金櫻子降脂泡騰片研制及其降血脂功效研究

程金生 ，黃靖瑜 ，鐘瑞敏 ，曾佛妹 ，黎嘉珠 ，陳義鋁 ，林鋇詩，莫藝萍，蔡浩強(qiáng)

（1.韶關(guān)學(xué)院 英東食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 韶關(guān) 512005；2.嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院客家養(yǎng)生保健研究所，廣東 梅州 512021）

金櫻子（Rosa laevigata Michx）屬薔薇科薔薇屬植物，又名糖罐子、野石榴等.在歷代醫(yī)書如《雷公炮炙論》《本草綱目》等均有記載.其果實(shí)、花、葉和根均入藥［1］.金櫻子是原國家衛(wèi)生部公布的88種藥食同源資源之一，廣泛分布于我國廣東、廣西等南方諸省［2-4］，相關(guān)深加工產(chǎn)品符合現(xiàn)代健康理念，開發(fā)價值高.

圖1 金櫻子花朵（A）及果實(shí)（B）

高血脂是一種嚴(yán)重危害人類生命健康和質(zhì)量的熱能代謝紊亂病，是眾所周知的心腦血管疾病最為重要的獨(dú)立危險因素，可直接引起一些嚴(yán)重危害人體健康的疾病，如冠心病、心腦血管疾病等慢性疾病.權(quán)威數(shù)據(jù)顯示，在2002年以前我國高血脂的患病率為18.6%，大約1.6億人［5］.而到了2016年，中國成人血脂異常總體患病率高達(dá) 40.40%，接近全國人口的一小半，較2012年大幅提升［6-7］.傳統(tǒng)的他汀等西藥治療高血脂具有很大的副作用［8］，因此由傳統(tǒng)的金櫻子等藥食同源資源中尋找健康破解密碼，研制低副作用的天然降脂產(chǎn)品迫在眉睫，同時該類產(chǎn)品也具有廣闊的產(chǎn)業(yè)前景.

應(yīng)用超聲波輔助浸提等技術(shù)，從金櫻子中高效提取金櫻子多糖活性成分，深入研究不同提取條件對金櫻子多糖提取效率的影響.并以所提取的金櫻子多糖為主要原料，配伍符合食品加工規(guī)范的泡騰崩解劑、填充劑等輔料，設(shè)計制備金櫻子降脂泡騰片.并進(jìn)一步通過構(gòu)建高血脂動物模型，有針對性的開展金櫻子多糖降脂動物實(shí)驗，對金櫻子多糖降血脂效果進(jìn)行驗證，為金櫻子天然降血脂產(chǎn)品開發(fā)提供一定借鑒.

1 材料和方法

1.1 試驗試劑

金櫻子采自廣東韶關(guān)市曲江區(qū)大塘鎮(zhèn)附近山區(qū).健康昆明種小白鼠50只，3月齡，體重18～22 g，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗動物中心提供［SCXK（粵）2017-0092］；1.5%膽固醇、15%甘油三酯購于上海化學(xué)試劑有限公司；洛伐他汀顆粒由廣東大森林連鎖藥店有限公司購買；Sevage試劑（氯仿：異戊醇 =3:1混合搖勻）、淀粉漿（10%）和透析袋MD25(8 000-14 000)等材料購于廣東韶關(guān)市新創(chuàng)意實(shí)驗設(shè)備有限公司；甘露醇、檸檬酸、碳酸氫鈉、聚乙二醇6 000等常規(guī)試劑均購于阿拉丁上海有限公司；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測定試劑盒購于鄭州萬華生物技術(shù)有限公司.實(shí)驗用水為蒸餾水.

1.2 儀器設(shè)備

800B型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；AL807系列溫度控制器（深圳市亞特克電子有限公司）；WAY-2S型數(shù)字阿貝折射儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；超聲波輔助浸提設(shè)備（榮匯，RHTQ-G）；艾康便攜式快速血脂分析儀；UV－1100紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；TDP型單沖壓片機(jī)（上海天琪制藥機(jī)械廠）；崩解時限電測（江陰市康和機(jī)械制造有限責(zé)任公司）；PH-3C型測酸儀（北京中慧天誠有限公司）；恒溫振蕩培養(yǎng)箱HZQ-X100（江蘇杰瑞爾電器有限公司）；HHY-78X-6A型片劑四用測定儀（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；LC-QRJ01商用切片機(jī)（樂創(chuàng)科技公司）；臺式電鏡TM3030（日本日立公司）等.

