美國豬偽狂犬病監測程序手冊（1.3版）—樣本運送、提交程序及附件

文│美國農業部動植物衛生檢驗局獸醫處

譯校│張淼潔 付雯 翟新驗（中國動物疫病預防控制中心）

一、樣本的運送

關于動物衛生官員收集的樣本，應采用以下程序將樣本提交至NAHLN或USDA實驗室。

1.包裝。將貼有標簽的樣本管/容器放入透明的帶有吸收劑的生物學危害品袋（STP—741）中，并密封；將該生物學危害品放入生物學危害品袋（STP—740）中，并密封；將白色袋子放入運送箱中；在袋子上放置冷凍冰塊；將填寫好的美國農業部農場現場豬監測提交表（若有）放置在泡沫箱蓋子上；密封箱子；將運送地址標簽貼在箱子上，送至對該收集樣本進行PRV（豬偽狂犬病病毒）檢測的指定實驗室；將其他需要的運送標簽貼在箱子上，滿足當前的IATA運送要求（比如，UN 3373標簽等）；由合同承運服務商隔夜送達；若在周五運送，確保在箱子上貼上周六送達的標志。確保實驗室可在周六接收并冷凍運送到的物品。（注：運送監測樣本至實驗室的個人需要滿足生物物質運送的要求。上述個人至少應熟悉IATA包裝須知。）

2.運送至指定的NAHLN實驗室。只能通過承包的隔夜送達服務將樣本送至NAHLN實驗室。附件A包括指定的PRV NAHLN實驗室的名單。

二、提交樣本至NAHLN實驗室

VS人員可聯系VS地區辦公室獲得一次性的血液采集用品。在可能的情況下，血液樣本應用離心機分離出血清。然后將血清存放在離心管中，同提交表格一起送至NAHLN實驗室或USDA實驗室。提交至NAHLN實驗室的所有血液/血清管都必須擁有獨立的條形碼。可聯系NVSL的運送部門獲取條形碼。

血液收集和血清提交推薦的物品/設備：冷卻器；冰袋；血液收集時可選擇的針；10～15毫升的注射器（頂部帶有盧爾鎖）；10毫升的真空容器；豬監測樣本條形碼標簽，WS—聯系布蘭頓·斯密特獲取條形碼 ，VS—聯系NVSL獲取條形碼；裝血清的離心管或冷凍管；離心管運送容器；封口冷凍袋，用作主要和次要的運送容器；紙巾，用作主次運送容器之間的吸收性材料；用離心機分離血清；GPS裝置用于記錄樣本收集的位置；豬保定裝置；提交表格（見附件D）。

在可能的情況下，每個進行PRV檢測的動物至少提供2毫升的清澈、非溶血血清。

三、診斷專家的酌情判斷

執業獸醫提交至NAHLN實驗室進行PRV血清或抗原檢測（監測流程2和3）的樣本必須滿足最低的信息要求。沒有監測所需的最低信息的樣本不適合進行USDA國家PRV監測計劃下的PRV檢測，且不得使用USDA支持的資金進行PRV分析。此外，診斷專家需要遵守本文件中列出的采樣標準。

關于樣本可追蹤性的最低信息要求為：提交樣本的執業獸醫的信息，包含姓名 、城市 、州 、郵政編碼；動物識別號；樣本提交日期；生產地信息應明確為進行采樣而取樣的豬的實際位置；經營場所的ID或經營場所的名稱，必須包括街道、城市、州、郵政編碼。

檢測的樣本應能夠在空間和時間上代表所有提交的樣本。每次提交樣本中最多檢測五個樣本。在執業獸醫提交至實驗室的每份合格樣本上粘貼NVSL提供的獨立條形碼。

診斷專家若有關于樣本檢測和所需信息的問題，應聯系USDA VS NAHLN的協調員。

附件A：指定的NAHLN PRV檢測實驗室的地址和聯系信息（略）

附件B：州、機構及屠宰場進行的PRV監測活動

在屠宰場收集母豬—公豬市場屠宰樣本（監測流程6）。屠宰樣本的檢測將在KS和KY的兩個聯邦PRV實驗室進行。各州應提交所有必要的監測或檢測樣本至USDA堪薩斯和肯塔基地區檢測實驗室，以滿足最低常規監測要求（5%）。

