消化止瀉口服液中主要成分的薄層鑒別研究

張圣潔,景霞

(南京醫科大學附屬兒童醫院藥學部,江蘇 南京 210008)

小兒腹瀉病是一種以夏秋季發病為主、3周歲以下兒童居多的常見疾病。臨床中主要以便質稀薄如水樣、排便次數多為典型癥狀。病情發展迅速，如不及時治療易耽誤最佳治療時機，可引起不同程度脫水、電解質及酸堿平衡的紊亂，進而引發兒童休克甚至危及生命。遷延不愈亦可造成營養流失、免疫力低下，影響兒童正常生長發育[1-2]。由于小兒的消化系統尚未發育成熟、機體防御抵抗疾病能力差，造成小兒腹瀉的外來刺激復雜多樣，主要常見因素有：飲食；病毒、細菌、寄生蟲；濫用藥物；過敏因素等。常規的大便檢查往往無特殊發現，且抗菌消炎類西藥無特殊針對性，濫用還易導致腸道菌群失調，加重病情[3]。中醫認為，小兒臟腑易感外邪，脾運不佳，飲食不節，且泄瀉主要病位在脾胃兩臟，因而針對兒童的治療方法應以調理脾胃為原則[4-5]。消化止瀉方為南京市兒童醫院專家多年經驗方，由廣木香、炒陳皮、炒蒼術、薏苡仁、六神曲及焦山楂組成。蒼術具醒脾助運，疏化水濕之功，與消積開竅的焦山楂，消食下氣的六神曲配伍助運效果更佳，廣木香、陳皮均有理氣添濕之功效，薏苡仁最擅于健脾滲濕止瀉[6-7]。諸味藥相配健脾和胃、消食止瀉，表里諸癥自除。因湯藥諸多不便，劑型改良后制成消化止瀉口服液[8-9]，用于治療食欲不振，癥結積滯，惡心嘔吐，大便溏薄，舌苔膩厚等癥。臨床應用多年，效果顯著。為了更好地研究消化止瀉口服液的產品質量[10]，本文采用了薄層色譜法，建立了制劑中炒陳皮、炒蒼術、廣木香、薏苡仁、焦山楂的定性鑒別方法，以有效控制制劑的質量。

1 儀器與試藥

精密電子分析天平(德國Sartorius)；紫外線分析儀(上海勤科)；超聲提取器(深圳云奕)；薄層色譜加熱器(天津同普)；臺式高速冷凍離心機(美國熱電)；硅膠G板(批號 20130208、20140108，青島海洋化工廠)；陳皮對照藥材(批號 120969—201109)、蒼術對照藥材(批號 120932—200405)、木香對照藥材(批號 120921—201309)、薏苡仁對照藥材(批號 121254—201203)、山楂對照藥材(批號 121626—201001)均購自中國藥品生物制品檢定所；消化止瀉口服液為南京市兒童醫院藥學部自制(批號 121015、131216、140909)；陰性對照溶液自制；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1炒陳皮的薄層鑒別量取消化止瀉口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL，充分振搖，待靜置分層后，將萃取所得乙酸乙酯層分離并蒸干，殘渣加甲醇2 mL，收集后即得供試品；量取未含有炒陳皮的樣品10 mL，采用上述方法制備陰性對照；另取陳皮對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲30 min，過濾，濾液備用，即得對照藥材溶液。

點樣管吸取上述三個批號供試品5 μL，陰性對照5 μL，對照藥材2 μL，分別平行點于薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶0.5∶0.5)為展開劑，充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達8 cm后夾出晾干，置紫外光(365 nm)下[11]。可以看出位于中間的三條供試品色譜，在與最左側的對照藥材色譜平行位置上，有相同熒光斑點，最右側陰性對照無同樣斑點。見圖1。

圖1 消化止瀉口服液炒陳皮薄層鑒別(1為陳皮對照藥材；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為批號121015供試品；5為陰性對照溶液)

2.2炒蒼術的薄層鑒別量取消化止瀉口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL，振蕩，靜置分層后，過濾，分離出乙酸乙酯層，收集后即得供試品；量取未含有炒蒼術的陰性樣品10 mL，采用上述方法制備陰性對照；另取蒼術對照藥材0.8 g，加水煎煮1 h，濾過后將濾液按照供試品的處理方法同法制成對照藥材溶液。

點樣管吸取上述三個批號供試品5 μL、陰性對照5 μL、對照藥材2 μL，分別平行點于薄層板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶0.5)為展開劑，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達8 cm后夾出晾干，置紫外光燈(365 nm)下。從圖2可以看出位于左邊的三條供試品色譜，在與第4條對照藥材色譜平行位置上，有相同熒光斑點，最右側陰性對照無同樣斑點。

2.3廣木香的薄層鑒別量取消化止瀉口服液60 mL，加石油醚(60～90 ℃)10 mL，密塞，振蕩后，靜置4 h后，過濾，分離出石油醚層，收集后即得供試品；量取未含有廣木香的陰性樣品60 mL，采用上述方法制備陰性對照；另取木香對照藥材1 g，加入石油醚(60～90 ℃)10 mL，超聲30 min，濾過，取濾液，即得對照藥材品溶液。

點樣管吸取上述三個批號供試品5 μL、陰性對照5 μL，對照藥材2 μL，分別平行點于薄層板上，以環己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1.2)[3]的上層溶液為展開劑，此處相對藥典方法略微增大甲酸比例，從而使展開劑極性增大，較好地減輕了拖尾現象，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達8 cm后夾出晾干，噴1%香草醛硫酸顯色，加熱待斑點清晰，置日光下，從圖3可以看出，最左側的三條供試品色譜，在與第4條對照藥材色譜平行位置上，有相同清晰藍色斑點，最右側陰性對照無同樣斑點。

