原發(fā)性干燥綜合征患者外周血及唇腺組織中Bcl-6、Blimp-1、IL-21表達(dá)水平及臨床意義

王舒婷

（四川省樂山市人民醫(yī)院 四川 樂山 614000）

干燥綜合征為目前臨床上較為常見的一種自身免疫性疾病，具體分為原發(fā)性開燥綜合征和繼發(fā)性干燥綜合征。原發(fā)性干燥綜合征的主要臨床表現(xiàn)為口、眼干燥，并可累及腎、肺、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多個(gè)系統(tǒng)，進(jìn)而引起患者全身器官受累[1]。據(jù)相關(guān)資料顯示，皮膚表現(xiàn)被認(rèn)為是原發(fā)性干燥綜合征最具特征性的腺外表現(xiàn)之一，患者皮膚干燥，嚴(yán)重者常伴瘙癢，并因搔抓導(dǎo)致外傷。由于反復(fù)搔抓刺激，局部組織肥厚，色素沉著而出現(xiàn)苔蘚化，還可出現(xiàn)高球蛋白血癥性紫癜樣皮疹，其本質(zhì)為局部血管炎[2]。肺間質(zhì)纖維化是原發(fā)性干燥綜合征合并肺損害最多見的類型，原發(fā)性干燥綜合征肺動(dòng)脈髙壓的發(fā)生常與雷諾現(xiàn)象及肺間質(zhì)病變存在相關(guān)[3]。大量病例資料顯示，原發(fā)性干燥綜合征近年來(lái)發(fā)病率存在上升趨勢(shì)，當(dāng)疾病控制欠佳發(fā)展至較為嚴(yán)重時(shí)，已成為一個(gè)嚴(yán)重影響居民健康和生活質(zhì)量的公共衛(wèi)生問(wèn)題[4]。有學(xué)者提出，Bcl-6、Blimp-1、IL-21可能參與了原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病機(jī)制。Bcl-6、Blimp-1、IL-21與唇腺組織中淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)程度有關(guān)[5]。為了探討原發(fā)性干燥綜合征患者外周血及唇腺組織中Bcl-6、Blimp-1、IL-21表達(dá)水平及臨床意義，本文觀察了在我院就診的42例原發(fā)性干燥綜合征患者的基本資料，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2016年1月至2016年12月在我院就診的48例原發(fā)性干燥綜合征患者作為研究對(duì)象（觀察組），同期選取42例正常唇腺組織患者的正常唇腺組織（頜面部等外科疾病）作為對(duì)照組。對(duì)照組：男性22例，女性20例；年齡為20～70歲，平均年齡為（54.06±6.75）歲；觀察組：男性25例，女性23例；年齡為21～72歲，平均年齡為（55.14±6.63）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合原發(fā)性干燥綜合征的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；（2）臨床資料真實(shí)且完整；（3）患者及其家屬均知情本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在精神障礙者；（2）參加其他研究者；（3）患者及其家屬自愿退出研究者。

1.2 方法

（1）所有患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血2ml，進(jìn)行離心后將其保存在冰箱中等待備用。采用酶聯(lián)免疫方法定性的測(cè)定受試患者白介素21（IL-21）水平；（2）將石蠟包埋的組織切片后脫蠟，將其避光封閉15min后進(jìn)行液洗。將切片浸泡在枸櫞酸鹽修復(fù)液微波修復(fù)5～10min，溫度保持在40～80℃，當(dāng)切片自然冷卻后在此進(jìn)行液洗，并將其放置冰箱30min后依次添加一抗（抗Bcl-6/Blimp-1）、生物素化第二抗體、辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液。使用二氨基聯(lián)苯胺顯色，并在鏡下觀察。最后使用蘇木素復(fù)染，進(jìn)行脫水、清洗、中性樹膠封片。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)Bcl-6時(shí)，胞核為淡黃色至棕褐色者為陽(yáng)性標(biāo)志，檢測(cè)Blimp-1時(shí)，胞核為淡黃色至棕褐色者為陽(yáng)性標(biāo)志。按照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目比例分為5個(gè)等級(jí)，以0～4分計(jì)分，并根據(jù)染色強(qiáng)度將其分為淡黃色、棕黃色以及棕褐色，分別代表弱、中、強(qiáng)，以1～3分計(jì)分。（2）觀察兩組患者Bcl-6、Blimp-1水平；（3）觀察Bcl-6、Blimp-1在觀察組不同病理級(jí)別中的表達(dá)；（4）觀察Bcl-6、Blimp-1在不同臟器損害的觀察組唇腺組織中的表達(dá)；（5）觀察比較兩組患者血清IL-21的表達(dá)水平；（6）觀察比較IL-21在觀察組不同病理級(jí)別中表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述，采用t進(jìn)行檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料通過(guò)率或構(gòu)成比描述，并采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組患者Bcl-6、Blimp-1的比較

