梔子豉湯配伍規律研究

李函陽，曹文正，高紅梅

（長春中醫藥大學，長春 130117）

梔子豉湯出自漢代張仲景之《傷寒論》，本方用于太陽表證、陽明熱證診治不當導致的懊惱煩悶之證。梔子豉湯方中的梔子，性味苦寒，體輕上浮，既可清宣胸膈郁熱，又可導火熱下行；淡豆豉氣味輕薄，既能解表宣熱，又可和降胃氣。二藥配伍，清中有宣，宣中有降，為清宣胸膈郁熱，以治虛煩懊儂之良方?，F代藥理研究表明，梔子豉湯具有顯著的抗抑郁作用[1-2]。梔子豉湯中化學成分有環烯醚萜類、單萜類、有機酸類、黃酮類、三萜皂苷類等，其中環烯醚萜類中梔子苷具有抗抑郁活性[3-5]。本實驗研究進一步確定不同配伍比例的梔子豉湯中梔子苷、總環烯醚萜苷的含量變化規律，為其研制開發抗抑郁中藥提供基礎。

1 儀器、試劑與材料

島津LC-2030高效液相色譜儀，紫外檢測器；UV-1780紫外分光光度計；TDL-80-2B低速離心機；FA1204B分析天平；KQ-250B超聲波清洗器。乙腈、甲醇均為色譜純；其余試劑均為分析純；水為娃哈哈純凈水。

梔子購于酒泉市培豐中藥材生態種植加工有限公司（批號：170101）。淡豆豉購于酒泉市培豐中藥材生態種植加工有限公司（批號：161001）。梔子苷對照品購于中國食品藥品檢定研究院（批號：110749-201718）。

2 方法與結果

2.1 不同配比梔子豉湯中梔子苷含量測定

2.1.1 分析條件

2.1.1.1 色譜條件 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈：水（10：90）；流速為1.0 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測波長為237 nm。

2.1.1.2 檢測波長的確定 取梔子苷對照品溶液，在200～400 nm進行光譜掃描，隨行空白對照。梔子苷對照品溶液在237 nm處有最大吸收，因此選237 nm作為檢測波長。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱定梔子苷對照品20 mg，置于20 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，甲醇定容。精密吸取300 μL于10 mL容量瓶中，25、50、150、250、400、500 μL于5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成30 μg/mL梔子苷對照品溶液及5、10、30、50、80、100 μg/mL系列濃度的梔子苷對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

2.1.3.1 不同配比梔子豉湯供試品溶液的制備 分別取梔子 ： 淡豆豉（1：1，1：2，1：4，2：1，10：1）30 g[6-7]，先煮梔子（剪碎），加400 mL水，煎至水剩余約250 mL時，加淡豆豉（包煎），待水剩余約150 mL時，絹布過濾，合并濾液，蒸餾水定容到150 mL，在2 000 r/min條件下離心10 min，得到上清液。取上清液稀釋100倍，用0.22 μm的微孔濾膜過濾，得到不同配比梔子豉湯供試品溶液[8-11]。

2.1.3.2 梔子藥材供試品溶液的制備 精密稱定梔子粉末（過四號篩）0.103 5 g，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，用0.22 μm的微孔濾膜過濾得到梔子藥材供試品溶液。

2.1.4 線性關系考察 精密吸取2.1.2項下系列梔子苷對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，在237 nm處進行檢測，以濃度（X）為橫坐標，以峰面積（Y）為縱坐標，繪制梔子苷標準曲線，求出線性回歸方程為Y =14 001 X - 1 847.4，r2= 0.999 9，梔子苷在0.05～1 μg/mL

內呈良好的線性關系。

2.1.5 精密度考察 取同一梔子苷對照品溶液及梔子豉湯（1：4）供試品溶液，按上述梔子苷含量測定方法連續測試6次，RSD值分別為：0.29%和0.35%，結果表明測定方法精密度良好。

2.1.6 重復性考察 取梔子：淡豆豉（1：4）按2.1.3.1項下方法制備供試品溶液6份，按上述方法測定，測得梔子苷的平均含量為40.93 μg/mg，RSD為1.44%，結果表明測定方法重復性良好。

2.1.7 穩定性考察 取同一份梔子豉湯（1：4）供試品溶液，分別在放置不同時間后按上述方法測定，RSD為0.64%，結果表明，供試品溶液在 6 h內穩定性良好。

2.1.8 加樣回收率 采用加樣回收實驗，以梔子：淡豆豉（1：4）煎煮液為樣品，加入對照品，按2.1.3項下方法制備梔子豉湯供試品溶液，按上述方法進行測定，按下列公式計算加樣回收率。

加樣回收率（%）=（C-A）/B×100%。其中：A為供試品中被測成分含量, B為對照品加入量，C實際測出供試品中成分含量。平均回收率為98.20%，RSD為1.92%，結果表明，本方法測定梔子苷的回收率良好。