收集用于監測或回溯調查的血清樣本（除屠宰以外）的監管官員應將貼有正確的標簽和條形碼的樣本送至PRV NAHLN實驗室。各州應在提交樣本前聯系NAHLN實驗室，確定其能在不超過指定樣本檢測配額的情況下處理樣本，或各州可聯系其地區傳染病學家決定將樣本送至何處（即哪個NAHLN實驗室）。

為監測流程3“提交至診斷實驗室的豬病例的血清檢測”而選擇的樣本應在時間和空間上能夠代表提交至NAHLN實驗室的所有樣本。每批提交的樣本中最多檢測5個樣本。實驗室將在每個樣本上使用USDA提供的獨立條形碼。

各州列出的預期檢測的樣本目標（略）。

1.野生動物處的野豬PRV監測。WS國家野生動物疾病計劃將在VS官員的幫助下確定PRV采樣的地區。WS負責確定樣本量并根據已知的各州野豬分布情況分配樣本量。通過WS和VS的聯合決定，WS生物學家為PRV監測而收集的樣本將按照WS指導提交至NAHLN實驗室。只有WS提交的樣本適合使用本計劃中的USDA資金。

2.PRV高風險豬群的監測。AVIC和州獸醫應根據高風險豬群的血清檢測流程（監測流程4）列出的標準確定高風險豬群。AVIC/州獸醫應同其地區的傳染病學家合作，從高風險中獲取樣本，確定采集樣本的數量確定最實用的方法。為了幫助各州確定高風險農場的所在地，國家監測為上述高風險的州提供指南。本表（略）列出有文件記錄的野豬的縣，這些縣也報告了飼養了超過1000個豬群及其種豬的密度，可在同地區傳染病學家的咨詢下用作各州的抽樣指南。該表不是絕對的，各州參考或者不參考該表，確定高風險豬所在地區名單。此外，各州可將其他地區和豬群視為“高風險”。監測的目標是快速確定商業豬群中的PRV感染。重點在于檢測接觸野豬的高風險的商業豬群。此類豬群可能在NSU提供的地區內。由當地VS和地區官員確定高風險豬群。只有被定義為“高風險”的豬群才能夠使用聯邦資金支持的高風險豬群檢測流程（監測流程4）。

表1

表2

表3

附件C：AVIC和州獸醫辦公室名錄

可通過查閱以下網站找到目前的AVIC辦公室和詳細的AVIC信息：州動物衛生辦公室可通過查閱以下網站找到目前的州動物衛生辦公室和官員的名單：http://www.nasda.org/cms/7195/8617.aspx

附件D：美國農業部偽狂犬病監測數據表

數據表1，表2是USDA APHIS WS人員使用的例子。只有被授權的人員才能填寫該表格，填寫需符合WS國家野生動物疾病計劃要求。以下并非完整的表格，刪除了一部分說明。

執行監測或傳染病追蹤活動的USDA VS或州人員使用的數據表必須包括在樣本內，并送至合適的PRV NAHLN實驗室獲得檢測資格。

提交的所有樣本都必須有獨立的條形碼。表3、4、5并非完整表格，有部分說明被刪除。

附件E：NAHLN實驗室PRV血液/血清檢測程序

提示，屠宰監測和移動資格，包括展覽（出口/跨州移動）的樣本不適用于此檢測程序。

在對樣本進行PRV檢測之前，選擇豬血液/血清用于PRV檢測的NAHLN實驗室需要確保：已提供所需的流行病學回溯信息；有足夠的血清量；以及血清質量好，無細菌污染或過多的溶血。

