甲胎蛋白陰性的肝癌血清標(biāo)志物篩查及臨床意義

沈科書，孫海英，孫穎

（吉林省肝膽病醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130062）

0 引言

原發(fā)性肝癌在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率居所有惡性腫瘤種類中的第二位，同時(shí)具有極高的致死率[1-2]。腫瘤標(biāo)志物是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生一些結(jié)構(gòu)和數(shù)量異常的蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)，針對(duì)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)在臨床上具有重要的意義，可應(yīng)用于早期篩查、監(jiān)測(cè)療效及腫瘤分期等方面，因此，本次研究選擇我院2年間收治的200例甲胎蛋白陰性肝癌患者，分析血清標(biāo)志物篩查的臨床意義，現(xiàn)將具體內(nèi)容，匯總?cè)缦隆?/p>

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取我院自2016年1月至2018年1月收治的200例甲胎蛋白陰性肝癌患者，其中，男性125例，女性75例，年齡42～76歲，平均（52.5±3.5）歲；所有患者均通過(guò)肝臟增強(qiáng)CT或核磁，確診為原發(fā)性肝癌，腫瘤結(jié)節(jié)單發(fā)且低于3cm，未發(fā)現(xiàn)血管侵襲與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況，同時(shí)其AFP低于7ng/mL，均在治療前進(jìn)行血清標(biāo)本采集，選擇2D-DIGE篩選驗(yàn)證，Child分級(jí)為A、B級(jí)，無(wú)其他腫瘤類型患者。原發(fā)性肝癌診斷參照全國(guó)肝癌協(xié)作會(huì)議制定的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。甲胎蛋白采用羅氏試劑進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 方法

（1）搜集患者臨床資料，對(duì)每個(gè)樣本進(jìn)行T細(xì)胞亞群檢測(cè)；（2）操作方法：選擇去除人體14種高豐度蛋白的多種親和排除系統(tǒng)（MARS），選擇固相pH梯度（IPG）干膠條（24cm），同時(shí)選擇5 nmol CyDye DIGE Fluor最小標(biāo)記試劑盒、Ettan2D-clean up試劑盒、DeStreak TM溶脹液、載體兩性電解質(zhì)等等[3-4]；（3）開(kāi)展圖像分析，雙向電泳得到蛋白質(zhì)組圖譜，選擇相應(yīng)的工具，進(jìn)行分析研究[5-6]；（4）開(kāi)展差異蛋白的膠內(nèi)酶解與質(zhì)譜鑒定，切割差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，提取蛋白，將其低溫凍干，將蛋白樣品點(diǎn)靶于MALDI金屬上，給予4700MALDI-TOF/TOF串聯(lián)飛行質(zhì)譜儀鑒定結(jié)果[7]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察甲胎蛋白陰性肝癌患者血清中高表達(dá)蛋白質(zhì)譜鑒定類型，篩選蛋白質(zhì)點(diǎn)上多余2/3的膠上出現(xiàn)，同時(shí)需滿足，其差異超過(guò)1.4倍，分析血清轉(zhuǎn)鐵蛋白前體、抗原KW-4剪接變體、介于Prol鋅糖蛋白、復(fù)合體晶體A鏈、鋅α2糖蛋白、載脂蛋白原、免疫球蛋白（Fc）、Ssl7復(fù)合體A鏈、免疫球重鏈變異體各類型間，相對(duì)分子質(zhì)量、等電點(diǎn)、覆蓋率及差異倍數(shù)，以深入驗(yàn)證其內(nèi)在聯(lián)系[8]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用t和χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)SameSpots軟件分析，探究其斑點(diǎn)，篩選結(jié)果可見(jiàn)甲胎蛋白陰性肝癌患者血清中具有較高表達(dá)差異，血清中高蛋白表達(dá)類型共9種，且互有明顯差異，具體內(nèi)容詳見(jiàn)表1。

表1 甲胎蛋白陰性肝癌患者血清中高表達(dá)蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果分析（n, %）

3 討論

原發(fā)性肝癌的早期發(fā)現(xiàn)是困擾臨床醫(yī)生的難題，長(zhǎng)久以來(lái)，AFP始終是公認(rèn)的肝癌早期篩查的重要指標(biāo)，相關(guān)資料顯示，原發(fā)性肝癌患者中甲胎蛋白陽(yáng)性者一般為70%左右，臨床中仍有部分AFP陰性的原發(fā)性肝癌。因此，開(kāi)展血清標(biāo)志物研究，提高原發(fā)性肝癌早期診斷具有重要意義[9-10]。本次研究選擇AFP陰性肝癌類型。本次研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)分析補(bǔ)體因子B、1r等差異蛋白分子，能夠在肝癌早期的診斷中發(fā)揮良好的診斷效果，且T細(xì)胞亞群臨床檢測(cè)簡(jiǎn)便易行，可及性強(qiáng)，相關(guān)蛋白分子可作為生物標(biāo)志物，提升甲胎蛋白陰性肝癌的早期診斷效果，臨床應(yīng)用前景十分理想。