探討血液中乙醇檢測方法

莫乃梅

關(guān)鍵詞：血液；乙醇；化學(xué)法；酶法；氣相色譜法；氣相色譜- 質(zhì)譜法；近紅外光譜法

乙醇（分子式C2H6O）俗稱酒精，是酒的主要成分，乙醇進(jìn)入空胃后，可于30min～90min內(nèi)在胃及腸道內(nèi)被完全吸收入血，15min～90min內(nèi)，血液中酒精濃度值（bloodalcoholconcentration，BAC）可達(dá)到峰值。其代謝主要是在肝臟內(nèi)被氧化分解，少部分以原形經(jīng)呼吸道、尿、汗直接排出體外。急性乙醇中毒多是暴飲、酗酒所致，也有少數(shù)把毒物投入酒中而造成中毒，需檢查酒精。乙醇的毒性主要是能嚴(yán)重地抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，首先是大腦功能，繼而皮層下中樞和小腦活動受累，最后因延腦血管運動中樞和呼吸中樞麻痹而死亡。隨著科學(xué)的發(fā)展，血液中乙醇含量的檢測方法層出不窮，大體上有化學(xué)法、酶法，氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和近紅外光譜法等，現(xiàn)就這些方法在血液中乙醇含量檢測方面作一綜述。

1、化學(xué)法

化學(xué)法分為定性方法和定量方法。定性方法主要是碘仿反應(yīng)法，它的原理是乙醇與碘及氫氧化鉀反應(yīng)，首先生成次碘酸鉀（KIO），然后由乙醇氧化的乙醛再與之作用，生成三碘乙醛，最后與過量的氫氧化鉀反應(yīng)生成黃色的碘仿沉淀。碘仿反應(yīng)法靈敏度為1：1000，但其反應(yīng)并非為乙醇特異反應(yīng)，乙醛、丙酮甲基酮及能被次碘酸鹽氧化為乙醛或甲基酮的醇均能產(chǎn)生同樣反應(yīng)。另外化學(xué)定性的方法還可以通過苯酰氯反應(yīng)和Vitali反應(yīng)來檢測檢樣有沒有乙醇。定量方法主要有威得馬克（Widmark）氏法和重鉻酸鉀法，威得馬克（Widmark）氏法是利用Widmark乙醇定量瓶，將血液加熱60℃使乙醇揮發(fā)，揮發(fā)出來的乙醇被重鉻酸鉀-硫酸混合液吸收，并使乙醇氧化成乙酸，用硫代硫酸鈉滴定由于剩余重鉻酸鉀將碘化鉀氧化所游離出來的碘，從而計算出乙醇含量。重鉻酸鉀法的原理是醇和重鉻酸鉀作用，使黃紅色的六價鉻變?yōu)榫G色的三價鉻，與標(biāo)準(zhǔn)比色定量。這兩個化學(xué)定量方法易受甲醛、甲醇等其它還原性物質(zhì)的干擾。左保林對人血中乙醇含量的分光光度法檢測中提到血液經(jīng)三氯乙酸沉淀蛋白、離心后取1ml加重鉻酸鉀-硫酸試劑，再經(jīng)100℃水浴10min后冷卻至室溫，在595nm處測吸光度值，其方法人血中乙醇含量在0μl/100ml～600μl/100ml時有良好線性關(guān)系，在檢案中要對血中乙醇進(jìn)行定性結(jié)果才可靠，所配的重鉻酸鉀濃度太低會使高含量乙醇血反應(yīng)不完全而至結(jié)果偏低。化學(xué)方法不需要特別精密和昂貴的儀器，成本低，在一般的實驗室也可以完成檢測，容易普及，但是方法靈敏度低，易受干擾，準(zhǔn)確度低，已逐漸被淘汰了。

2、酶法

酶法的原理是血液樣本中的乙醇分別被乙醇脫氫酶（ADH）和乙醛脫氫酶（ALDH）催化，同時產(chǎn)生還原型輔酶（NADH），通過測定NADH在340nm處的吸光度值，定量測算乙醇含量。本方法的檢體一般要用全血，如用血清或血漿，測定結(jié)果要偏高10%，酶法易受酶的保存和反應(yīng)溫度等實驗條件的影響，某些藥物、人體內(nèi)的乳酸和乳酸脫氫酶、相關(guān)的醇類化合物（例如異丙醇等）也會對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。胡云良等通過改良乙醇脫氫酶法測定血清中微量乙醇，方法：選擇Tris-HCl緩沖液作為乙醇脫氫酶法測定乙醇的反應(yīng)條件，通過優(yōu)化反應(yīng)體系及自動生化分析儀分析參數(shù)，采用兩點終點法對乙醇進(jìn)行檢測，線性范圍可達(dá)1200mg/L，批內(nèi)變異系數(shù)（CV）小于2.8%，批間變異系數(shù)（CV）小于3.9%，平均回收率為99.8%。膽紅素159.1mol/L、甘油三酯7.4mmol/L、血紅蛋白11.6g/L、乙醛0.3g/L、異丙醇0.2g/L、甲醇0.7g/L、甲醛0.6g/L以下對此法測定乙醇結(jié)果無明顯干擾，此法測定血清中乙醇無需除蛋白，具有快速、簡便、靈敏、特異等優(yōu)點，適合于自動生化分析儀檢測。

3、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀是利用氣相色譜對混合物的高效分離能力和質(zhì)譜對經(jīng)純化的物質(zhì)的準(zhǔn)確鑒定能力而開發(fā)的分析儀器。GC/MS法的原理是經(jīng)氣相色譜分離出來的組分在質(zhì)譜儀的離子源中發(fā)生電離，生成不同荷質(zhì)比的帶正電荷的離子，經(jīng)加速電場的作用，形成離子束，進(jìn)入質(zhì)量分析器，通過測量離子荷質(zhì)比（電荷-質(zhì)量比）來確定物質(zhì)的含量周枝鳳用自動頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測血液中乙醇含量，使用乙醇的特征離子（m/z）有：45，46，31，29，所用方法的線性范圍為0.01g/L～10.00g/L，檢出限（3S/N）為0.6mg/L，測定下限（10S/N）為1.0mg/L乙醇的回收率在92%～105%之間，測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）小于7%氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用法結(jié)合了色譜定量和質(zhì)譜定性的強大功能，快速、簡單、靈敏、特異性強，已廣泛用于分析揮發(fā)性有機物，但是方法的檢出限比不上頂空氣相色譜法，而且氣相色譜-質(zhì)譜儀比較昂貴，維護保養(yǎng)麻煩，不能普及使用。

4、小結(jié)

綜上所述，在血液中乙醇含量檢測的方法中，不同發(fā)展階段和不同實驗室發(fā)揮了不同的作用。為今后的鑒定工作提供方法和數(shù)據(jù)，及參考價值。

參考文獻(xiàn)：

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