2.1.9 供試品中梔子苷含量測定 取2.1.3項下供試品溶液，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀進行測定，得到峰面積值代入2.1.4項下的線性回歸方程，求出不同配比梔子豉湯中梔子苷含量[12-14]。見表1。

表1 供試品中梔子苷含量測定

2.2 不同配比梔子豉湯中總環烯醚萜苷含量測定

2.2.1 供試品溶液的制備 取2.1.3.1項下的上清液，稀釋500倍，得到不同配比梔子豉湯供試品溶液。另取2.1.3.2項下溶液稀釋30倍，得到梔子藥材供試品溶液。

2.2.2 梔子苷對照品溶液的制備 按2.1.2項下方法，制成6、7、8、9、10、11 μg/mL系列濃度的梔子苷對照品溶液。

2.2.3 檢測波長確定 分別取梔子苷對照品溶液、供試品溶液，在紫外分光光度計200～400 nm掃描，隨行空白對照。梔子苷對照品溶液和供試品溶液均在237 nm處有最大吸收，因此選237 nm作為檢測波長。

2.2.4 線性關系考察 取2.2.2項下系列梔子苷對照品溶液，在237 nm處測吸光度，以濃度（C）為橫坐標，以吸光度（A）為縱坐標，繪制梔子苷標準曲線，求出線性回歸方程為A = 0.051 1 C - 0.191 1，r2= 0.999 8，梔子苷在6～11 μg/mL內呈良好的線性關系。

2.2.5 精密度考察 取同一梔子苷對照品溶液及梔子豉湯（1：4）供試品溶液連續測定吸光度6次，RSD值分別為：0.07% 和 0.05%，結果表明測定方法精密度良好。

2.2.6 重復性考察 取梔子：淡豆豉（1：4）按2.2.1項下方法制備供試品溶液6份，以水為空白，237 nm下測供試品吸光度，代入標準曲線，計算總環烯醚萜苷平均含量115.11 μg/mg，RSD為0.74%，結果表明測定方法重復性良好。

2.2.7 穩定性考察 取同一份梔子豉湯（1:4）供試品溶液，分別在放置不同時間后測定吸光度，RSD為1.60%，結果表明， 供試品溶液在 6 h內穩定性良好。

2.2.8 加樣回收率 采用加樣回收實驗，以梔子：淡豆豉（1:4）煎煮液為樣品，加入對照品，按上述方法進行測定，按2.1.8項下方法與公式計算加樣回收率。平均回收率為96.76%，RSD為1.35%，結果表明本方法測定梔子苷的回收率良好。

2.2.9 供試品中總環烯醚萜苷含量測定 取2.2.1項下供試品溶液，在237 nm處測得吸光度，代入2.2.4項下的線性回歸方程，求出不同配比梔子豉湯中總環烯醚萜苷含量[15-18]，見表2。

表2 供試品中總環烯醚萜苷含量測定

3 討論

3.1 提取方法、劑量的選擇 本實驗選擇了煎煮法為不同配伍比梔子豉湯的提取方法。《傷寒論》中梔子豉湯處方原文為“梔子十四個（擘），香豉四合（綿裹），上二味以水四升，先煮梔子得二升半，內豉，煮取一升半，去滓”，查閱歷代中藥度量衡演變考論及仲景方用藥劑量的考察文獻[19-23]，梔子豉湯中“梔子十四個”約12 g，“香豉四合”（80 mL）約48.27 g，“升”換算為現今的計量單位為200 mL，推算得梔子豉湯中梔子與淡豆豉的比例為1：4，并確定了本實驗中藥、水的劑量。

3.2 梔子豉湯比例的選擇 從實驗結果看，梔子：淡豆豉（1：1、1：2、1：4、2：1、10：1）的梔子豉湯中，梔子豉湯（1：4）梔子苷、總環烯醚萜苷的轉移率在5種配伍比例中最高，可以說明張仲景之《傷寒論》立方嚴謹，用藥精當，配伍巧妙，療效顯著；并且進一步的確定了《傷寒論》中梔子豉湯配伍比例的科學性與可信度，為后續梔子豉湯治療抑郁癥等臨床研究中配伍比例選擇提供重要依據。此外，從結果中觀察到，在梔子比例一定時，隨著淡豆豉的比例增加，梔子苷、總環烯醚萜苷的轉移率也隨之增加。為了進一步確定梔子與淡豆豉的配比規律，加測了梔子：淡豆豉（1：6、1：10）的梔子豉湯中梔子苷、總環烯醚萜苷的含量。結果，梔子苷的含量為 29.27 μg/mg、30.44 μg/mg，轉移率為：63.82%、66.38%；總環烯醚萜的含量為72.94 μg/mg、102.14 μg/mg，轉移率為 27.68%、38.62%。得出結論，在梔子用量一定時，隨著淡豆豉的用量增加，梔子苷、總環烯醚萜苷的轉移率先增大后減小，其中梔子豉湯（1：4）時最高。