獸用疫苗生產過程中正確檢測和預防支原體污染的方法

蔣艷茹 王金平

摘要：獸用生物制品的實際生產中對于細胞進行培養的過程中，如果有被支原體污染，則會對制品的質量和安全性帶來較大的負面影響，同時對經濟方面造成比較嚴重的損失。所以，在實際生產過程中應該掌握相應的支原體污染檢測的方法。該文對其相關的衍生技術及預防控制展開綜述，目的是為獸用生物制品工作中檢測和預防支原體的污染提供理論依據。

關鍵詞：獸用疫苗；生產；支原體；檢測

中圖分類號：S8 51.4

文獻標識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）07-0127-01

1 支原體的特點

支原體屬于原核微生物，不具有細胞壁，呈高度多形性，個體微小，能通過濾菌器，其毒株主要通過特殊的結構黏附于宿主細胞膜上，并與相應的受體結合，引起宿主細胞膜結構的改變及誘導宿主細胞產生某些細胞因子，從而導致宿主細胞的免疫反應異常，最終可以引起各種疾病的發生。根據相關的試驗結果可知：國內采用的普通疫苗和細胞生產活毒疫苗如果被支原體污染嚴重，這樣會給生物制藥企業帶來非常大的經濟壓力，同時也不利于畜禽疾病防控丁作的順利開展。所以就要求相關的技術人員掌握支原體的檢測技術，以保證生物制品生產工作順利開展。

2 支原體的檢測

2.1 傳統檢測法

直接培養法：直接培養法是支原體檢測的標準方法，具體主要是將待檢樣品接種到支原體培養基上，對液體培養基的顏色和固體培養基上支原體菌落的變化進行觀察，然后通過正確的判斷給出試驗結果。這種方法的準確率比較高，但是培養的時間卻比較長，同一個培養基中所有的支原體類型并不能全部的檢測出來，所以這種檢測方法一般應用于種毒和成品的檢測方面。

DNA熒光染色法：此種方法也被稱為指示細胞法，該檢測方法的耗時比較短，且能夠同時對多個樣品進行檢測，并且對于采用直接培養法不能檢測出的支原體給予正確的檢測。如果有條件在配制疫苗之前就進行初步的檢測，將其中不合格的樣品去除掉，這樣能夠避免相應的損失，并且疫苗的質量可以有效的保證。

2.2 血清學法

被動顆粒凝集試驗（PPA）：可應用于細菌、支原體的鑒定和抗體的定性檢測。我國相關的專家用此方式對肺炎支原體進行檢測，結果可知被動凝集法的操作比較簡單，卻具有比較高的精確性和敏感度，在實際的臨床生產中可以更有效的應用。

酶聯免疫吸附試驗（ ELISA）：用此種方法是診斷人和動物肺炎支原體實用和可靠的方法之一。本檢測方法操作簡單且特異性和敏感性較佳，目前已經被廣泛應用于臨床獸醫學領域，并且成為檢測肺炎支原體臨床中的常規方法。

2.3 分子生物學技術

PCR檢測技術：支原體通常生長都比較緩慢，對于營養要求比較高，在種間存在交叉抗原等生物學特性。隨著相關領域研究人員逐漸深入對支原體的核酸結構、分子組成及其特異性的了解，國際上已經在支原體的檢測中融入了PCR技術，在特異性和靈敏性方面有更佳的表現，并且在獸用生物制品的生產中進行了廣泛的推廣和應用。但是，此種方法對于試驗環境和儀器的要求標準相對比較高。

巢式PCR檢測法：基于PCR檢測方法加以優化改進，主要是通過設計巢式PCR引物的方式，根據擴增后是否存在目的片段的情況對具體的污染狀況加以比較合理且正確的判斷，然后還要根據存在片段的大小情況，對于污染的支原體類型進行正確的判斷分析，從而將污染源進行準確的判斷。

實時熒光定量PCR技術：最初是在1996年的美國某家公司第一次推出了實時熒光定量PCR檢測技術。現在，在動物營養與繁殖、動物遺傳育種及動物疾病檢測和預防等領域已經都有了實時熒光定量PCR技術的應用，但是在實際的應用中沒有達到特別廣泛的范圍，從而受到了一定的限制，應用時應該給予一定的重視。

DNA分子雜交檢查法：原核生物的rRNA是高度保守的。采用這種檢測方法具有特異性高的特點，可大致的鑒別出污染支原體的種類。

3 相關的防治

在生物制品的生產過程中，感染支原體的組織細胞中會在不同程度上改變細胞形態和遺傳物質，從而對病毒的復制過程產生一定的影響，同時會在不同程度上改變宿主細胞的免疫能力，從而誘導干擾素的產生。所以在獸用疫苗生產過程中，尤其是將培養細胞作為材料的疫苗生產情況，應該對于支原體的防治加以重視，決不能忽視。對于支原體的污染進行糾正的時候應該保持細胞營養液呈酸性，這樣對于抑制支原體的生長是比較有效的條件。目前，我國獸用疫苗的技術人員在參與生產生物制品的過程當中，檢測支原體的存在，以及鑒定支原體的種類是實施的主要目的，也就是生產中檢測細胞的污染源，力爭將污染源切斷，從而可以對此采取比較有效的防治手段進行干涉。