基于氣相色譜法的帕瑞昔布鈉中殘留溶劑測定

聶忠莉， 毛玉萍， 王曉玲， 蕭茂玲， 張 勇， 黃金玉， 郭 瑞

(1.成都大學 藥學與生物工程學院， 四川 成都 610106； 2.成都克萊蒙醫藥科技有限公司， 四川 成都 610041)

0 引 言

帕瑞昔布鈉，是伐地昔布的水溶性前體，其存在形式為鈉鹽，主要用于手術后疼痛的短期治療以及中度或重度術后急性疼痛的治療.帕瑞昔布鈉作為第一代可肌注和靜脈注射使用的選擇性COX-2抑制劑，于2008年在我國上市.臨床試驗表明，其對手術術后的恢復效果較佳，且副反應較小，有利于需要經非胃腸給藥的手術患者的恢復[1-2].

通過對帕瑞昔布鈉的合成工藝以及相關合成文獻[3-4]和專利[5]分析發現，其在合成及精制的過程中使用的有機溶劑包括乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶.根據各溶劑性質和沸點的不同，本研究通過參考帕瑞昔布鈉的相關標準以及《中國藥典》2015年版四部中氣相色譜法操作、殘留溶劑測定法和藥品質量標準分析方法驗證指導原則，建立了帕瑞昔布鈉殘留溶劑的氣相色譜測定方法，并對其進行了方法學驗證.

1 材料與儀器

1.1 材 料

實驗所用材料包括：帕瑞昔布鈉(批號，20171201、20171202、20171203)，購自成都克萊蒙醫藥科技有限公司；N，N-二甲基甲酰胺(批號，141171101，HPLC級)、正己烷(批號，121171202，HPLC級)，購自上海星可高純溶劑有限公司；無水乙醇(批號，2015051401，HPLC級)、二氯甲烷(批號，2017091901，HPLC級)，購自成都科龍化工試劑廠；乙酸乙酯(批號，20150128，HPLC級)、三乙胺(批號，20170925，HPLC級)，購自天津科密歐化學試劑有限公司；4-二甲氨基吡啶(批號，20171113-2629，HPLC級)，購自上海易勢化工有限公司.

1.2 儀 器

實驗所用儀器包括：Agilent 7890A氣相色譜儀(美國Agilent公司)，BP-210D型電子天平(德國Sartorius公司)等.

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 供試品溶液.

取本品約100 mg，精密稱定，置頂空瓶中，加入N,N-二甲基甲酰胺1.0 mL，溶解，搖勻，作為供試品溶液.

2.1.2 對照品溶液.

取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶適量，分別加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋，制成每1 mL約含0.55 mg的乙醇、0.029 mg的正己烷、0.06 mg的二氯甲烷、0.5 mg的乙酸乙酯、0.032 mg的三乙胺、0.5mg的4-二甲氨基吡啶溶液，作為對照品溶液.

2.2 色譜條件的選擇

由于三乙胺具有較強的堿性，且4-二甲氨基吡啶沸點(211 ℃)較高，不宜與其他溶劑一起采用氣相色譜法進行檢測，因此將三乙胺和4-二甲氨基吡啶分別單獨進行質量控制研究. 由預實驗結果可知(見表1)，在色譜條件3下，乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯的分離度更好，故選取色譜條件3來檢測本品中的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯.另外，在不同柱溫下三乙胺的保留時間變化不大，但隨溫度的升高，理論塔板數不斷增加，當柱溫為210 ℃其理論塔板數達到100 000以上，拖尾因子為1.016，且空白無干擾，故選取色譜條件6作為本品三乙胺的檢查條件.雖然色譜條件7和色譜條件8峰型均較好，但后者的出峰時間比前者提前了將近5 min，且空白均無干擾，故選取色譜條件8作為本品4-二甲氨基吡啶的檢查條件.

表1帕瑞昔布鈉殘留溶劑分析方法色譜條件比較

2.3 系統適用性

取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯對照品溶液各0.25 mL，置于頂空瓶中，作為乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶液.在色譜條件3下，分別取對照品乙醇溶液、正己烷溶液、二氯甲烷溶液、乙酸乙酯溶液和混合溶液頂空進樣，另取空白溶劑同法進樣，記錄色譜圖(見圖1、2).結果顯示，乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯依次出峰，且色譜峰之間均能完全分離、空白溶劑對測定無干擾.

圖1乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯系統適用性色譜圖

圖2 N,N-二甲基甲酰胺空白色譜圖

2.4 檢測限

取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶各適量，分別加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋制成一定濃度的溶液，頂空進樣，記錄色譜圖，以信噪比為3時(S/N=3)的濃度作為最低檢測限濃度，以信噪比為10時(S/N=10)的濃度作為定量檢測限濃度，結果見表2.