1.3 金櫻子多糖提取純化

先將切片機(jī)的刀調(diào)到最大限度,將金櫻子送入,將切制后的金櫻子篩去絨毛,再倒入清水中淘洗沉去種核,撈出，40℃下恒溫烘干48 h.將烘干的金櫻子，在粉碎機(jī)上粉碎，制成金櫻子干粉，用40目篩子過篩，得篩選后的金櫻子干粉.加入乙醚浸泡6 h脫脂，去乙醚，自然揮干（或60℃下石油醚回流脫脂2h）.應(yīng)用經(jīng)預(yù)實(shí)驗后確定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇超聲波輔助浸提技術(shù)提取1次，脫黃酮，再用超聲波熱水（蒸餾水）輔助浸提3次，合并水提取液應(yīng)用懸浮式結(jié)晶法冷凍濃縮后，濃縮液以95%乙醇沉淀，沉淀加水溶解，采用較溫和的Sevage法（氯仿：異戊醇 =3∶1混合搖勻）脫游離蛋白.加入Sevage試劑后，置恒溫振蕩器中振蕩過夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀，離心（3 000 r/min）分離.再將除去蛋白后的多糖溶液置透析袋中，蒸餾水流水透析48 h，每6～8 h更換1次蒸餾水，除去小分子雜質(zhì).再用乙醇洗滌沉淀3次、真空冷凍干燥后即得金櫻子純多糖粉末原料.

1.4 金櫻子降脂泡騰片制備

采用濕法制粒工藝：將潤滑劑粉碎，過160目篩，與金櫻子多糖粉末原料與酸源、填充劑、堿源、矯味劑、黏合劑、發(fā)泡劑、崩解劑等其它輔料混合均勻，經(jīng)制粒（12目）、干燥（50±5℃）、整粒（14目）、壓片等工藝即得金櫻子降脂泡騰片，規(guī)格為50 mg/片.

1.5 小鼠喂養(yǎng)、給藥及血脂檢測

按文獻(xiàn)方法［9-10］配置高脂飼料，并進(jìn)行高血脂小鼠造模.造模后小鼠經(jīng)實(shí)驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨即分為5組：空白對照組、西藥（洛伐他汀）對照組、金櫻子泡騰片低劑量組、金櫻子泡騰片中劑量組、金櫻子泡騰片高劑量組.每組10只，雌雄各半.分組后空白對照組喂以基礎(chǔ)飼料，自由飲水.西藥對照組除基礎(chǔ)飼料外，每天下午2點(diǎn)灌胃1片包洛伐他汀片（20 mg/片，搗爛水沖服）；金櫻子泡騰片低、中、高劑量組喂以基礎(chǔ)飼料外，每天下午2點(diǎn)灌胃金櫻子降脂泡騰片（50 mg/片，搗爛水沖服，低劑量組每天四分之一片，中劑量組每天半片，高劑量每天一片）.所有實(shí)驗組均可自由飲水，連續(xù)兩周.

血脂測定前禁食不禁水12 h，斷頭取血，37℃溫水水浴1 h，3 500 r/min離心15 min，分離血清,用總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒測定各組實(shí)驗小鼠血清中脂質(zhì)情況.

2 結(jié)果與討論

2.1 金櫻子提取正交實(shí)驗研究

為進(jìn)一步優(yōu)化金櫻子多糖提取工藝，本文采用四因素三水平正交試驗法，確定時間、溫度、料液比、乙醇濃度，以確定最佳提取工藝.深入研究發(fā)現(xiàn)，四種因素對多糖提取率的影響程度依次為乙醇濃度＞料液比＞時間＞溫度.如表1實(shí)驗數(shù)據(jù)所示，當(dāng)提取溫度在95℃，提取時間為1 h，料液比為1/15，乙醇濃度為90%時，金櫻子多糖提取率最高，可達(dá)2.38%.

表1 金櫻子多糖提取工藝研究

2.2 金櫻子降脂泡騰片制備

感官評價、崩解時限、溶解性實(shí)驗等實(shí)驗結(jié)果顯示，當(dāng)以所提取的金櫻子多糖為主要原料、以聚乙二醇6 000為潤滑劑、以乳糖及甘露醇為填充劑、以檸檬酸為酸源、碳酸氫鈉為堿源、薄荷醇為矯味劑、黏合劑為淀粉漿（10%）、十二烷基硫酸鈉為發(fā)泡劑、微粉硅膠為崩解劑時，所制備金櫻子泡騰片在外觀、硬度、口感、溶解性，泡騰效果、崩解時限等方面具有較佳效果.經(jīng)深入研究，金櫻子降脂泡騰片優(yōu)化配方如下：金櫻子多糖19.05 g，檸檬酸6 g，乳糖8 g，甘露醇6 g，碳酸氫鈉5 g，聚乙二醇6 000用量為2.5 g，微粉硅膠1 g，十二烷基硫酸鈉0.15 g，薄荷醇0.3 g，羥丙基纖維素2 g（配成適當(dāng)水溶液），共制 1 000片，每片50 mg（如圖 2 所示）.

