UBE3C在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義＊

傅平，周凱，林良慶，黃琪，劉小豐，洪華章

(江西省人民醫(yī)院二部普外科，南昌 330006)

結(jié)直腸癌是世界上第3常見腫瘤，僅次于肺癌、乳腺癌，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率也呈逐年增高的趨勢，嚴(yán)重危害人們生命健康[1，2]。泛素連接酶E3C（UBE3C）是泛素連接酶HECT家族成員，目前已知在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。然而UBE3C與結(jié)直腸癌的關(guān)系國內(nèi)外尚無相關(guān)研究，本研究采用免疫組化技術(shù)明確UBE3C在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)，結(jié)合臨床病理資料，探討其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 從2010年1月-2017年8月在我院行根治術(shù)的結(jié)直腸癌病例中，選取56例作為研究對象，取材部位為腫瘤及癌旁正常組織（距離腫瘤邊緣＞5cm），全部標(biāo)本均經(jīng)病理證實。其中，男性30例，女性26例，中位年齡56.8歲。所有病例術(shù)前均未接受放化療。⑴腫瘤部位：右半結(jié)腸11例，左半結(jié)腸12例，直腸33例。⑵淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例。⑶TNM分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，Ⅳ期8例。

1.2 試劑來源及實驗方法 兔抗人UBE3C多克隆抗體購自Sigma Aldrich公司；SP免疫組化試劑盒購自福州邁新公司。免疫組化采用S-P法：常規(guī)切片脫蠟，梯度酒精脫水后，3%過氧化氫滅活內(nèi)源性生物素酶，滴加一抗，4℃冰箱內(nèi)過夜孵育，滴加二抗，DAB顯色，蘇木精襯染，脫水，透明、中性樹膠封固。已知UBE3C陽性的大腸癌組織作陽性對照，PBS代替第一抗體作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 UBE3C陽性定位于細(xì)胞質(zhì)，出現(xiàn)黃色顆粒者為陽性，隨機計數(shù)5個高倍鏡視野（×400），分別記錄細(xì)胞顯色度及陽性細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，進行分級評分。顯色度評分：不著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分；陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)≤5%為0分，在6%-25%者為1分，26%-50%為2分，≥51%者為3分；兩者乘積，0-2分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UBE3C在結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá) 56例結(jié)直腸癌組織中，UBE3C陽性42例，陰性14例，陽性率為75%。56例癌旁正常組織中，UBE3C陽性9例，陰性47例，陽性率為16.1%。UBE3C在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織（P≤0.05），見圖 1。

圖1 UBE3C在不同結(jié)直腸組織中的表達(dá)（免疫組化×400）

2.2 UBE3C在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 UBE3C在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有關(guān)（P≤0.05），與性別、發(fā)病部位無關(guān)（P＞0.05）。 具體情況見表 1。

表1 UBE3C在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

3 討論

泛素-蛋白酶體途徑是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)選擇性降解的重要途徑，該途徑是一個三酶級聯(lián)反應(yīng)過程，需要泛素活化酶E1、泛素交聯(lián)酶E2和泛素連接酶E3共同參與，而泛素連接酶E3決定了整個反應(yīng)的特異性[3，4]。泛素連接酶E3通過調(diào)控靶蛋白的泛素化，廣泛參與細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過程，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5，6]。

UBE3C基因定位于7q36.3，包含23個外顯子，其編碼的UBE3C蛋白共有1083個氨基酸，蛋白分子量為126kDa，屬于泛素連接酶HECT家族蛋白。Jiang等[7]研究發(fā)現(xiàn)UBE3C是新的潛在癌基因，在原發(fā)性肝癌細(xì)胞株Huh-7、MHCC-97H中，UBE3C蛋白表達(dá)明顯升高，敲減UBE3C基因后蛋白表達(dá)明顯下降，同時肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力明顯減弱。Tao等[8]研究發(fā)現(xiàn)UBE3C是原發(fā)性肝癌新的治療靶點，miR-542-3p通過下調(diào)UBE3C表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT） 及轉(zhuǎn)移。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，UBE3C在黑色素瘤[9]、腎細(xì)胞癌[10]、子宮內(nèi)膜癌[11]等惡性腫瘤中均呈高表達(dá)，并通過增強上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、激活Wnt/β-catenin旁路等機制，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但關(guān)于UBE3C在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及作用國內(nèi)外尚無相關(guān)研究。

本研究結(jié)果表明：⑴UBE3C在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，而在癌旁正常組織中表達(dá)顯著降低，兩者有顯著性差異，表明UBE3C高表達(dá)在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中有重要的促進作用。⑵UBE3C在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNMⅢ期+Ⅳ期的結(jié)直腸癌組織中明顯高表達(dá)，說明UBE3C與結(jié)直腸癌的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為判斷結(jié)直腸癌預(yù)后的潛在標(biāo)記物。