黃芪藥材中黃芪甲苷UPLC—ELSD含量測定方法的優化

王磊，蘇麗

摘 要：本文采用高校液相測定了黃芪藥材中黃芪苷的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5？滋m），甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動相，ELSD檢測器漂移管溫度90℃，氣體流速：3.0L·min-1，柱溫：30℃。黃芪苷在20～350微克/毫升范圍內呈良好的線性關系。黃芪苷的平均回收率為99.3%，RSD為0.88%（n=6）；此方法簡便、準確、重現性好，可用于黃芪藥材中黃芪苷的含量測定。

關鍵詞：黃芪藥材；黃芪苷；含量

黃芪的藥用迄今已有2000多年的歷史，具有增強機體免疫功能、保肝、、調節血壓、抗病毒性心肌炎、抗應激、降壓和較廣泛的抗菌作用。《本草經疏》記載：“功能實表，有表邪者勿用；能助氣，氣實者勿用；能內塞，補不足，胸膈氣閉問，腸胃有積滯者勿用；能補陽，陽盛陰虛者忌之；上焦熱盛，下焦虛寒者忌之；病人多怒，肝氣不和者勿服；痘瘡血分熱甚者禁用。”現代醫學研究表明，黃芪含皂甙、多種氨基酸、葉酸及硒、鋅、銅等多種微量元素。本文采用高校液相測定了黃芪藥材中黃芪苷的含量。

1 儀器與試藥

電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；YL9100液相色譜儀（汕頭市科毅儀器設備有限公司）；SB25-12DTS雙頻超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；CO-Ⅳ色譜柱溫箱（恒溫柱箱）（天津琛航科苑科技發展有限公司）；蒸發光散射檢測器（上海通微分析技術有限公司）；MPC-K6s加熱制冷型恒溫水浴油浴（北京賽美思儀器設備有限公司）；美國澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統（上海和泰儀器有限公司）；10升數控型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）。黃芪苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、甲醇（安徽勝達化工科技有限公司）、冰醋酸（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、乙醇（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、三乙胺（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、正丁醇（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫C18規格為（4.6mm×250mm，5？滋m）；甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動相，ELSD檢測器漂移管溫度90℃，氣體流速：3.0L·min-1。理論板數按黃芪苷峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取黃芪藥材粗粉，精密稱取，置索氏提取器中，加甲醇80ml，冷浸12小時，回流4小時，提取液回收甲醇并濃縮至干，殘渣用30毫升純化水溶解，用水飽和過的正丁醇萃取三次，每次30毫升，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘渣用50%乙醇溶液溶解轉移至25毫升容量瓶內并分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取黃芪苷對照品約5毫克，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含100微克的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

取實驗用試劑，依上述方法測定，結果在黃芪苷出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準曲線的制備

制備濃度為20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A（微克）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，黃芪苷對照品在20～350微克/毫升范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

依照2.3項下制備對照品溶液，精密吸取黃芪苷對照品溶液10μL重復進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.69%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現性試驗

稱取同一批的黃芪藥材樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.68%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的黃芪苷對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.88%。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定黃芪藥材三批樣品中黃芪苷的含量。

3 討論

分別考察甲醇-乙腈-水（20∶20∶60），乙腈-水（40∶60），甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氫鈉∶甲醇（體積比為15∶85）不同比例的流動相，結果以甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動相。此方法簡便、準確、重現性好，可用于黃芪藥材中黃芪苷的含量測定。黃芪藥材中黃芪苷的含量應為不少于0.4毫克/克。

參考文獻

[1]李翔，朱臻宇，朱東亮，柴逸峰，婁子洋.高效液相色譜-蒸發光散射檢測梯度洗脫法測定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量[J].第二軍醫大學學報，2006年03期.

[2]裴彩云，王宗權，賈繼明，宋劍.HPLC-ELSD內標法測定8個產地黃芪藥材、飲片中黃芪甲苷的含量[J].中國中藥雜志，2011年14期.

[3]余東升，韋達，姚昶，潘立群.HPLC-ELSD法測定黃芪注射液濃縮液微乳中黃芪甲苷含量[J].安徽中醫學院學報，2007年02期.

[4]劉冰，劉振堯，朱乾華，楊季冬.近紅外光譜法同時測定黃芪精口服液中黃芪多糖和黃芪甲苷的含量[J].分析科學學報，2011年02期.

[5]趙海欣，趙連中，周明慧.HPLC-ELSD法測定雙瓜糖安膠囊中黃芪甲苷的含量[A]；2010年江蘇省藥學大會暨第十屆江蘇省藥師周大會論文集[C]；2010年.

[6]周昕，謝瑞芳，顧軍花，顧希鈞，劉罡一，余琛，陳湘君.HPLC-MS-MS測定復方自身清顆粒中黃芪甲苷的含量[J].陜西中醫，2008年04期.