2.3 金櫻子降脂泡騰片降脂功效研究

實(shí)驗數(shù)據(jù)顯示，造模后高血脂小鼠（空白對照組）TC、TG、LDL-C均維持較高水平（見表2），顯示高脂小鼠造模成功.本工作選用最典型的降脂西藥洛伐他汀作為陽性對照藥物開展對比降脂研究.如表2中所示陽性對照組數(shù)據(jù)，西藥陽性對照組與空白對照組相比，其血清中TC、TG、LDL-C含量均顯著降低（P＜0.01，如空白對照組TC含量為5.51±0.28，而西藥陽性對照組TC含量則為2.71±0.24，后者顯著低于前者），說明洛伐他汀降血脂效果顯著.

圖2 所制備金櫻子降脂泡騰片

表2 金櫻子降脂泡騰片（RLET）對高血脂實(shí)驗小鼠血清中血脂水平的影響（-(-脂)±s）

進(jìn)一步的實(shí)驗數(shù)據(jù)顯示：金櫻子降脂泡騰片實(shí)驗組（低、中、高）與空白對照組（造模后高血脂小鼠組）相比，其血清中TC、TG、LDL-C含量均呈現(xiàn)較顯著的下降趨勢，給藥的低、中、高劑量組之間的血清各項指標(biāo)也有顯著性差異（P＜0.05），并呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系.但值得注意的是，金櫻子降脂泡騰片低、中、高劑量組相對西藥陽性對照組，其降脂優(yōu)勢并不明顯.僅有高劑量組在TC、TG和LDL-C三項指標(biāo)表現(xiàn)上全面優(yōu)于西藥陽性對照組（如LDL-C血清含量在RLET高劑量組為0.51±0.11，西藥陽性對照組相應(yīng)數(shù)據(jù)為0.59±0.15，前者明顯優(yōu)于后者）.RLET低劑量組三項數(shù)據(jù)則全面輸給西藥陽性對照組，顯示RLET給藥量在金櫻子降脂作用中也扮演重要角色.RLET中劑量組則在TC、TG兩項指標(biāo)上優(yōu)于西藥陽性對照組（如TG分別是0.52±0.23（RLET中劑量組）和0.55±0.12（陽性對照組）），但血清中LDL-C含量卻明顯高于西藥陽性對照組.

上述數(shù)據(jù)顯示，所制備金櫻子降脂泡騰片已具有較全面的降脂功效，相對空白對照組，其TC、TG、LDLC三項指標(biāo)均顯著降低.且相對他汀類西藥，金櫻子降脂泡騰片作為藥食同源深加工產(chǎn)品，其在天然健康、低副作用等方面更具優(yōu)勢.另一方面，金櫻子降脂泡騰片在降脂功效上還有待進(jìn)一步提升空間，有必要圍繞金櫻子降脂藥物劑型設(shè)計、降脂功效優(yōu)化及降脂機(jī)制等方面開展更深入的研究.

3 結(jié)論

針對我國成人血脂異常總體患病率高、傳統(tǒng)西藥治療副作用大等現(xiàn)實(shí)問題，應(yīng)用超聲波輔助浸提等技術(shù)，從金櫻子中高效提取金櫻子多糖活性成分，深入研究不同提取條件對金櫻子多糖提取效率的影響.以所提取的金櫻子多糖為主要原料，配伍符合食品加工規(guī)范的酸源、填充劑、潤滑劑、矯味劑、發(fā)泡劑、崩解劑等輔料，成功制備金櫻子降脂泡騰片.并通過構(gòu)建高血脂動物模型，有針對性的開展所制備金櫻子泡騰片降脂驗證實(shí)驗.實(shí)驗數(shù)據(jù)表明，所制備金櫻子降脂泡騰片已具有較全面的降脂功效，相對空白對照組，其血清中TC、TG、LDL-C三項指標(biāo)均顯著降低.與臨床上應(yīng)用廣泛的他汀類降脂藥相比，金櫻子原料天然健康，價廉易得，使其在價格、不良反應(yīng)或副作用等方面更具優(yōu)勢.研究組將圍繞金櫻子降脂藥物劑型設(shè)計、降脂功效提升及降脂機(jī)制等方面開展更深入的研究，相關(guān)研究有望為金櫻子天然降血脂產(chǎn)品開發(fā)提供一定借鑒.