上含有乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶等主要氧化分解乙醇的酶類，通過首過代謝作用可將乙醇在入血液和肝臟前優先將其代謝分解，其代謝產物乙醛與胃黏膜上的蛋白結合形成蛋白化合物，從而引發刺激性反應，對腦組織神經遞質含量進行調節[16]。制作離體小腸標本后小腸只能通過壁內神經叢的局部反射來調節小腸平滑肌的運動。由此推測，低劑量枳椇子水提取液不能抑制急性灌胃酒精中毒小腸離體后乙醇的再吸收作用，可能與神經系統、消化系統的一系列調節相關。

離體急性灌胃酒精中毒家兔離體小腸實驗結果顯示，與實驗前相比，枳椇子水提取液、解酒靈各劑量組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)。與正常對照組比較，模型組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作用(P<0.05)；與模型組相比，枳椇子水提取液、解酒靈各劑量組對離體小腸收縮面積、收縮頻率、收縮張力均有抑制作(P<0.01、P<0.05)，此結果與在體急性灌胃酒精中毒家兔離體小腸實驗結果一致。隨著藥物濃度的增加，其對兩種急性酒精中毒模型的離體小腸抑制作用增強，呈劑量依賴關系。小腸平滑肌離體后不再受中樞神經系統的調節，但壁內神經叢和受體依然可調節其運動，對小腸的抑制作用是否與Ca2+及受體作用有關，有待進一步探究。

黃酮類是枳椇子主要的藥用價值成分之一，且其中的二氫楊梅素含量較為豐富，具有顯著的生物活性，有良好的防醉解酒效果[17-19]。解酒靈主要是一定程度上減少消化道對乙醇的吸收,加速其分解代謝,從而防止或減輕乙醇對人體神經系統、消化系統等損害[20]。綜上所述，枳椇子水提取液對兩種模型的急性酒精中毒家兔離體小腸運動均有抑制作用，其在小腸處的解酒機制可能是通過抑制小腸對乙醇的吸收，減緩乙醇氧化為乙醛的速度，使產生乙醛的量減少，是否與黃酮類化合物的二氫楊梅素有關，有待進一步研究。此實驗為枳椇子中黃酮類成分開發提供實驗依據。