食管癌細胞株ECA109及KYSE150中NFκB與VEGF信號通路研究與分析

安尼瓦爾·買買提 陳海林 依布拉音江·依布拉音

（喀什地區第一人民醫院胸外科 新疆 喀什 844000）

前言

食管癌（esophageal carcinoma）是一種發病率較高的惡性腫瘤，其發生率在多發腫瘤中位居第八位，死亡率為第五位，我國是食管癌發生率最高的國家之一。此前針對該疾病的預防治理效果不佳，研究指出對食管癌的發生、發展進行分析，了解其細胞株信號通路，對于化療等工作有一定的優化作用。我院針對上述內容進行了分析調查，所獲結果如下：

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年1月-2017年12月收治的100例食管癌患者作為對象，收集術后癌組織及癌旁組織共50對標本進行研究。100例患者中，男性患者58例，女性患者42例，年齡45～66歲，平均年齡57.1±2.2歲，早期食管癌患者17例，中期食管癌患者29例，晚期食管癌患者54例。以樣本為基礎培育的細胞株分為兩組，即轉染NFκB s h RNA載體組、轉染NFκB過表達載體組，每組25對樣本，培育方式和時間相同。

1.2 納入和排除標準

（1）所有標本均來源于食管癌患者。（2）排除患有重大疾病的患者。

1.3 方法

收集患者術后癌組織及癌旁組織共50對標本，提取mRNA及蛋白，了解NFκB、VEGF、VEGR1在轉錄及蛋白水平的變化情況。構建NFκB過表達質粒載體，在食管癌細胞株ECA109及KYSE150中，轉染NFκB過表達質粒載體，設立對照組，通過質粒轉染，轉染48小時后，提取mRNA及蛋白，了解NFκB、VEGF及VEFGR1在轉錄及蛋白水平的表達較對照組的表達變化差異；流式細胞儀檢測細胞周期及細胞凋亡，了解對細胞生物學功能的影響。明確NFκB的表達增高，可否伴隨著VEGF及VEGFR1的表達增高，初步確定以上因子的相互關系。重復構建過程，明確NFκB的表達降低，可否伴隨著VEGF及VEGFR1的表達減少。

1.4 觀察指標

本次調查主要觀察食管癌細胞株ECA109及KYSE150中NFκB與VEGF信號通路，收集細胞周期及細胞凋亡數據，對NFκB可否伴隨著VEGF及VEGFR1的表達變化出現變化，并了解這種變化的規律性。

2.結果

2.1 NFκB、VEGF及VEFGR1的變化情況

通過實驗發現，在轉染48小時后，NFκB、VEGF及VEFGR1在轉錄及蛋白水平的表達方面，較對照組表達變化差異不顯著，組間差異無統計學意義（P＞0.05），隨著抑制劑濃度的增高，NFκB及VEGF的表達逐漸降低，對空白對照組差異明顯，具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 細胞周期及細胞凋亡

通過實驗發現，轉染48小時后，細胞周期與凋亡情況出現變化，轉染NFκB s h RNA載體組、轉染NFκB過表達載體組組間差異不顯著，差異無統計學意義（P＞0.05），與空白對照組相比差異顯著，且具有統計學意義（P＜0.05）。數據信息如表1所示。

表1 細胞周期及細胞凋亡

2.3 NFκB與VEGF信號通路

對NFκB與VEGF的信號通路進行分析，發現當VEGF及VEGFR1的表達出現變化時。NFκB的表達會同步出現變化，這種變化帶有典型的規律性，NFκB的表達增高，VEGF及VEGFR1的表達同步增高，NFκB的表達降低，VEGF及VEGFR1的表達同步降低，這表明了三個因素之間的相關性，即NFκB為調控VEGF表達的上游基因[1]。

3.討論

食管癌是一種發生率較高的惡性腫瘤，我國食管癌患者數占據世界食管癌患者總數的二分之一左右。新疆喀什地區民眾受到生活習慣、食物類型的影響，罹患食管癌的幾率較其他地區民眾更高。大部分患者確診時已經進入癌癥晚期，手術治療后存活不超過5年。本次研究將重點放在血管內皮生長因子（VEGF）、血管內皮細胞生長因子受體1（VEGFR1）與轉錄因子蛋白（NFκB）的信號通路方面。結果上看，VEGF會減少金屬蛋白酶抑制劑的釋放，并通過分泌（包括自分泌和旁分泌）與血管內皮細胞生長因子受體1（VEGFR1）結合，實現下游信號通路的激活，進一步參與腫瘤的形成、遷移[2]。在此過程中轉錄因子蛋白會出現與之帶有相同規律的變化，是調控VEGF表達的上游基因，通過了解NFκB的變化，可以分析癌細胞的態勢和擴散情況。

綜上所述，食管癌細胞株ECA109及KYSE150中，NFκB可參與VEGF的表達調控，NFκB為調控VEGF表達的上游基因。