豫南楊樹黑斑病病原菌鑒定、影響發病因子調查及田間防治試驗方案

李娟

摘要：介紹了駐馬店市楊樹黑斑病的危害現狀，提出病原菌鑒定、影響發病因子調查及田間防治試驗以期控制該病的發生，為楊樹黑斑病的防治提供參考。

關鍵詞：楊樹黑斑?。话l病規律；分離鑒定；田間防治

一、駐馬店概況

駐馬店市位于河南省中南部，北亞熱帶向暖溫帶過渡區，屬亞熱帶季風性氣候類型，四季分明，夏熱冬冷，雨熱同季，光、熱、降水資源豐富，年均氣溫15℃左右，年均降水800-1000mm，年均日照數2000-2200h，無霜期217-230d，氣候溫和，雨量充沛，光照充足，植物種類繁多，生物資源豐富。

近年來，駐馬店市楊樹純林面積迅速擴大，隨著中齡林的不斷增加，楊樹有害生物加大危害，尤其是楊樹黑斑病肆意蔓延，造成巨大經濟損失。楊樹黑斑病又稱楊樹褐斑病，是楊樹上危害最嚴重的病害之一，危害多種楊樹，苗木、幼樹、大樹都可受感染。該病可危害葉片、葉柄、幼莖，以危害葉片為主，自下而上蔓延，使病葉提早1-2個月脫落，僅留梢部少許葉片，嚴重影響樹木生長，是影響駐馬店市楊樹生長的最主要病蟲害之一。為此我們針對楊樹黑斑病做出了鑒定和防治方案，以期為楊樹黑斑病的鑒定和防治提供參考。

二、楊樹黑斑病菌的分離和鑒定

（一）樣本的采集和分離

野外采集楊樹黑斑病標樣，記錄發病癥狀、采集時間、地點、樹種、樹齡、胸徑、危害程度，在標本上系上標簽裝進塑料袋，帶回實驗室4℃冰箱保存。室內PDA培養皿培養并純化，將純化后菌株轉入試管置于4 ℃的冰箱中保存，以便于下一步的研究。

（二）菌株的致病性測定

根據柯赫氏法則，以中林46作為接種對象，檢測分離出病原菌的致病性。方法如下：選取直徑約2cm的兩年生枝條，截成30cm段，表面75%酒精消毒處理后晾干，用一端已經燒熱的直徑6mm的打孔器刺入葉片，造成一個燙傷傷口，再用打孔器在已培養好的菌落上切取菌餅，每個孔中放一個菌餅，然后用保鮮膜密封，對照用PDA餅處理。將枝條上端用保鮮膜密封后插入盛有水的燒杯，放入培養箱中25℃培養，每天進行觀察，記錄是否發病和發病特征。

（三）基因組DNA提取和ITS測序

將供試菌株轉接至PDA培養基上培養后，提取基因組DNA，經PCR擴增后進行ITS測序，對測得的楊樹黑斑病菌株ITS序列進行拼接整理，并把拼接后序列在GenBank上利用BLAST比對，確定楊樹黑斑病病原菌種類。

三、影響發病因子調查

選取不同楊樹品種、造林密度、立地條件和胸徑調查與楊樹黑斑病的相關性，統計并計算楊樹黑斑病感病指數。（見表1）

（一）病害發生與品種關系調查

選取本地栽植量大的107、中林46、I-69、2025四個楊樹品種，每個品種選取2個小班，每個小班設置2塊標準地，每塊標準地面積為3畝，每塊標準地隨機選取30棵楊樹，7月中旬和8月中旬分別調查、統計并計算每塊標準地的楊樹黑斑病感病指數。

（二）病害發生與林分密度調查

選擇立地條件相同的6m×6m、3m× 4m、2m×3m三種不同栽植密度林地，每個密度選取2個小班，每個小班設置2塊標準地，每塊標準地面積為3畝，每塊標準地隨機選取30棵楊樹，調查、統計并計算每塊標準地的楊樹黑斑病感病指數。

（三）病害發生與立地條件的調查

分別選取片林、路林、溝河渠旁、圍村林，每個選取2個小班，每個小班設置2塊標準地，每塊標準地面積為3畝，每塊標準地隨機選取30棵楊樹，調查、統計并計算每塊標準地的楊樹黑斑病感病指數。

（四）病害發生與林分胸徑關系調查

分別選取胸徑0-10cm、11-20cm、21-30cm、31-40cm、41cm以上林分進行調查，每個小班設置2塊標準地，每塊標準地面積為3畝，每塊標準地隨機選取30棵楊樹，調查、統計并計算每塊標準地的楊樹黑斑病感病指數。

（五）不同防治藥劑田間防治效果試驗

選取易感病的中林46片林進行田間藥效試驗，試驗設6個處理：①清水對照（CK）；②多菌靈；③嘧菌酯；④戊唑醇；⑤氟硅唑；⑥波爾多液；⑦石硫合劑，每個處理3次重復，每個重復10棵樹，在發病初期5月下旬開始噴霧防治，每隔15天噴施1次，連噴5次，每次施藥10天后調查記錄發病情況，計算感病指數和防治效果，并進行方差分析。

四、試驗目的

通過本試驗，首先分離鑒定出本地楊樹黑斑病病原菌，其次通過調查當地常栽楊樹品種對楊樹黑斑病的抗性，篩選出適合本地栽植的楊樹品種，最后通過田間防治試驗，優選出對楊樹黑斑病防治效果較好的藥劑，為駐馬店市楊樹黑斑病防治提供理論依據。

參考文獻：

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