注射用醋酸去氨加壓素制備工藝及質量考察

李遠文

（深圳技師學院，廣東深圳518116）

0 引言

醋酸去氨加壓素（desmopressin acetate）為天然精氨鹽加壓素的結構類似物，系對天然激素的化學結構進行兩處改動而得，即1-半胱氨酸脫去氨基，以8-D-精氨酸取代8-L-精氨酸，因此本品亦稱去氨精氨酸加壓素。其分子式為C46H64N14O12S2C2H4O2，分子量為1 129.35，化學名為巰基丙酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰氨酰-L-天冬酰氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-D-精氨酰-L-甘氨酰胺醋酸鹽（1,6-二硫環）。在常溫下，醋酸去氨加壓素為一種白色無嗅粉末。醋酸去氨加壓素是一種多肽類藥物，是手術及相關科室的新型止血藥，可有效減少出血量，并預防深靜脈血栓；是輕中度甲型血友病、血管性血友病的一線用藥，可用于治療肝硬化、尿毒癥及各種抗凝、抗血小板藥物所致的出血；也是中樞性尿崩癥及原發性遺尿癥的首選用藥。

注射用醋酸去氨加壓素系真空冷凍干燥產品，真空冷凍干燥是指將含水樣品凍結到冰點以下，使樣品中的水分凍結成小冰晶，然后在真空狀態下通過加熱使水分由固態直接升華成氣態水蒸氣而逸出，使樣品中水分失去而得到的干燥樣品。凍干工藝主要包括預凍、升華干燥、解吸干燥3個階段，本文通過考察注射用醋酸去氨加壓素凍干工藝中的各條件，得到最佳制備工藝，并經驗證該工藝適合批量生產。

1 材料與設備

1.1 材料

醋酸去氨加壓素（深圳翰宇藥業股份有限公司）；甘露醇（廣西南寧化學制藥有限責任公司）；醋酸（湖南爾康制藥股份有限公司）；注射用冷凍干燥用溴化丁基膠塞（西氏醫藥包裝中國有限公司）；模制西林瓶（浙江新康藥用玻璃有限公司）；抗生素瓶用鋁塑組合蓋（泰州市永興醫藥包裝有限公司）。

1.2 主要設備

LYO-7.5真空冷凍干燥機（上海某公司）；RZGSB西林瓶灌裝半加塞機（長沙某公司）；KSC-ⅡB隧道式超聲波玻璃瓶洗瓶機（南京某公司）；STE100/2/100潔凈對開門滅菌烘箱（德國EHRE公司）；KGL250自動軋蓋機（南京某公司）。

2 方法

2.1 樣品制備

將醋酸去氨加壓素用注射用水溶解后，與經超濾的甘露醇水溶液合并，用注射用水稀釋至所需濃度，用RZGSB西林瓶灌裝半加塞機按照所需的相應體積進行灌裝，送入LYO-7.5真空冷凍干燥機，依據不同的凍干工藝條件進行凍干，凍干結束后充氮保護，壓塞，取出西林瓶，軋蓋。

2.2 冷凍干燥方法

將制備好的樣品分裝于2m L西林瓶中，放入凍干機干燥箱中進行預凍，并保證凍結完全。之后進行抽真空，在真空度為5～50 Pa狀態下加熱升華干燥，使樣品水分含量≤5%。

2.3 擴大批量驗證

將3批注射用醋酸去氨加壓素配制液，按照試驗優化后的凍干工藝進行冷凍干燥。3批半成品批量為27 000瓶。分別按2015版《中華人民共和國藥典》二部及國家食品藥品監督管理局《注射用醋酸去氨加壓素藥品標準》（YBH 01702010）的相關規定，檢定各批次制品的殘余水分、細菌內毒素、酸堿度以及含量，統計結果，以驗證該工藝的適用性。

2.4 質量考察

本次試驗工藝生產的樣品及3批驗證工藝生產的產品，由深圳翰宇藥業股份有限公司QC部進行抽樣檢測。

2.4.1 水分測定

取本品，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0832）中的容量滴定法進行檢查，要求含水分不得超過5.0%。

2.4.2 細菌內毒素測定

取本品，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（1143）中的細菌內毒素檢測方法進行檢查，要求細菌內毒素含量應小于0.6 EU/μg。

2.4.3 酸度

取本品，加水溶解并稀釋制成每lm L中含2.5mg的溶液，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0631）中的pH值測定法進行檢查，要求pH值應為5.0～7.0。

2.4.4 溶液澄清度檢查

取本品，加水溶解并稀釋制成每lm L中含2.5mg的溶液，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0902）中的溶液澄清度檢查法進行檢查，要求溶液應澄清無色。

2.4.5 含量測定

按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0512）中的高效液相色譜法測定含量。

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽溶液（取0.067mol/L磷酸氫二鈉與0.067mol/L磷酸二氫鉀等混合，調節pH值至7.0）-乙腈（80∶20）為流動相；檢測波長為220 nm。取醋酸去氨加壓素、雜質A與縮宮素對照品適量，加水溶解并稀釋制成每lm L中各約含20μg的混合溶液，作為系統適用性溶液。理論板數按醋酸去氨加壓素峰計算不低于2 000。