圖2 消化止瀉口服液炒蒼術薄層鑒別(1為批號121015供試品；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為蒼術對照藥材；5為陰性對照溶液)

圖3 消化止瀉口服液廣木香薄層鑒別(1為批號121015供試品；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為木香對照藥材；5為陰性對照溶液)

2.4薏苡仁的薄層鑒別量取消化止瀉口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL萃取，振蕩，靜置分層后，過濾，分離出乙酸乙酯層，收集后即得供試品；量取未含有薏苡仁的陰性樣品10 mL，采用上述方法制備陰性對照；稱取薏苡仁對照藥材1 g，加乙酸乙酯10 mL，超聲30 min，過濾后的濾液即為對照藥材溶液。

點樣管吸取上述三個批號供試品5 μL、陰性對照5 μL對照藥材2 μL，分別平行點于薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-乙酸(10∶3∶0.1)為展開劑，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達8 cm后夾出晾干，置紫外光燈(365 nm)[12]下。從圖4可以看出，左側的三條供試品色譜，在與第4條對照藥材色譜平行位置上，有相同熒光斑點，最右側陰性對照無同樣斑點。

圖4 消化止瀉口服液薏苡仁薄層鑒別(1為批號121015供試品；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為薏苡仁對照藥材；5為陰性對照溶液)

2.5焦山楂的薄層鑒別量取消化止瀉口服液50 mL，5 000 r·min-1離心10 min，取沉淀加5 mL甲醇超聲10 min，14 000 r·min-1離心5 min，過濾，分離收集上清液即得供試品。量取未含有焦山楂的陰性樣品50 mL，采用上述方法制備陰性對照；稱取山楂對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲30 min，過濾后的濾液即為對照藥材溶液。

點樣管吸取上述三個批號供試品5 μL、陰性對照5 μL、對照藥材2 μL，分別平行點于薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶2.5∶1∶0.5)為展開劑，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達8 cm后夾出晾干，噴10%硫酸乙醇顯色，置紫外光燈(365 nm)下。從圖5可以看出，中間三條供試品色譜，在與最左側對照藥材色譜相應的位置上，同樣有一淺一亮兩處熒光斑點在相鄰位置，最右側陰性對照無同樣斑點。

3 討論

目前中藥制劑存在的安全性問題尤為突出，中藥的配伍中有效成分相互作用，毒性等問題都是研究中所要面對的。過去的許多中醫經驗方都欠缺一套完整的質量標準體系，或者僅憑對質量標準概念粗淺的認識簡單的做了初步的質量標準實驗。中藥制劑的質量標準亟待得到提升和完善，才能使患者用藥的安全性得到基本的保障。為了提高我院傳統經驗方消化止瀉口服液的質量標準，并且制訂出規范的定性質量控制方法，本實驗在前期實驗的基礎上對消化止瀉口服液中主要成分炒陳皮、炒蒼術、廣木香、薏苡仁和焦山楂五味藥材進行了薄層鑒別研究。

圖5 消化止瀉口服液焦山楂薄層鑒別(1為山楂對照藥材；2為批號121015供試品；3為批號131216供試品；4為批號140909供試品；5為陰性對照溶液)

研究結果顯示色譜圖中各成分之間分離效果好，特征斑點清晰，與陰性對照組差異明顯。藥品處理方法簡便，實驗重復性好。由于制劑工藝中包含了煎煮、醇沉和水沉等方法，使得藥材中的諸多揮發性成分以及大極性的組分都被去除，考慮到此因素，若要對消化止瀉口服液中主要藥材的成分進行薄層鑒別就需要選擇合適的萃取試劑和展開劑。在薏苡仁、炒蒼術和炒陳皮三種藥材的薄層鑒別的預實驗中[13-14]，比較了多種極性試劑對供試品不同的處理方法后，最終確定以乙酸乙酯萃取供試品為最佳方案。在此條件下可以同時對此三種藥材中主要成分進行提取，降低了實驗的繁瑣程度，大大提高了效率。

在焦山楂的薄層鑒別中，由于藥材本身的炮制工藝影響以及后期在合劑制備過程中水煎煮等過程的作用，使山楂中的部分不溶于水成分嚴重流失。藥典中山楂的的鑒別方法以熊果酸為對照品，由于制備工藝的因素影響，制劑中脂溶性成分含量較少，未鑒定出該成分。國內外對山楂的薄層鑒別方法較少[15-16]，本實驗前期參照文獻[17]曾采用乙酸乙酯來萃取供試品來鑒別焦山楂，但卻無法在本薄層鑒別研究中重現此方法，推測不同的山楂炮制品中成分存在較大差異。因此最終在焦山楂的鑒別中采用了離心，甲醇溶解沉淀的方法制備供試品。用沉淀法得到的樣品，有兩處清晰斑點相對應，方法簡便，易于操作。可為復雜制劑工藝中山楂的鑒別提供參考。炮制品的制備工藝比較復雜，若在薄層鑒別中選擇藥典中規定的對照品相比較，則無法對應的可能性較大。同時，若要篩選出單一有效成分進行對照也有一定難度，因此選擇對照藥材則更為適合。此外，廣木香的展開劑在藥典中薄層鑒別方法的基礎上稍作改動，將展開劑環己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)更改為環己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1.2)，甲酸比例略微增大，從而使展開劑極性增大，較好地減輕了拖尾現象，將特征性斑點能更好地與供試品及對照藥材中其他干擾成分分開。綜上，本實驗結果為提高我院自制制劑消化止瀉口服液質量標準提升提供了可靠的參考依據。