凋亡相關基因P53在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

史 江 蔣軍廣 劉瑞芬 田 蕊 安金路 楚玉潔 崔永亮 張艷梅

(鄭州大學第一附屬醫院 河南省呼吸疾病研究所 河南省高等學校臨床醫學重點學科開放實驗室，河南 鄭州 450052)

腫瘤的發生、發展及轉移與凋亡過程的平衡被打破有著密切關系。促凋亡基因、抑凋亡基因、凋亡效應基因相互作用共同完成凋亡過程〔1〕。本文主要研究P53的臨床生物學意義及在非小細胞肺癌(NSCLC)發生、發展中的作用，期望為NSCLC的預防、診斷、臨床治療和預后判斷提供依據。

1 對象與方法

1.1對象 收集鄭州大學第一附屬醫院2010～2012年由胸外科手術切除的手術標本，且這些標本已經病理證實為NSCLC，共60例作為實驗組，女23例，男37例，年齡45～87〔平均(62.7±17.6)〕歲，腺癌29例，鱗狀細胞癌31例；按組織學分級:高分化14例、中分化29例、低分化17例；按照2002年美國聯合癌癥分類委員會和國際抗癌聯盟制定的TNM分期標準：Ⅰ期19例、Ⅱ期21例、Ⅲ期17例、Ⅳ期3例；伴淋巴結轉移者34例，不伴淋巴結轉移者26例；有胸腔積液者10例，無胸腔積液者50例。所選患者均為首次發現，之前未接受任何方式的抗癌治療。對照組20例均為已經病理學證實為NSCLC的癌旁正常組織(即距腫瘤邊緣超過3 cm)。

1.2方法

1.2.1主要試劑 兔抗人P53單克隆抗體購于北京博奧森生物技術公司；凋亡試劑盒購于美國羅氏公司；SP試劑盒、二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑，購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2.2檢測方法 采用免疫組化染色檢測P53表達。采用TUNEL法檢測細胞凋亡。

1.2.3陽性結果判定 P53陽性為細胞核內出現棕黃色顆粒。①細胞顯色程度：無棕黃色顆粒，顏色與背景無明顯區別為0分；有棕黃色顆粒，顏色高于背景底色為1分；有染色較清晰的棕黃色顆粒，介于1分與3分之間為2分；深棕黃色顆粒多，顏色明顯比背景顏色強的為3分。②陽性細胞比例：0分：無陽性細胞；1分：陽性細胞比例<10%；2分：陽性細胞比例10%～50%；3分：陽性細胞比例>50%。①+②結果所得分值綜合判斷陽性表達，最后得分≥4分為表達陽性，<4分為表達陰性。

1.2.4凋亡細胞的陽性結果判定及凋亡指數(AI)的計算 凋亡細胞經TUNEL法處理后，細胞核被染為棕黃色，使用光學顯微鏡，計數每1 000個腫瘤細胞中凋亡細胞的個數。AI的計算方法:在400倍視野下任意選取10個視野，計數所測的凋亡細胞，AI=凋亡細胞總數/計數總細胞的數×100%。

1.3統計學方法 應用SPSS17.0軟件采用χ2檢驗及直線相關分析。

2 結 果

2.1P53陽性表達 P53在60例NSCLC中表達的陽性率為58.3%(35/60)，在正常肺組織中不表達(0/20)，兩者差異具有統計學意義(χ2=20.741，P=0.000)。P53在伴有淋巴結轉移者的表達陽性率高于不伴淋巴結轉移者(χ2=4.848，P=0.028)。P53的表達與NSCLC患者的性別、年齡、是否吸煙以及腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、病理分型、有無胸膜轉移無關。見表1。

2.2P53與細胞凋亡的關系 P53分值0、1～2、3～4、5～6分的患者AI分別為(4.65±1.68)%、(3.43±1.47)%、(2.22±0.83)%、(1.54±0.56)%,P53與AI呈負相關(r=-0.684,P=0.000)。

