缺血性腦卒中患者外周血中血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的變化

劉茂林

（安陽(yáng)市第三人民醫(yī)院，河南 安陽(yáng) 455000）

缺血性腦卒中是臨床上的常見(jiàn)的神經(jīng)內(nèi)科疾病之一，70%以上的缺血性腦卒是由各種原因引起的腦血管栓塞造成的，其中以動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成較為常見(jiàn)[1]。缺血性腦卒中可以引起栓塞部位末梢的腦血管內(nèi)皮因缺氧發(fā)生壞死和脫落，近年來(lái)的研究顯示存在于體循環(huán)中的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）可以分化為內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)受損傷的腦血管內(nèi)皮[2-4]。本研究通過(guò)對(duì)缺血性腦卒中患者在發(fā)病后不同時(shí)間的EPCs占有核細(xì)胞的比例，觀察在EPCs在體內(nèi)的變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 患者的一般資料：采集2016年7月至2017年4月在我院神經(jīng)內(nèi)科住院的患者血液標(biāo)本78例，其中男性40例，女性38例，平均年齡（66.4±4.5）歲，患者發(fā)病至入院時(shí)間間隔均在24 h以內(nèi)，經(jīng)過(guò)頭顱CT或MRI檢測(cè)均顯示為缺血性腦卒中病例。對(duì)照組25例來(lái)自我院門診進(jìn)行健康體檢人群，其中男性15例，女性10例，平均年齡（66.9±4.1）歲。經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和患者本人同意的情況下取得血液標(biāo)本

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器：Percoll分離液購(gòu)買于美國(guó)GE公司； CD34-PE和VEGRF-2-APC購(gòu)買于美國(guó)BD公司；倒置相差顯微鏡購(gòu)買于日本Olympus公司； 離心機(jī)購(gòu)買于湘儀公司；FACSCalibur 流式細(xì)胞儀購(gòu)買于美國(guó)BD公司；550酶標(biāo)儀購(gòu)買于美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法：腦卒中患者末梢血中EPCs鑒定及在核細(xì)胞的比例：在無(wú)菌條件下，通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出CD34-PE和VEGRF-2-AP陽(yáng)性的細(xì)胞，使用Cell Quest軟件進(jìn)行流式細(xì)胞分析，計(jì)算CD34和VEGRF-2均為陽(yáng)性的細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS16.5統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，組間的比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 EPCs結(jié)果

經(jīng)過(guò)流式抗體CD34-PE和VEGRF-2-APC染色后，結(jié)果顯示在缺血性腦卒中組中患者末梢血中第1、7、14和21天的CD34-PE和VEGRF-2-APC陽(yáng)性細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例分別為（0.29±0.06）、（0.93±0.013）、（1.21±0.25）和（0.65±0.06），與健康對(duì)照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 CD34-PE和VEGRF-2-APC均為染色陽(yáng)性的細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例（%，

表1 CD34-PE和VEGRF-2-APC均為染色陽(yáng)性的細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例（%，

注：*與對(duì)照組相比有顯著性差異，P＜0.05

組別 時(shí)間1 d 7 d 14 d 21 d腦卒中組 0.29±0.06* 0.93±0.013* 1.21±0.25* 0.65±0.06健康對(duì)照組 0.61±0.09 0.62±0.04 0.59±0.07 0.61±0.06

3 討 論

EPCs是一種具備分化潛能的前體細(xì)胞，在一定條件下可以分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞。在生理狀態(tài)下，EPCs存在于末梢血循環(huán)中的量很少，其主要參與維持更新或修補(bǔ)受損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞，這樣機(jī)體內(nèi)的血管生成可以維持在一定動(dòng)態(tài)平衡中[5]。有些研究顯示缺血性腦卒中患者體內(nèi)的EPCs數(shù)量與健康人相比明顯減少，并且將EPCs數(shù)量下降作為評(píng)價(jià)心血管風(fēng)險(xiǎn)因素的血液標(biāo)志物之一；而有些報(bào)道則顯示EPCs在缺血性腦卒中患者體內(nèi)的數(shù)量明顯高于健康人群，并認(rèn)為EPCs數(shù)量與缺血性腦卒中患者的預(yù)后相關(guān)[6]。為了能夠明確EPCs在缺血性腦卒中患者體內(nèi)的變化規(guī)律，本研究在此基礎(chǔ)上通過(guò)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD34和VEGRF-2計(jì)算在不同時(shí)間段對(duì)缺血性腦卒中患者體內(nèi)EPCs的相對(duì)數(shù)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在缺血性腦卒中患者發(fā)病的第1天內(nèi)，EPCs在體內(nèi)的有核細(xì)胞的比例分別為（0.29±0.06）%，明顯低于健康對(duì)照組的（0.61±0.09）%，這可能是由于在缺血性腦卒中發(fā)作初期，體內(nèi)的EPCs過(guò)度消耗有關(guān)，隨著缺血性腦卒中發(fā)作的康復(fù)時(shí)間延長(zhǎng)，EPCs在體內(nèi)的有核細(xì)胞的比例逐漸增高，直至發(fā)病后的第21天基本恢復(fù)正常。而上述觀察報(bào)道EPCs升高或者降低可能是由于選擇的時(shí)間采樣的時(shí)間點(diǎn)不同以及治療后病情轉(zhuǎn)歸不同而造成的。由于EPCs的數(shù)量變化可反映缺血性腦卒中患者病情的變化，因此可以把EPCs數(shù)量作為衡量缺血性腦卒中病情的指標(biāo)之一。