血管內皮祖細胞在治療動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞中的作用

宰青青，潘 婷，楊勝萍

（銅仁職業技術學院，貴州 銅仁 554300）

動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞是一種常見的血管病變。目前臨床上治療此病的主要方法包括實施介入手術、藥物治療等。有研究指出，動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞的發生、發展與患者存在血管內皮細胞損傷密切相關。夏文豪等[1]的研究結果表明，通過補充血管內皮祖細胞可修復受損的血管，從而可有效地根治動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞。為了進一步評價用血管內皮祖細胞治療動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞的效果，筆者進行了以下研究。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

選取60只Wistar大鼠作為實驗對象。這60只大鼠均為雄性；其體重為200～300g。將其建立為動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞大鼠模型。方法是：對大鼠的股動脈進行鉗夾、結扎，對其股動脈的分支血管進行離斷。然后使用高脂飼料對其進行為期8周的飼養。

1.2 儀器與試劑

本研究中所使用的血管內皮祖細胞是由對大鼠骨髓間充質干細胞進行分離培養誘導獲得的第4代血管內皮祖細胞，其存活率在90%以上。本研究中所使用的儀器主要包括冰臺、石蠟切片機、石蠟包埋機、超凈工作臺、高壓滅菌器、圖像采集系統、高速離心機等。本研究中所使用的試劑主要包括胎牛血清、L-DMEM培養基干粉、PBS緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、過氧化氫溶液等。

1.3 方法

將本組60只大鼠隨機分為模型組、對照組和實驗組（20只/組）。為實驗組大鼠肌內注射血管內皮祖細胞溶液。方法是：在大鼠雙下肢的股四頭肌、腓腸肌內注射1ml濃度為4～5×106/ml的血管內皮祖細胞溶液。為對照組大鼠肌內注射生理鹽水。方法是：在大鼠雙下肢的股四頭肌、腓腸肌內注射1ml的生理鹽水。對模型組大鼠不進行任何處理。在14d后處死三組大鼠。對其進行解剖，以獲取其股動脈根部血管的切片。使用蘇丹Ⅲ對切片進行染色。使用圖像自動分析系統對大鼠股動脈根部血管切片中斑塊的面積、斑塊負荷進行測定，并采用免疫組化技術測定其Foxp3的表達水平。

1.4 觀察指標

對比三組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平。

1.5 統計學處理

采用SPSS 20.0軟件對本文中的數據進行分析。大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平等計量資料用（±s）表示，兩組間的比較采用t檢驗，多組間的比較采用F檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

模型組大鼠與對照組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。實驗組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷均小于模型組大鼠和對照組大鼠，其Foxp3的表達水平高于模型組大鼠和對照組大鼠，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表 1。

表1 對比三組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平（±s）

表1 對比三組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平（±s）

注：*與實驗組相比，P＜0.05。

組別（n=20）斑塊面積（×105μm2）斑塊負荷（%）Foxp3的表達水平模型組 53.4±3.0* 37.9±2.1* 1.62±0.34*對照組 52.8±5.4* 37.9±2.0* 1.58±0.26*實驗組 44.9±5.4 34.4±1.8 2.31±0.76

3 討論

3.1 動脈粥樣硬化與血管內皮祖細胞的關系

臨床研究發現，動脈粥樣硬化的發生與血管內皮功能障礙密切相關。血管內皮細胞受血脂異常等因素的影響，易發生功能異常，從而可導致血管平滑肌細胞遷移、血管張力異常等一系列的病理變化，最終可引發血管內皮損傷及動脈粥樣硬化[2]。饒璇等[3]研究指出，通過補充血管內皮祖細胞可修復受損的血管，從而可延緩動脈粥樣硬化的發生。

3.2 用血管內皮祖細胞治療動脈粥樣硬化的療效

Foxp3是一種轉錄因子，能夠抑制自身反應性T細胞的活性。此轉錄因子的表達水平越高，表示受損血管修復的效果越好[4]。本次研究的結果顯示，實驗組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷均小于模型組大鼠和對照組大鼠，其Foxp3的表達水平高于模型組大鼠和對照組大鼠。

綜上所述，用血管內皮祖細胞治療動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞的效果確切，可有效地抑制此病模型大鼠血管斑塊的形成。