浙江省不同產地茶葉主要成分含量比較及分析

郞明洋 付長華

（花園藥業股份有限公司，浙江金華322121）

0 引言

茶為山茶科植物茶（Camellia sinensikuntze）的芽葉，具有抗氧化、抗衰老、抗輻射、防治心血管疾病、防癌抗癌及調節免疫等多種功效[1]，被應用于食品、飼料、化妝品、醫藥等多個領域[2]。研究表明，從茶葉中提取的茶多酚在增強人體健康方面具有重要的作用。茶多酚因其獨特的藥理性質備受關注[3]，許多體內和體外研究都表明茶多酚在預防癌癥，治療慢性胃炎、神經退化和心血管疾病中具有重要作用[4]。

我國茶園種植面積居世界首位，茶資源豐富，利用碎末茶、中低檔茶與夏秋茶提取茶多酚的工藝非常成熟[2]。

本文對茶葉主產區浙江省多個產地的茶葉質量進行分析，以表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量為指標進行考察研究，為企業選擇生產原料提供依據。

隨著茶多酚應用的開發，其分析方法也不斷得到提高和完善，用于測定茶多酚含量的方法有光譜法、電化學法、滴定法、色譜法等[5]。非色譜法只能測定茶多酚總量，而色譜法具有專屬性強、靈敏度高等優點，可以用于茶多酚單一成分的測定，其中常用的有高效液相色譜法、氣相色譜法、質譜法等等[6]。本研究采用高效液相色譜法進行茶多酚含量的測定。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

茶葉樣品（共收集14批不同產地的茶葉原料）：杭州市徑山鎮（編號1、2、3、4）、紹興市新昌縣（編號5、6、7）、金華市磐安縣（編號8、9、10、11）、東陽市東白山（編號12、13、14）。

對照品：表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf），購于中國食品藥品檢定研究院。

試劑：乙腈（色譜級），購于美國TEDIA公司；磷酸（色譜級）、甲酸（分析純），購于阿拉丁生化科技有限公司；水（純凈水），購于杭州娃哈哈集團；氫氧化鈣（分析純），購于GENERAL-REAGENT。

1.2 儀器與設備

Agilent1260高效液相色譜儀，VWD檢測器（安捷倫科技有限公司）；METTLER TOEDO ME204E（萬分之一）、METTLER TOEDO XS105（十萬分之一）分析天平（梅特勒股份有限公司）；恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）；超聲清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件[7]

色譜柱為Agilent SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）加保護柱；流速：1.0 m L/m in；進樣量：20 μL；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-0.2%磷酸溶液（10∶90）為流動相A，乙腈-0.2%磷酸溶液（80∶20）為流動相B，按照0～10m in時A為100%，10～30m in時A從100%到90%，30～50 min時A從90%到100%，50～60m in時A為100%進行梯度洗脫。

1.3.2 對照品溶液的制備

取表兒茶素（EC）對照品、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）對照品、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）對照品、咖啡因（Caf）對照品和沒食子酸（GA）對照品適量，精密稱定，分別加25%甲醇制成每lm L含表兒茶素68μg、表兒茶素沒食子酸酯0.14mg、表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.85mg、咖啡因14μg、沒食子酸20μg的溶液，即得。

1.3.3 供試品溶液的制備[8]

將各批次樣品粉碎成中粉，稱取約2.0 g，精密稱定，置于1 L燒杯中，加入新煮沸的純凈水400m L，在95℃熱水水浴鍋中保溫10m in，每隔30 s攪拌1次；溫浸結束后冷卻至室溫，過濾到500m L容量瓶中，并用少量純凈水洗滌燒杯和樣品殘渣2～3次，合并濾液；在量瓶中加入甲酸0.5m L，再加水定容至刻度，搖勻；用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2 結果與分析

2.1 線性范圍考察

精密稱取一定量對照品，加甲醇溶解，配置成一系列梯度濃度，按“1.3.1”項下色譜條件分析，得到茶葉相關對照品混標圖譜，如圖1所示。分別以各組分的濃度（μg/m L）為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線，得到5種組分的線性回歸方程和相關系數，結果如表1所示。