表2 帕瑞昔布鈉殘留溶劑檢測限、定量限實驗

2.5 線性與范圍

分別精密量取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶適量，加入N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋成適宜的濃度，分別作為線性溶液1、2、3、4、5、6.分別精密量取上述供試品溶液各1 mL，置頂空進樣瓶中，密封，頂空進樣，記錄色譜圖，以各溶劑濃度對峰面積進行線性回歸并計算相關系數.結果表明：在0.00965～6.372 mg/mL范圍內，乙醇(Y=101.27X+2.5014，R2=0.9997)、正己烷(Y=2647.6X+1.896，R2=0.9997)、二氯甲烷(Y=80.325X+0.5648，R2=0.9998)、乙酸乙酯(Y=207.53X+10.242，R2=0.9995)、三乙胺(Y=363.18X+2.4124，R2=0.9994)、4-二甲氨基吡啶(Y=1045.9X-35.25，R2=0.9994)的峰面積與濃度呈良好的線性關系.

2.6 重復性

取帕瑞昔布鈉約1.0 g，分別取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶對照品溶液10 mL使其溶解，搖勻后，分別精密量取1 mL 6份，分別置頂空進樣瓶中，密封，頂空進樣，記錄色譜圖，計算出無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶結果的RSD分別為0.78%、1.97%、1.15%、0.41%、2.27%、1.35%.結果表明，方法的重復性良好.

2.7 穩定性

取帕瑞昔布鈉約1.0 g，分別取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶對照品溶液10 mL使其溶解，搖勻后，分別精密量取1 mL 5份，分別置頂空進樣瓶中，密封，分別在0、2、4、6、8 h頂空進樣，記錄色譜圖，計算樣品中乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶殘留量相對標準偏差(見表3).結果表明，溶液在8 h內穩定性良好.

表3 帕瑞昔布鈉殘留溶劑穩定性實驗(n=6)

2.8 回收率

取帕瑞昔布鈉(批號，20171201)各約0.1 g(共11份)，精密稱定，分別置頂空進樣瓶中，分別精密加入無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶的80%對照品溶液、100%對照品溶液、120%對照品溶液1.0 mL各3份，使樣品溶解，分別作為80%、100%、120%的供試品溶液；剩余2份加入1.0 mL空白溶劑使溶解，作為供試樣品溶液.分別取對照品溶液、供試品溶液、供試樣品溶液頂空進樣，記錄色譜圖，按外標法計算無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶測得量及回收率(見表4).結果表明，殘留溶劑回收率滿足要求.

表4 帕瑞昔布鈉殘留溶劑平均回收率

2.9 耐用性

取帕瑞昔布鈉(批號，20171201)約0.1 g，精密稱定，置量瓶中，分別加入1.0 mL無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶對照品溶液使溶解，搖勻，作為供試樣品溶液.分別取上述對照品溶液、供試品溶液1 μL進樣，微小改變色譜條件，測定，記錄色譜圖，按外標法計算無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶含量(見表5).結果表明，方法的耐用性良好.

表5 帕瑞昔布鈉殘留溶劑耐用性實驗

2.10 無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯檢測

分別取3批帕瑞昔布鈉按“2.1.1"項下方法制得供試品溶液，按“2.1.2"項下方法制得對照品溶液，精密量取供試品溶液與對照品溶液，分別以相應的條件頂空進樣，記錄色譜圖，按外標法計算各溶劑殘留量.結果顯示，批號20171201和20171202中的乙醇含量為0.16%，批號20171203中的乙醇含量為0.18%，其他有關物質在3批試樣中均未檢出.

3 討論與結論

本研究采用氣相色譜法對相關溶劑進行測定.因本品需要檢測的有機溶劑的極性應與色譜柱的極性相似，所以采用中極性的6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷和交聯聚乙二醇為固定相的毛細管柱為色譜柱，用FID檢測器，選擇以N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，采用頂空法進行檢測[6].本品中所使用的有機溶劑多為揮發性的物質，頂空進樣的方式與直接進樣的方式相比，可以減少色譜系統的污染.三乙胺屬于強堿性溶劑，不易與其他溶劑同時進行檢測，但仍采用相同的方法和條件.而4-二甲氨基吡啶較為特殊，其沸點較其他5種溶劑沸點更高，極性較大，所以單獨采用交聯聚乙二醇為固定相的毛細管柱作為色譜柱，采用直接進樣的方式進行檢測[7-8].

在帕瑞昔布合成及精制的過程中用到的溶劑有乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、4-二甲氨基吡啶、三乙胺，三乙胺的堿性很強，4-二甲氨基吡啶的沸點較高，所以在進行方法學驗證的時候需要分開測定，才能對其準確地判斷.乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷的物理化學性質較為相似，因此，可把這4種溶劑放在一起測定.在采用氣相色譜法測定時，首先先確定進樣條件，選擇最佳條件，采用頂空進樣法；三乙胺的堿性很強，所以對三乙胺單獨驗證，條件與前面的條件基本相似，依然采用頂空進樣；4-二甲氨基吡啶的沸點過高，所以采用直接進樣法；最終確保了每一種溶劑的方法都是最合適的.實驗結果顯示，各檢測項目均符合檢測要求，殘留量測定結果均符合藥典中對于殘留溶劑的規定.本方法操作簡便、準確度高、分離效果好、靈敏度高、分析速度快，適合用于帕瑞昔布鈉中殘留溶劑的質量控制，進而確保帕瑞昔布鈉產品的質量.