高通量基因測序產前篩查與診斷技術在高齡孕婦中的應用研究

田琪 ，黃凡華 ，章鈞 ，侯紅瑛 ?（通訊作者）

（1.中山大學附屬第三醫院 產科，廣東 廣州 510630；2.中山大學附屬第三醫院 檢驗科，廣東 廣州 510630）

0 引言

唐氏綜合征也稱為21-三體綜合征(trisomy 21 syndrome)，和孕婦的年齡存在密切相關性，其發病的風險性會隨著孕婦年齡加大而提升。中國《母嬰保健法》中提及對高齡孕婦需要開展羊水診斷，然而，因為羊水診斷具有流產風險、感染風險及損傷胎兒風險等，一些孕婦和其家屬存在一定的擔憂，可能會拒絕接受羊水診斷，最終引發導致唐氏綜合征患兒的出生[1]。本文實施研究的資料為在本醫院接受診斷的6400例高齡孕婦（時間段是2015年2月至2018年5月），研究及分析將高通量基因測序的產前篩查以及診斷技術應用于高齡孕婦中的診斷價值及意義。

1 資料與方法

1.1 基礎資料

本文將在本醫院接受診斷的6400例高齡孕婦納入分析資料，選取時間是2015年2月至2018年5月，予以回顧分析，年齡在35-46歲，平均（39.85±2.45）歲；孕周13到25+6周，平均（21.12±2.07）周，其中，直接要求羊水診斷的孕婦有3385例，先要求接受無創DNA產前檢測間接羊水診斷的孕婦有3015例。納入標準：年齡在35周歲及以上的孕婦；高齡孕婦與其家屬都簽字知情同意書，得到醫學倫理會相關人員的批準及準許。排除標準：年齡在35周歲以下的孕婦；不愿意簽字知情同意書或是不愿意參與本研究的孕婦。

表1 高齡孕婦采取不同檢測方法的染色體異常檢出總計率（n，%）

1.2 方法

（1）采集全部高齡孕婦的靜脈血，予以無創DNA檢測，對DNA檢測結果呈現陽性的孕婦再開展羊水細胞培養處理和染色體核型分析予以確診。

（2）羊水細胞培養后予以染色體核型分析的方法：對直接要求羊水診斷的孕婦和無創DNA產前檢測結果呈現陽性的孕婦分別抽取20mL羊水進行細胞培養，并開展染色體核型分析予以確診。

（3）隨訪全部高齡孕婦，將采取羊膜腔穿刺術抽羊水開展細胞培養處理和予以染色體核型分析的結果作為金標準，統計診斷結果。

1.3 相關指標

觀察并分析高齡孕婦采取不同檢測方法的染色體異常檢出情況。

1.4 統計學分析

2 結果

得到的數據呈現，先要求接受無創DNA產前檢測間接羊水診斷的高齡孕婦中，檢出陽性共37例，通過羊水診斷得以確診有30例，生后隨訪其外周血染色體檢查得以確診有7例，其中，21-三體有20例，18-三體有10例，47,XXY有7例；直接要求羊水診斷的高齡孕婦中，21-三體有19例，18-三體有9例，47,XXY有7例。高齡孕婦先要求接受無創DNA產前檢測間接羊水診斷的染色體異常檢出總計率（1.23%）與直接要求羊水診斷（1.03%）對比，前者略高，不過無顯著數據差異，P＞0.05，未體現數據之間的統計學意義。

3 討論

多數出生缺陷是因遺傳因素而引發的，最為常見的是染色體的非整倍體異常，主要為21、18、13、X、Y染色體的非整倍體異常情況。對孕婦開展產前診斷有助于減少異常胎兒的出生，羊水診斷是臨床常用的檢查方式。本文數據展示，3385高齡孕婦接受直接要求羊水診斷，檢出35例染色體異常。雖然羊水診斷對胎兒染色體的檢測比較全面，但是，羊水診斷需要開展侵入性穿刺操作，易導致出血或是感染情況，提升流產風險或是畸形風險。

無創DNA檢測是抽取孕婦的外周靜脈血，采取高通量基因測序方法對孕婦血漿內胎兒的游離DNA片段開展檢測，將胎兒的染色體倍性情況檢測，和常規的唐氏篩查方法相對比，無創DNA檢測方法具有比較低的假陽性情況[2-3]。本文相關研究資料呈現，3015例高齡孕婦接受高通量基因測序，檢出37例陽性（染色體異常），且均通過羊水診斷或是生后隨訪其外周血染色體檢查確診，都和檢測結果相符合。

高通量基因測序是無創性的DNA檢測方法，其對21、18、13等一些常見的染色體數目異常情況檢出敏感度及特異度均比較高[4]，可以用作接近診斷級別的一種篩查手段，能夠將大部分不必要的羊水穿刺操作避免或減少，不過，高通量基因測序主要針對常見的21、18、13-三體開展檢測，可能會將其他染色體異常情況漏檢，而且，對于其檢出的染色體異常情況，一般也需要開展羊水穿刺進行確診[5-6]。所以，高通量基因測序僅為更高級別的一種產前篩查方式，可以看做是傳統產前篩查以及診斷技術的重要補充，但其并無法將羊水診斷取代[7-8]。

綜上所述，對高齡孕婦采用高通量基因測序的產前篩查以及診斷技術展示重要診斷價值，可以為拒絕接受羊膜腔穿刺術或是具有羊水診斷相關禁忌證的高齡孕婦提供新的一種產前診斷方式，呈現進一步推廣應用的意義和優勢。