若樣本有必要的回溯信息，則應分析樣本以確保其符合定量和定性要求。由于樣本由執業獸醫提交至實驗室進行其他檢測，因此只有在有足夠的血清能進行所有必要的檢測時才進行檢測。若樣本有足夠的血清進行多項檢測（包括PRV），請考慮，如果PRV抗體為疑似/陽性的情況下，必須將樣本轉發至NVSL進行確認檢測。因此，每份樣本應至少含有2毫升的優質血清。

實驗室若為了除USDA監測計劃以外的目的而對樣本進行檢測，則應按照CFR的要求，遵照生產商推薦的測試/復檢程序，并將所有陽性樣本送至NVSL進行確認。

為USDA監測目的而進行血清篩查的實驗室需要按照以下要求處理所有PRV監測血液/血清樣本。

1.查看文件和信息以獲取正確的回溯信息，至少應包括豬所在實際位置（非公司所在地）的郵政編碼或經營場所標識。

2.觀察樣本是否具備足夠的血清量和質量。

3.若樣本適合進行檢測，則在樣本上粘貼USDA提供的條形碼。檢測樣本：篩查檢測PRV gB ELISA，或者自動乳膠凝集試驗（ALA）（實驗室可選擇以上方法之一進行初次樣本篩查，但應保持一種檢測方法）。

若篩查檢測結果為疑似【在PRV監測中，疑似定義在初次檢測中及按照生產商建議的程序進行復測后既非陽性也非陰性（重新測試）的樣本】或陽性，則應在1個工作日內使用PRV g1 ELISA方法重新檢測樣本。

若g1結果為疑似或陽性，將已有檢測結果的所有相關信息連同樣品一起提交至NVSL進行確認檢測。如果使用的是gB篩選檢測，由于臨界值會隨著方法而變化，則提交的信息中應包括使用的是哪種檢測方法。樣本應隔夜運送到NVSL。

運送樣本之前需打電話通報NVSL代表。在處理樣本后，實驗室將在PRV實驗室數據表上記錄所有信息。

樣本保存標準：若樣本在初次篩查中為陰性，可根據實驗室規程廢棄該樣本；若樣本在初次篩查中為陽性，在二次篩查中為陰性，根據實驗室規程廢棄該樣本；若樣本在初次和二次篩查中均為陽性，應將樣本送至NVSL進行再次檢測，并應將樣本及同批所有其他樣本至少保留十五天。

表4

表5

USDA監測計劃中的PRV血液/血清檢測程序見圖1。

注：從USDA WS提交至實驗室的USDA PRV野豬監測樣本只能進行篩查檢測（PRV gB ELISA或自動乳膠凝集）。所有篩查檢測結果，包括疑似、陽性和陰性結果，應報告至USDA WS，國家野生動物疫病計劃。測試野豬血清不需要g1 ELISA。此外，野豬的陽性樣本無須提交至NVSL進行確認檢測，除非因其他監管目的需要進行檢測。

附件F：血清檢測的95/10采樣程序

該采樣程序將用于所有進行PRV檢測的豬群，包括因回溯而檢測的豬群。95/10采樣程序有95%的概率從流行率至少為10%的豬群中發現一個陽性動物。 每個獨立的豬群（不同地點，同一所有者）應作為單獨的豬群進行檢測。以下為滿足95/10程序需要進行檢測的動物數量：數量低于100頭的豬群檢測25頭；數量在100～200頭的豬群檢測27頭；數量在201～999頭的豬群檢測28頭；數量在1000頭以上的豬群檢測29頭。

附件G：PRV通報和響應行動

本附件規定了出現陽性或疑似PRV的實驗室結果而產生的通報和響應行動。本文件并不取代任何獸醫處備忘錄或通報。NAHLN實驗室或NVSL公司報告的疑似或陽性結果將啟動通報和響應行動。NVSL確認的PRV陽性結果預示著全面響應。