兩組患者在Bcl-6以及Blimp-1的比較上存在差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 兩組患者Bcl-6/Blimp-1的比較

2.2 Bcl-6、Blimp-1在觀察組不同病理級(jí)別中的表達(dá)

兩組患者將觀察組按淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)清理分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個(gè)等級(jí)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組患者4個(gè)等級(jí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表2。Blimp-1蛋白的表達(dá)與病理分級(jí)呈正相關(guān)（rs=0.629，P＜0.001）。

表2 Bcl-6、Blimp-1在觀察組不同病理級(jí)別中的表達(dá)

2.3 Bcl-6、Blimp-1在不同臟器損害的觀察組唇腺組織中的表達(dá)

腎小管酸中毒、血液系統(tǒng)受累、周圍神經(jīng)病變、肺間質(zhì)纖維化及無(wú)系統(tǒng)損害五組間Bcl-6、Blimp-1蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見表3。

表3 Bcl-6、Blimp-1在不同臟器損害的觀察組唇腺組織中的表達(dá)

2.4 兩組患者血清IL-21的表達(dá)水平

兩組患者血清IL-21表達(dá)水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表4。

表4 兩組患者血清IL-21的表達(dá)水平

2.5 IL-21在觀察組不同病理級(jí)別中表達(dá)水平的比較

唇腺活檢HE染色淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個(gè)病理等級(jí)，4個(gè)病理等級(jí)中IL-21表達(dá)水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表5。疾病組IL-21 表達(dá)水平與唇腺活檢病理等級(jí)呈正相關(guān)（rs=0.815，P=0.001）。

表5 兩組患者血清IL-21的表達(dá)水平

3.討論

淋巴系統(tǒng)病變是原發(fā)性干燥綜合征的重要表現(xiàn)。除淚腺和唾液腺外，其他組織也可有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。這些浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞主要是CD4+T細(xì)胞，它可以產(chǎn)生許多細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-2以及干擾素7，這些細(xì)胞因子刺激B細(xì)胞克隆引起淋巴組織增生。

據(jù)相關(guān)資料報(bào)道，原發(fā)性干燥綜合征的血液系統(tǒng)損害可累及所有血細(xì)胞，主要機(jī)制是自身抗體與血細(xì)胞結(jié)合并破壞。臨床主要表現(xiàn)為單純性貧血或白細(xì)胞、血小板減少，亦有兩系以上細(xì)胞同時(shí)減少。原發(fā)性干燥綜合征多有淋巴組織增生，病理一般為良性，但極少數(shù)會(huì)演變?yōu)榧傩粤馨土龌驉盒粤馨土觥４罅颗R床資料顯示，原發(fā)性干燥綜合征發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，對(duì)患者的身體健康以及生命安全均存在一定的消極影響[7]。

早期臨床對(duì)于原發(fā)性干燥綜合征的檢查以及早期癥狀未進(jìn)行重視，患者常在癥狀較為明顯、病情進(jìn)展嚴(yán)重時(shí)就醫(yī)，但耽誤的疾病的最佳治療時(shí)間。隨著人們對(duì)于改變的重視，疾病的發(fā)現(xiàn)率明顯提升。既往資料顯示，Bcl-6、Blimp-1、IL-21可能參與了原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病機(jī)制。Bcl-6、Blimp-1、IL-21與唇腺組織中淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)程度有關(guān)[8]。本文旨在探討原發(fā)性干燥綜合征患者外周血及唇腺組織中Bcl-6、Blimp-1、IL-21表達(dá)水平及臨床意義。Bcl-6屬于抗細(xì)胞凋亡家族，主要功能是轉(zhuǎn)錄抑制作用，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。受Bcl-6調(diào)控的靶基因主要與細(xì)胞活化、分化和增生相關(guān)。Blimp-1為鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄抑制因子，可促進(jìn)B細(xì)胞發(fā)育成漿細(xì)胞終末分化。IL-21參與調(diào)節(jié)B細(xì)胞增殖，協(xié)同IL-15促進(jìn)骨髓前體細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞毒活性。本研究結(jié)果顯示，兩組患者在Bcl-6、Blimp-1、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)清理4個(gè)等級(jí)、血清IL-21表達(dá)水平、唇腺活檢HE染色淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況以及4個(gè)病理等級(jí)中IL-21的比較上存在差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上結(jié)果說(shuō)明Bcl-6、Blimp-1、IL-21為原發(fā)性干燥綜合征病情嚴(yán)重程度的危險(xiǎn)因素，對(duì)于原發(fā)性干燥綜合征病情變化有一定的預(yù)測(cè)作用。

綜上所述，Bcl-6、Blimp-1、IL-21可能參與了原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病機(jī)制。Bcl-6、Blimp-1、IL-21與唇腺組織中淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)程度有關(guān)。