測定方法：取本品10支，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每lm L中約含8μg的溶液，精密量取50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取醋酸去氨加壓素對照品適量，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

3 結果

3.1 裝量的確定

將稀釋好的醋酸去氨加壓素溶液分別裝入2m L西林瓶中，每瓶裝量分別為0.5m L、0.8m L、1.1m L、1.4m L，每瓶含量都是15μg，進行凍干試驗，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結果如表1所示。

從表1結果對比可知：裝量規格為0.8m L/瓶和1.1m L/瓶時，樣品性狀、餅狀物外觀最好；0.5m L/瓶裝量規格的樣品餅狀物出現萎縮；1.4m L/瓶裝量規格的樣品餅狀物過于疏松，容易散開。4種裝量規格的凍干樣品的溶液澄清度沒有明顯差異，均符合質量要求。

綜合考慮，本試驗確定0.8m L/瓶為本產品最適宜的凍干裝量，既節約物料，裝在2m L西林瓶中又顯得美觀。

3.2 預凍溫度的確定

設置好相應的板層溫度，開動壓縮機對前箱制冷，使制品溫度迅速降溫（降溫時間≤2 h），制品溫度分別在-20℃、-30℃、-40℃、-45℃以下保持2 h以上，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結果如2所示。

從表2結果對比可知：-20℃和-30℃預凍溫度的樣品均出現不同程度的餅狀物外觀萎縮，可能是由于溫度較高，樣品沒有完全凍結，在真空升華階段極易溶解周圍樣品所致。而-40℃和-45℃預凍溫度的樣品試驗結果沒有明顯差別，均符合質量要求。由于過低的預凍溫度會使能耗增加，因此本試驗選擇-40℃為本產品最適宜的預凍溫度。

3.3 升華溫度的確定

在真空度為5～50 Pa狀態下加熱升華干燥，使制品最終溫度分別控制在-15℃、-20℃、-25℃、-30℃，整個升華干燥階段需要8 h，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結果如表3所示。

表1 不同裝量規格的試驗結果

表2 不同預凍溫度的試驗結果

從表3結果對比可知：當升華溫度為-15℃時，凍干樣品性狀為類白色結晶，凍干餅狀物有萎縮現象，溶解后溶液渾濁。這是因為該溫度在其共晶點附近時，冰晶部分溶解成液態，吸熱蒸發，使樣品顏色加深、餅狀物出現萎縮。升華溫度過低，制冷能耗增加，成本提高。真空冷凍干燥是通過升高板層的溫度，相應地使干燥物表面的溫度升高，用以加快升華速度。但是，板層溫度并非越高越好，必須要考慮樣品的性狀因素。綜合表明，-25℃為本產品最適宜的凍干升華溫度。

3.4 解吸溫度的確定

在真空度為1～10Pa狀態下加熱進行解吸干燥，使制品最終溫度分別控制在25℃、30℃、35℃、40℃，整個解吸干燥階段需要5 h，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度、水分檢查，結果如表4所示。

從表4結果對比可知：解吸干燥溫度為30℃時，雖然樣品各方面指標基本合格，但水分接近標準規定的上限。解吸干燥溫度為25℃時，樣品水分不合格。解吸干燥溫度為40℃時，樣品餅狀物外觀、性狀不合格。故選擇35℃為本產品最適宜的解吸干燥溫度。

3.5 擴大批量驗證

為了驗證優選的凍干工藝的穩定性，車間連續生產了20120301、20120302、20120303這3批注射用醋酸去氨加壓素配制液，按照上述試驗優選后的凍干工藝進行冷凍干燥工藝的驗證。3批半成品的裝量均為0.8m L/瓶，批量為27 000瓶，結果如表5所示。

從表5結果可以看出：這3批凍干制品的檢定結果均符合國家標準，表明該凍干工藝符合生產要求，穩定性良好。

4 結語

凍干制劑主要存在產品萎縮、自溶、分層等缺陷。其主要原因是：預凍溫度高，制品尚未完全凍結；升華干燥溫度高、速度快，使部分制品融化。本試驗中，注射用醋酸去氨加壓素溶液的共晶點為-14℃，溶液共晶點在凍干工藝中很重要，它是制定凍干工藝的主要依據。預凍時，必須冷凍到共晶點以下，為了確保產品在預凍時完全凍結，本試驗選擇-40℃為其預凍溫度。在升華干燥過程中，不能超過共晶點溫度，本試驗中的升華溫度確定為-25℃，可以保證水分最大限度地升華。

表3 不同升華溫度的試驗結果

表4 不同解吸溫度的試驗結果

表5 成品檢驗結果

在凍干生產過程中，應密切關注凍干機板層溫度、制品溫度、冷凝器溫度、真空度等的變化，確保其符合相關要求。同時，應關注時間和溫度的變化速率，盡可能選用自動控制模式。除自動記錄外，還應人工記錄上述參數的設定和變化情況，并定時觀察產品的變化情況及凍干機的運行狀況，這樣才能確保生產出合格的產品。