低血紅蛋白糖尿病人在HLC-723G8分析儀上測定糖化血紅蛋白方法的探討

陶純剛

（鎮江市丹徒區人民醫院檢驗科 江蘇 鎮江 212028）

對于貧血病人由于Hb異常或含量過少，常常導致儀器無法給出測定結果。本試驗為解決這個問題而提出，現對實驗結果做如下報告。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本院內分泌科糖尿病住院和部分門診患者HbA1c標本20份，其中血紅蛋白含量在≥100g/L的標本10份，＜100g/L的標本10份。每次檢測前及全部標本檢測后進行兩個水平質控品測定，均顯示檢測結果在控。

1.2 儀器與試劑

五分類血球計數儀邁瑞5380，用來測量標本血紅蛋白濃度，以便對標本行分組。日本TOSOH HLC 723G8糖化血紅蛋白分析儀，所用試劑為儀器配套試劑，質控品為Roche公司生產。所用的采血管均為EDTA-K2抗凝真空定量采血管。

1.3 方法

所有標本均采雙份平行血樣。首先將患者其中一份EDTA-K2抗凝的全血標本測量其血紅蛋白含量，記錄結果，并按≥100g/L和＜100g/L分A,B兩組。分別將兩組標本直接上723G8糖化血紅蛋白分析儀測量，并記錄結果。然后，將A,B兩組對應的另份平行樣本以500G/5分鐘離心,將離心后A組對應的平行標本用微量移液器吸出300ul血漿加入到先前已測過GHb的A組樣本中，使之成為稀釋過的A’組樣本。對B組標本對應的平行標本則用微量移液器吸出300ul血漿棄去，使之成為濃縮過的B’組樣本。充份混均均A’,B’兩組標本。分別測定A’,B’組樣本血紅蛋白含量，記錄結果，并上723G8分析儀測量HbA1C含量，并記錄全部結果。

1.4 統計學處理

使用SAS9.2統講軟件，根據數據資料求出各組平均值及標準差，以±s表示，組間數據采用t檢驗。

2.結果

2.1 A組與A’組的數據比較

A組樣本為血紅蛋白正常范圍內標本，A’組為A組經血漿稀釋過的試驗標本。其中有一個樣本經稀釋過后血紅蛋白濃度太低的緣故，未能測定出HbA1c結果。所以A2及A2’樣本數據在計算時未計入。A組樣本及A’組樣本的HbA1c結果分別為（8.30±1.55)%，（8.31±1.52)%。兩均數間比較用t檢驗，P＞0.05差異無統計學意義。詳見表1。

表1 A組與A'組的HbA1c實驗數據

2.2 B組與B’組的數據比較

B組樣本為血紅蛋白低于正常范圍標本，B’組為B組經離心去除部分血漿的濃縮的試驗標本。其中有一個樣本未濃縮前血紅蛋白濃度太低的緣故，未能測定出HbA1c結果。所B7及B7’樣本數據在計算時未計入。B組樣本及B’組樣本的HbA1c結果分別為（8.54±1.64)%，（8.52±1.62)%。兩均數間比較用t檢驗，P＞0.05差異無統計學意義。詳見表2。

表2 B組與B'組的HbA1c實驗數據

3.討論

實驗數據顯示，HLC-723G8糖化血紅蛋白分析儀對測量分析的樣本的血紅蛋白濃度是有一定要求的，從實驗數據上看，當血紅蛋白濃度低于60g/L左右時,就不能給出實驗結果。儀器給出的時間對輸出信號作積分的可靠值在500～2700mV·s。可見對血紅蛋白的濃度是有一定范圍要求的。由于采用的是HPLC技術，使用陽離子交換柱，用3種不濃度鹽溶液所形成的梯度洗脫液根據血紅蛋白所帶電荷差異分離出6種血紅蛋白，測定分離后的各種Hb含量從而獲得HbA1c的百分含量。所以當我們對貧血比較嚴重的樣本采取適當的濃縮，使其Hb在儀器測量范圍內測定時，應該對血紅蛋白各組分含量的百分比是沒有什么影響的。本試驗正是基于此假設進行的，試驗的數據結果很好的驗證了我們的假設。