圖1 茶葉相關對照品混標圖譜

表1 各組分線性回歸方程及相關系數（n=6）

從圖1、表1可知，茶葉各組分在相應濃度范圍內呈良好的線性關系。

2.2 精密度實驗

取對照品混標溶液，連續進樣6次，每次20μL，分別得到表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf）峰面積的RSD分別為1.14%、0.30%、0.22%、0.87%、0.46%，表明儀器精密度良好。

2.3 穩定性實驗

取新制備的杭州市徑山鎮1號茶葉樣品溶液，每隔一段時間進樣分析1次，進樣量20μL。結果顯示，在樣品溶液制備好后的14 h內，表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf）峰面積的RSD分別為1.42%、0.69%、1.52%、0.74%、0.81%，供試品溶液在14 h內穩定，符合相關規定。

2.4 重現性實驗

取干燥的杭州市徑山鎮1號茶葉樣品，按“1.3.3”項下方法平行制備5份樣品，進樣量20μL，依據所獲得的峰面積求得各組分在茶葉樣品中的含量。結果顯示，在5份樣品溶液中，表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf）含量的RSD分別為1.77%、1.65%、1.82%、1.61%、0.97%，表明該方法重復性良好。

2.5 加樣回收率實驗

取茶葉樣品（杭州市徑山鎮1號，EGCG含量3.84%）適量，精密稱取1.0 g，稱取6份，以樣品EGCG含量∶對照品EGCG含量=1∶1加入對照品，按“1.3.3”項下方法處理樣品，按“1.3.1”項下色譜條件檢測。結果顯示，EGCG的加樣回收率分別為101.965%、97.911%、103.288%、102.075%、101.494%、102.982%，平均值為101.619%，RSD為1.90%，表明該方法回收率良好，符合相關規定。

2.6 不同產地茶葉樣品含量測定

每個產地隨機選取多份樣品，所有茶葉樣品按“1.3.3”項下方法平行制備3份，用“1.3.1”項下色譜條件分析，進樣量20μL（可根據具體含量情況進行調整）。

將獲得的各組分峰面積值代入“2.1”項下相應的回歸方程中，求取各樣品溶液的濃度，計算各組分在茶葉樣品中的含量，結果如表2所示。圖2～圖6為不同產地茶葉中不同組分含量比較。

3 結語

本研究通過方法學驗證，證明了該含量測定方法簡便可行，樣品制備方法簡便，提取充分[7、9]，可用于茶葉原料中表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量檢測。研究結果表明：不同產地之間除沒食子酸（GA）含量差別不顯著外，其余含量存在顯著差異。其中，茶葉中表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）的含量與產地及加工密切相關，同一產區不同采收批次之間存在顯著差異，不同產地茶葉中表兒茶素（EC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量區間分別為0.57%～0.85%、0.13%～1.78%、0.51%～7.04%、0.15%～0.31%、1.63%～3.37%。

我國作為茶樹栽培及茶葉加工的發源地，茶葉分布較廣，茶葉大部分經加工后用于泡茶飲用，是一種世界性飲料[10]。我國出現了如綠茶、紅茶、烏龍茶、特種茶等聞名世界的茶品。與此同時，茶葉也被深加工為茶葉提取物，用作藥品和膳食補充劑的原料[11]。本研究通過對浙江省四個主要茶葉產地不同批次間的茶葉主要成分含量進行比較分析，以期為茶葉人工培育和GAP基地建設提供依據，同時為企業的茶葉提取物制備提供原料篩選方法。

表2 不同產地茶葉樣品中主要成分含量（n=3）

圖2 不同產地茶葉中EC含量比較

圖3 不同產地茶葉中ECG含量比較

圖4 不同產地茶葉中EGCG含量比較

圖5 不同產地茶葉中GA含量比較

圖6 不同產地茶葉中Caf含量比較