吡蟲啉對5種植物寄生線蟲的室內毒力測定

夏彥飛，李 身，楊晨光，付黎明，錢 鑫

（河南科技大學 林學院，河南洛陽 471023）

線蟲是地球上數量巨大的多細胞生物，其中危害農林業生產的這部分稱為植物寄生線蟲。植物寄生線蟲約占線蟲總數的10%。其分布廣，寄主多，危害重，全球每年因植物線蟲造成的損失超過1 000億美元[1]。化學藥劑具有防效高，見效快的優點，在植物寄生線蟲的防治中起著重要的作用。吡蟲啉是新煙堿類殺蟲劑，具有硝基亞甲基結構。其具有內吸性，且廣譜、低毒、低殘留，對人畜安全，廣泛用于防治刺吸式口器害蟲[2-5]。但采用吡蟲啉防治植物寄生線蟲的報道較少。本實驗選用目前洛陽市場上銷售的吡蟲啉藥劑，在室內離體條件下，采用浸漬法對花生根結線蟲、程氏滑刃線蟲、松材線蟲、貝西滑刃線蟲、腐爛莖線蟲分別進行毒力測定，同時也對花生根結線蟲的卵孵化抑制率進行了測定，以期為植物線蟲的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

10%吡蟲啉可濕性粉劑（東莞市瑞德豐生物科技有限公司），購于洛陽市關林農藥化工市場。本研究中毒力測定所用吡蟲啉藥劑的質量濃度為25、50、55.56、71.43、100 g/L，卵孵化抑制率測定所用質量濃度為0.1、1、10、50、100 g/L。

1.2 線蟲的培養與收集

花生根結線蟲（Meloidogyne arenaria）2齡幼蟲（J2）、程氏滑刃線蟲（Bursaphelenchus arthuri）、貝西滑刃線蟲（Aphelenchoides besseyi）、松材線蟲（B.xylophilus）、腐爛莖線蟲（Ditylenchus destructor），均保存在河南科技大學林學院實驗室中。花生根結線蟲卵塊接種于感病番茄植株上，置于25℃溫室培養45～50 d，然后收集卵塊。收集的卵塊用3%H2O2水溶液進行表面消毒8 min，再用2次蒸餾水清洗3次后才能使用。程氏滑刃線蟲、貝西滑刃線蟲、松材線蟲接種在長滿灰葡萄孢（Botrytis cinerea）菌絲體的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）上，25℃恒溫培養箱中培養8～10 d，至菌絲體完全消失后，放入4℃冰箱待用。腐爛莖線蟲接種到表面用乙醇（75%）消毒的健康薯塊上，蠟封，25℃恒溫培養箱中培養30 d左右，轉移到4℃冰箱待用。采用貝曼漏斗分離法收集所用線蟲，收集的線蟲先用3%H2O2水溶液進行表面消毒5 min后，再用2次蒸餾水清洗3次，此時線蟲為實驗所用線蟲。

1.3 藥劑對線蟲的毒力測定

采用Giannakou等[6]報道的浸漬法測定藥劑對線蟲的影響，并略加改進。具體操作：吸取2 mL待測藥液，放入直徑6 cm的表面皿中，每皿中分別挑入50條表面消毒的花生根結線蟲J2及其他4種線蟲的成蟲，置于25℃恒溫培養箱中分別處理12、24、36、48 h，于解剖鏡下利用針刺觸碰法判斷線蟲的死活情況，計算死亡率。每一質量濃度的藥劑處理重復3次，2次蒸餾水處理為對照。獨立實驗重復3次。

1.4 花生根結線蟲卵孵化抑制率測定

將表面消毒后的卵塊放入滅菌的2 mL離心管中，粘棒輕輕擠壓卵塊，使用500目分樣篩收集卵，再用3%H2O2水溶液表面消毒5 min，2次蒸餾水清洗3次，最后用2次蒸餾水配制卵懸浮液（1 000個/mL）。卵孵化抑制實驗處理裝置參考陳立杰等[7]的研究方法。卵在藥劑中浸泡7 d后，收集線蟲，顯微鏡下計數，然后用2次蒸餾水清洗卵至少3次，放入對應編號的含有2 mL 2次蒸餾水的新表面皿中繼續孵化，7 d后再次收集線蟲，計數。2次孵化線蟲總數即為藥劑處理孵化線蟲數。每一質量濃度的藥劑處理重復3次，清水處理為對照。獨立實驗重復3次。

