肉兔人工授精技術(shù)操作規(guī)程

張建忠

一、配套儀器設(shè)備

1.采精設(shè)備。塑料杯、集精杯、兔用膠皮假陰道、凡士林。

2.鏡檢設(shè)備。顯微鏡、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙。

3.保溫設(shè)備。恒溫水浴鍋（35～38℃，用于保證取出精液的溫度）、恒溫烘箱、雙制冷電子冰箱（可根據(jù)需要調(diào)溫、用于精液保溫和運輸）。

4.稀釋液。精液稀釋液粉劑，用雙蒸水稀釋。

5.輸精設(shè)備。兔用輸精槍、輸精槍套管。

6.其他。蒸餾器、酒精棉、溫度計等設(shè)備。

二、種兔前期準(zhǔn)備

1.種母兔準(zhǔn)備。種母兔配種前要進(jìn)行催情處理。其催情方法一是調(diào)控兔舍光照，光照強(qiáng)度控制在開燈后把手放入兔籠內(nèi)能看清掌紋為宜，光照時間為每天在18小時以上；二是用藥物催情（催情散或孕馬血清）。初產(chǎn)種母兔：配種前用催情散拌料飼喂（1包催情散拌20公斤飼料），連續(xù)補(bǔ)充光照3～5天，當(dāng)母兔外陰大紅時進(jìn)行配種。經(jīng)產(chǎn)種母兔：從母兔產(chǎn)仔后23天開始，連續(xù)補(bǔ)充光照5天至仔兔斷奶。仔兔斷奶當(dāng)天給母兔注射孕馬血清促性腺激素，按0.3毫升/只的劑量注射，注射后2天內(nèi)觀察母兔外陰，當(dāng)外陰大紅時進(jìn)行配種。

2.采精器準(zhǔn)備。采精器包括塑料杯外殼、兔用膠皮假陰道內(nèi)胎和集精杯三部分。將集精杯放入內(nèi)胎的孔中，再將內(nèi)胎塞入外殼中，集精杯露出外殼，另一端的集精杯開口處向外翻轉(zhuǎn)套在外殼上，扎緊，使其不漏水、不透氣，并經(jīng)消毒處理。然后從外殼后部緩慢注入50℃的溫水。采精器準(zhǔn)備好后，放入 54℃的雙制冷電子冰箱內(nèi)，然后帶入種兔舍準(zhǔn)備采精。

三、精液采集

1.抓種兔。先挑選體質(zhì)健壯、性欲旺盛的公兔；然后左手抓誘導(dǎo)母兔耳朵及頸皮，右手拿假陰道及套在假陰道上的集精杯，伸到母兔腹下。

2.采精。公兔陰莖進(jìn)入假陰道后，抽動數(shù)秒后向前一挺，后軀蜷縮向一側(cè)倒去，表示其射精完成。采精者應(yīng)立即將假陰道口端抬高，使精液流入集精杯，然后迅速把采精器從母兔腹下取出，豎直采精器，取下集精杯，放入36℃雙制冷電子冰箱內(nèi)。

四、精液檢測

1.送檢。采精結(jié)束后，立即把雙制冷電子冰箱送回化驗室，把集精杯連同試管架放入36℃的恒溫水浴鍋中。取干燥清潔載玻片，用膠頭滴管吸取1滴精液涂于載玻片上，放在160倍顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

2.品質(zhì)檢測。（1）外觀觀察：肉眼觀察精液顏色（正常為灰白色或乳白色）、精液混濁度（似云霧滾動表示活力大、密度大），聞氣味（正常為無臭味）。（2）鏡檢觀察：觀察精子活力。活力檢查時，精液不能太少，過少容易風(fēng)干。可加1～2滴精液于載玻片上，再加數(shù)滴稀釋液，觀察精子運動。精液中有3/5以上的精子呈前進(jìn)式運動，才能用于精液稀釋和輸精。

五、精液稀釋

1.稀釋倍數(shù)。按檢測的精子活力分值來選擇合適的稀釋倍數(shù)。一般分值為5的稀釋5～10倍，分值為4的稀釋5倍，分值為3的稀釋2倍。

2.精液稀釋劑的配制。取一包精液稀釋劑粉，使其完全溶解在100毫升雙蒸水中。雙蒸水溫度控制在36℃，盛放稀釋劑的器皿用雙蒸水沖洗干燥后，可以使用雙蒸水潤洗1遍（雙蒸水放置時間很長的話，必須煮沸，以排除水中二氧化碳，保證水的pH值）。

3.稀釋。用玻璃棒引流，緩慢將配制好的精液稀釋液沿集精杯壁流入精液中，然后輕輕搖勻。

4.保存。必須現(xiàn)配現(xiàn)用，同時要縮短從采精到輸精的時間，以有效提高受孕概率。

六、輸精

1.抓種母兔。可兩人協(xié)同操作，助手一只手抓母兔耳朵及頸皮，把母兔放到輸精車上，另一只手按住母兔背腰。輸精者左手拇指與其余四指抓住母兔尾根向上提并外翻，使母兔后軀懸空、外陰充分暴露。

2.輸精手法。輸精者右手持槍，用槍頭撥開母兔外陰，沿陰道背部向下進(jìn)槍，遇到阻力時，輸精槍后退再試探性向前進(jìn)，調(diào)整槍頭角度，經(jīng)產(chǎn)母兔槍頭向下，初配母兔槍頭向上，一般稍用力可過關(guān)。插入適宜深度為12～14厘米。兔為雙子宮動物，太深易單側(cè)子宮受孕，過淺精子不能到達(dá)受精部位。

3.輸精完成。輸完精后，緩慢拔出輸精槍，在母兔后軀輕拍一下，再注射經(jīng)生理鹽水稀釋的促排3號0.5微克，刺激母兔排卵。

4.注意事項。（1）避免強(qiáng)制輸精：當(dāng)母兔掙扎，背腰拱起，后肢觸及物體、努責(zé)時不可強(qiáng)制輸精，以免給母兔造成損傷。（2）嚴(yán)格消毒：輸精槍在吸取精液前，用精液稀釋液清洗兩遍，甩凈精液稀釋液后再倒入精液，1次只倒20毫升，減少在輸精過程中紫外線、震蕩等對精液的損傷。輸精前排盡槍內(nèi)空氣，1支輸精管只用于1只母兔。（3）減少精液震蕩：在輸精過程中，減少對精液的震蕩。因為在震蕩時，精液中的二氧化碳會溢出、氧氣溶入，使精子活動量增加，消耗精子能量，會加快精子衰竭死亡。（4）在操作室進(jìn)行精液稀釋時，工作人員嚴(yán)禁吸煙，因為煙氣對精子具有很大的殺傷力。

七、輸精后管理

1.保持兔舍安靜。輸完精后，為了更好地讓母兔受孕，所有人員必須撤出兔舍，給母兔營造一個安靜舒適的環(huán)境。在輸精前加料以及采精前加料，保證水、料充足。

2.母兔摸胎。輸精以后，仍要保持每天18小時的光照，直至母兔摸胎。母兔在配種后12～15天進(jìn)行摸胎，以確認(rèn)母兔是否受孕。

（重慶市忠縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心 郵編：404300）