生化儀兩種時間模式下所測同一項目結果的對比觀察

王成河

（江蘇省宜興市東山東路宜興市腫瘤醫院檢驗科 江蘇 宜興 214200）

日常工作中，發現部分終點法項目在反應到達終點時，儀器的檢測效率尚有提升的空間。通過調整項目時間模式以縮短分析流程時間，力求在保障結果可靠的前提下，更好地發揮儀器的檢測效率。為此，根據美國“用病人樣本進行方法學比較和偏差評估”指南文件EP9-A2方案[1]，選用氧化法測定的TBIL為對象，分別設置兩種不同的時間模式、不同的讀點，平行測定同一組標本，以評價兩法可比性及偏倚，觀察兩種方法是否均能達到終點。

1.材料和方法

1.1 樣品

收集2018年7月21日—2018年7月26日的本院患者血清，包括正常值和異常值標本，標本要求新鮮、無溶血脂血。

1.2 儀器和試劑

日立7180生化儀。TBIL試劑：北京利德曼公司，Lot705121E。TBIL校準液：北京利德曼公司，Lot709041I。質控血清：RANDOX公司，正常值批號：1131UN；異常值批號：746UE。

1.3 實驗方法

1.3.1 現有TBIL測試為基本方法，項目命名TB-1；新增TBIL測試的對比方法，項目命名TB-2。兩法均使用相同試劑、相同校準液，同時校準。

TB-1參數依據試劑說明書設置，其中，讀點16/34，時間模式10min。TB-1分析大致流程：標本與R1孵育5min，第16、17點間加入R2，反應5min，第34點流程結束。TB-2參數設置：讀點設為5/17，時間模式5min，其余參數同TB-1；TB-2分析大致流程：標本與R1孵育1.5min，第5、6點間加入R2，反應3.5min，第17點流程結束。

1.3.2 標本測定 線性范圍內，隨機挑選48份包含高、中、低TBIL濃度樣本，TB-1和TB-2平行進行測定，每天測定8份樣本及2個水平質控品，第3位和第9位插入正常-異常2個水平質控品，按順序1、2、3 …… 10測定一次，再按反序10、9、8 ……1復測一次，觀察質控結果，糾正測試。測定6d，雙份測定均值作為1個結果，共48個結果。記錄每一測試最后兩點吸光度差值及吸光度最大變化量（對于TB-1：差值=A34-A33，對于TB-2：差值=A17-A16。最大變化量=A34-A16）。

1.4 數據處理

1.4.1 離群值檢驗 共分為2種情況，即方法內離群值檢驗和方法間離群值檢驗。

1.4.2 相關性試驗 以TB-1每樣本雙份均值為X軸、TB-2雙份均值為Y軸，用Excel繪制相關性散點圖，計算相關系數R及回歸方程。

1.4.3 相對偏倚分析 以TB-1每樣本雙份均值為X軸、以同一標本的TB-2均值與TB-1均值之差除以TB-1均值所得相對偏倚為Y軸，用Excel作散點圖。

1.4.4 兩組結果的差異性比較、反應完成情況的觀察 采用配對t檢驗，使用SPSS16.0統計學軟件處理。

2.結果

2.1 兩法的相關性比對及相對偏倚分析。

2.1.1 離群值檢驗：所有48個標本結果均未發現離群點，符合EP9-A文件要求，可以進行后續試驗。

2.1.2 相關性散點圖，見圖1。

圖1 TB-1和TB-2雙份均值相關性散點圖

通過計算，相關系數R=0.9968。EP9-A2要求R≥0.975，說明兩方法的測定范圍合適。回歸方程y=0.9465x+5.3132，數據點擬合程度R2=0.9937。

2.1.3 相對偏倚散點圖，見圖2。

圖2 TB-2對TB-1的相對偏倚散點圖

可看出，線性范圍內散點圖分布正常，絕大多數點在-0.05～0.05間波動，最大相對偏倚為6.1%。

2.2 兩組結果間的差異性比較、每一測試反應完成情況的對比觀察

以TB-1組48個結果為參照，TB-2組48個結果與之比較，經配對t檢驗，組間無顯著性差異（P＞0.05）。兩組所有測試最后兩點吸光度差值均在±5以內；兩組反應剩余比率（即最后兩點吸光度差值占最大吸光度變化量的百分比）均在-0.1058%～0.1011%之間波動。

3.結論

兩組所有反應均已達到終點，經配對t檢驗，兩組結果無統計學差異。因此，兩法所測結果同樣可靠，但對比方法耗時更少，檢測效率更高。

4.討論

本研究對本實驗室TBIL的基本方法與對比方法進行了分析，EP9-A文件要求最終的有效標本數40～100個，且至少一半的結果位于參考范圍以外，不能包含離群值，若離群值≥2時，應終止實驗，問題排查后，重新實驗[2]。當相關系數R＜0.975或R2＜0.95時提示樣本量過少，應追加樣本數，本實驗數據均滿足要求。