1.響應行動。PRV監測計劃中檢測的樣本將由經過培訓的人員在指定的NAHLN實驗室進行初步篩查。上述人員必須按照指定的程序篩選血清、肌紅蛋白和組織以進行PRV監測。若篩查結果為疑似或陽性，則將由愛荷華州艾姆斯市的NVSL進行確認檢測。

若野豬血清在NAHLN實驗室檢測為陽性或不確定性，應將結果報告至WS。WS將通過涉及其野生動物疾病生物學家的認證溝通程序向VS發布實驗室結果。上述樣本無須遞送至NVSL，除非因其他監管或研究目的需要。野豬樣本出現PRV陽性不會啟動下述行動，根據當地監管機構和特定州的野豬群體狀況，州機構和WS可能對野豬的PRV調查結果采取不同的對策。

提交至NAHLN檢測實驗室的血清（包括肌紅蛋白樣本）或組織的疑似或陽性結果，不包括常規的野豬樣本，若NAHLN實驗室認定疑似或陽性結果，則將采取以下行動。

A NAHLN實驗室的行動。第一，立即通過電話或傳真將結果匯報至愛荷華州艾姆斯市的NVSL，按照附件E提交所有樣本至愛荷華州艾姆斯市的NVSL進行確認檢測。不得分離樣本。樣本包括所有必要的文件和此前檢測的結果；第二，在數據表或電子數據表中輸入結果和所需數據。

B NVSL的行動。第一，從NAHLN實驗室接收的樣本進行確認檢測；第二，若結果為陰性，將檢測結果告知提交樣本的實驗室；第三，若結果為陽性，將檢測結果告知提交樣本的實驗室、實驗室所在州的AVIC、動物來源州的AVIC以及地區傳染病學家和豬衛生計劃員工。

◎圖1 PRV血液/血清檢測程序

C NAHLN實驗室所在州、樣本采集州以及豬來源州VS、SAHO的行動，僅在NVSL確定樣本為陽性時進行此類行動。第一，確保提交樣本相關的所有文件和任何鑒定材料安全。第二，確定提交樣本的來源。第三，確定涉及動物的最后一處已知的居住場所。第四，若樣本采集自屠宰場，則收集最初的回溯信息。第五，同地區辦公室的人員溝通調查結果。第六，遵照“偽狂犬病根除的州—聯邦—產業計劃標準”中的規定。

D 當確定樣本為陽性時豬群衛生項目員工采取的行動。第一，告知NCAHEM員工；第二，若有必要，協助地區官員獲取所需的信息；第三，檢查從地區接收的信息。

E 通報。外部到VS：AVIC確保告知州獸醫；在合適的情況下，員工或地區官員將通報立法和公共事務部（LPA）去告知產業和公眾。

注意：如果本節的部分內容不適用或需要修改，則將進行適用的修訂。應通過電子郵件同豬衛生計劃相關部門溝通。

2.NAHLN檢測的疑似或陽性結果在NVSL檢測為陰性。若NAHLN實驗室報告并提交了疑似或陽性結果，NVSL的檢測顯示為陰性，則需要將陰性結果通報到以前得到NAHLN疑似或陽性結果通報的各方。無需要開展進一步的調查行動。

3.NVSL陽性結果的確認。若NVSL確認陽性結果，將執行本部分C到E中概述的程序。控制和清除感染豬群的PRV的相應行動將盡快開始。需立即通報到NAHLN實驗所在州和動物所在州的州動物衛生官員。此外，動物衛生官員應開始執行所有必要的措施，如確定疾病的來源，收集所有追溯信息，并啟動檢疫以防止疾病蔓延。動物衛生官員將遵循“偽狂犬病根除州—聯邦—產業計劃標準”中概述的疾病控制和清除方法。

響應和溝通行動的流程見圖2。

附件H：國家偽狂犬病監測計劃

可在網上查閱國家偽狂犬病監測計劃。網址為：h t t p://www.aphis.usda.gov/vs/nahss/swine/prv/prv_surveillance_plan_final_draft_04_16_08.pdf

◎圖2 響應和溝通行動流程圖