表1 NSCLC中P53的表達與臨床病理特征的關系

3 討 論

P53基因是重要的抑癌基因，主要通過調節細胞周期以及凋亡過程從而達到抑制腫瘤細胞無限增殖的功能。P53包括野生型、突變型，野生型P53半衰期短，穩定性較差，用免疫組化法(S-P法)不易檢測〔2〕。而突變型P53是一種促癌基因，其喪失了特異性結合DNA的能力，并且可以和野生型P53結合形成結構穩定的四聚體，以致野生型P53失去促進可能發生癌變的細胞或腫瘤細胞失活或凋亡的作用。

突變型P53在肺癌、胃癌、食管癌等腫瘤中均有高表達，也是人類遺傳病Li-Fraumeni綜合征的重要病因〔3〕。王岸柳等〔4〕研究結果顯示在人神經膠質瘤中的表達比在腦的正常組織中的表達高，且在Ⅲ、Ⅳ期的表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ期的表達。焦悅〔5〕研究發現P53在正常組織中無表達，卵巢癌中的表達較高，隨分化程度降低表達升高，隨臨床分期升高表達升高。本實驗對NSCLC及正常肺組織中表達差異性的研究結果與上述研究中的結果一致，在不同腫瘤中的表達均高于在正常組織中的表達，提示P53的表達與腫瘤的發生有關。在對臨床病理特征關系的研究與楊錫貴等〔6〕的研究結果一致，即與伴或不伴淋巴結有關，與Uramoto等〔7〕的研究結果不一致，其認為P53的表達與組織分型有關(P=0.03)，而與有無淋巴結轉移無關，這可能與病例的選擇、種族差異等多種因素有關。有文獻研究P53高表達更易產生化療耐藥或放療不敏感〔8〕，有文獻認為P53表達與NSCLC預后的有關系〔9〕，本實驗尚未涉及關于治療方面的研究，因此P53與NSCLC的治療及預后的關系有待進一步研究證實。

綜上所述，P53的表達與NSCLC的發生、發展關系密切，其表達異常可能作為臨床檢測NSCLC的指標，提高了單基因檢測的準確率。P53表達的異常與不同的臨床病理特征有關，可能作為判斷預后的指標。

4 參考文獻

1鄭元元，蔣軍廣，趙 娜，等.γ-synuclein 在非小細胞肺癌中的表達〔J〕.中國老年學雜志，2011；31(24)：4771-3.

2Rogel A,Popliker M,Webb CG,etal.p53 cellular tumor antigen:analysis of mRNA levels in normal adult tissues,embros and tumors〔J〕.Mol Cell Biol,1985;5(10):2581-855.

3李大虎，張令強，賀福初，等.突變體p53研究進展〔J〕.遺傳,2008；30(6):697-704.

4王岸柳，劉朝霞，李 光，等.p53和Ki67在人腦膠質瘤中的表達及意義〔J〕.河北醫藥,2010；32(22):3116-7.

5焦 悅.卵巢上皮性腫瘤中P27和P53蛋白的表達及其相關性研究〔D〕.河北醫科大學碩士學位論文,2010.

6楊錫貴，張學德，崔立獻.非小細胞肺癌組織COX-2和p53表達及其臨床意義的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2009；16(10):752-4.

7Uramoto H,Sugio K,Oyama T,etal.Expression of the p53 family in lung cancer〔J〕.Anticancer Res,2006；26(3A):1785-90.

8武珊珊，劉吉福，李 琳，等.人肺癌組織中Ki67核抗原、p53和MDR-1基因表達的臨床病理特征觀察〔J〕.實用醫學雜志，2009；25(16):2677-9.

9王 艷，白淑平，王曉紅，等.非小細胞肺癌組織中VEGF與P53蛋白的表達及意義〔J〕.現代生物醫學進展,2007；7(11):1684-6.