1.5 數據處理

實驗數據用SPSS統計軟件進行分析，計算藥劑的毒力回歸方程y=ax＋b（y為線蟲死亡率，x為藥劑質量濃度的常用對數）、半致死質量濃度LC50值及相關系數。

2 結果與分析

2.1 吡蟲啉藥劑對5種植物寄生線蟲的影響

吡蟲啉對5種植物寄生線蟲的毒力不同。花生根結線蟲對吡蟲啉最為敏感，線蟲死亡率隨處理時間的延長和藥劑質量濃度的升高而升高，5個濃度梯度吡蟲啉處理后12 h，花生根結線蟲出現不同程度的死亡；處理后48 h，最高質量濃度（100 g/L）處理的線蟲死亡率達91.00%，其對應的LC50值為50.49 g/L，結果見圖1、表1。藥后12 h，吡蟲啉25 g/L和50 g/L處理對程氏滑刃線蟲、貝西滑刃線蟲和松材線蟲存活率無影響，無線蟲死亡；藥后48 h，100 g/L處理對應的線蟲死亡率分別為65.70%、45.70%、44.00%（見圖2～圖4），其相應的LC50值分別為79.43、128.82、154.88 g/L。吡蟲啉對腐爛莖線蟲毒力最弱，藥后48 h，高質量濃度（100 g/L）處理的線蟲死亡率僅為9.67%，其余濃度處理均無線蟲死亡。

圖1 藥劑對花生根結線蟲的活性

圖2 藥劑對程氏滑刃線蟲的活性

圖3 藥劑對貝西滑刃線蟲的活性

圖4 藥劑對松材線蟲的活性

表1 100 g/L吡蟲啉處理對4種植物寄生線蟲的毒力（48 h）

2.2 對花生根結線蟲卵孵化的影響

吡蟲啉對花生根結線蟲卵孵化的影響如表2所示。對花生根結線蟲的卵孵化抑制率隨著藥劑質量濃度的降低而降低。質量濃度為100 g/L處理對花生根結線蟲的卵孵化抑制率為93.78%，而質量濃度為0.1 g/L處理的卵孵化抑制率僅為2.79%。

表2 不同質量濃度的吡蟲啉藥劑處理對花生根結線蟲卵孵化抑制率的影響

3 結論與討論

植物寄生線蟲是世界性的植物病原生物，其大部分生活在土壤中或寄主內，給防治帶來了很大困難。吡蟲啉為新煙堿類殺蟲劑，具有觸殺、胃毒、廣譜、高效等特性，在農業生產中得到了廣泛的應用，但用于植物寄生線蟲的研究較少。龍鼎新等[8]、來燕學等[9]分別測試了吡蟲啉對松材線蟲的毒力。結果表明，吡蟲啉對松材線蟲具有一定的防效。該研究結果與本實驗結果相吻合。從本研究結果可以看出：吡蟲啉對不同的線蟲表現出不同的毒力，防效最好的是花生根結線蟲，最差的是腐爛莖線蟲。同樣條件下，質量濃度100 g/L處理藥后48 h，花生根結線蟲的死亡率達到91.00%，而腐爛莖線蟲的死亡率僅為9.67%。原因可能是，不同屬的線蟲在自然進化過程中抗逆能力存在差異。藥后48 h，質量濃度為100 g/L的吡蟲啉藥劑處理對花生根結線蟲、程氏滑刃線蟲、貝西滑刃線蟲、松材線蟲的LC50值分別為50.49 g/L、79.43 g/L、128.82 g/L、154.88 g/L；由于腐爛莖線蟲僅在藥后48 h才出現死亡情況，因此未計算其LC50值。本研究所用的吡蟲啉是商品化藥劑，計算出的LC50值比較高，這與所用藥劑有效成分含量較低有關。吡蟲啉對花生根結線蟲2齡幼蟲有較好的活性。此外，其還能抑制花生根結線蟲卵的孵化，孵化抑制率隨著藥劑濃度的升高而升高，質量濃度為100 g/L的處理對花生根結線蟲的卵孵化抑制率高達93.78%，顯示了較強的抑制效果。本研究為吡蟲啉防治植物寄生線蟲提供了理論依據，生產應用效果還需進一步進行驗證。