葡萄酒中甜蜜素含量的分析研究

李 燕，顧志斌，鞠忠杰

（煙臺市食品藥品檢驗檢測中心，山東煙臺264003）

近年來，在國家對食品安全嚴格把控，消費者對產品質量的關注日益增加的大背景下，我國的葡萄酒質量也得到顯著提升，在國家公布的抽查結果中葡萄酒的質量合格率很高。但是，我國標準體系、方法更新速度快，也給葡萄酒生產帶來了不小的挑戰，使得企業不得不更多的關注葡萄酒的生產控制和質量把關。

GB5009.97—2016《食品安全國家標準食品中環己基氨基磺酸鈉的測定》于2016年9月20日實施以后，檢測機構對葡萄酒中甜蜜素的測定由原來的氣相色譜法改為液相色譜-串聯質譜法[1]，兩種方法的靈敏度有很大差別，新方法較原方法的檢出限[2]低了300多倍，這意味著原來未檢測出甜蜜素的葡萄酒，在新標準實施后，有可能會檢測出甜蜜素，從而造成產品不合格。為了了解新方法測定市售葡萄酒中甜蜜素的含量情況并對其進行原因分析，本文對現有液相色譜-串聯質譜法進行改進和優化，并采購了30個市售葡萄酒樣品進行測試，對結果進行分析和研究。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：30個干型葡萄酒，購于超市。

甲酸，色譜純；甜蜜素標準品，北京譚墨質檢科技有限公司，純度99.5%；實驗室用水，二級水。

標準溶液配制：用10%空白樣品的水溶液，配制成系列濃度為2μg/L、5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的甜蜜素標準工作曲線。

儀器設備：LC-MS/MS AB5500，美國AB公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理

取葡萄酒5.00 mL于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，定容。0.2 μm濾膜過濾，上機。

1.2.2 LC-MS/MS條件

色譜柱：ZPRBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm，3.5μm)；流動相：甲醇+0.1%甲酸水溶液=30+70。

流速：0.2 mL/min；進樣量：10μL；柱溫：35℃。

2 結果與分析

2.1 條件優化

2.1.1 標準工作曲線配制方式的選擇

由于葡萄酒樣品中含有一定的有機物，容易對目標物造成較大干擾，從而影響檢測結果的準確性。利用與樣品基質相近的陰性樣品水溶液（濃度與測試樣品保持一致）配制標準工作溶液，能夠有效降低基質干擾。利用純水配制的工作曲線測試樣品，回收率為60%～88%；而用陰性樣品水溶液配制的工作曲線測試樣品，回收率為80%～106%。

2.1.2 ICP-MS/MS質譜條件的優化

通過質譜條件的優化，使目標物的響應達到最佳。分析物質量及分析條件見表1。

表1 分析物質量及分析條件

2.2 方法線性及檢出限

利用優化的質譜條件，對標準系列溶液進行分析，做線性回歸并繪制標準曲線，對應的校正曲線見圖1，定性、定量離子色譜圖見圖2，線性相關系數為0.9997，在0～30μg/L范圍內線性良好。

對10%陰性樣品水溶液進行測試，以3倍信噪比所對應的樣品質量濃度為方法檢出限，計算結果為0.02 mg/kg。

圖1 甜蜜素標準曲線圖

圖2 定量、定性離子色譜圖

2.3 精密度和回收率

吸取5.00 mL陰性樣品作為空白樣品于50 mL容量瓶中，同時做3個濃度梯度的加標試驗，即10μg/L、30μg/L、100μg/L。同時做樣品空白及6個平行加標試驗。計算方法的加標回收率及相對標準偏差，結果見表2。

表2 方法的回收率及精密度

2.4 樣品分析

對市售的30個國產干型葡萄酒樣品進行了分析測試。從測試結果看，檢出甜蜜素的樣品有3個，含量分別是0.012 mg/L、0.18 mg/L和0.38 mg/L。其余樣品的測定值均低于方法檢出限。

從檢出的樣品分布看，市售的葡萄酒樣品絕大部分未檢出甜蜜素，但在檢出的樣品中甚至有規模較大的企業生產且市場銷量較高的產品；從含量范圍看，雖然有3個樣品經液相色譜-串聯質譜法檢測為陽性，但其濃度遠低于氣相色譜法的檢出限[3-4]，且并不是人為添加的水平。以上說明這些產品的生產控制仍停留在原來的標準，并沒有因檢測方法的變更而加強對產品質量控制，造成生產過程中的污染或帶入。經調查、了解和分析，產品中污染甜蜜素原因，一方面是生產線和生產工具與配制酒或其他酒混用，將微量甜蜜素帶入葡萄酒中；另一方面，在葡萄種植和采摘過程中，生產工具的混用也可能造成最終產品的污染。

3 結論

本實驗對LC-MS/MS法測定葡萄酒中甜蜜素進行了方法優化，方法檢出限顯著低于現行標準方法，且有效降低了基體干擾，線性范圍在0～100μg/L良好，回收率91%～102%，能夠滿足樣品測定的要求，樣品平行測定RSD小于3%。同時，利用本方法對30個葡萄酒樣品進行的分析測試結果，能夠為企業生產的質量控制，尤其是添加劑的監控提供可靠數據支撐。同時找出可能造成污染的原因，為企業進一步加強生產和質量管理提供參考。