miR-182、信號傳導和轉錄激活因子3、基質金屬蛋白酶-7與食管癌老年患者臨床病理及預后的關系

王巖峰 鄭玉環

(大慶油田總醫院病理科，黑龍江 大慶 163001)

食管癌為食管腺上皮或者鱗狀上皮的惡性病變，多發生于老年人群，其進展較為緩慢，早期診治者治愈率高，但發病較隱匿，早期癥狀不明顯，臨床病理為老年食管癌患者預后評估的主要方式，目前臨床上缺乏對食管癌高危人群篩選、早期診斷及預后評估的典型標志物〔1〕。細胞癌變屬多因素、多階段過程，與系列基因突變有著良好的相關性〔2〕。微小RNA(miR)-182具有高度的組織及腫瘤特異性，且穩定性高，可調控基因轉錄，參與腫瘤發生發展，為潛在調控靶點。信號傳導和轉錄激活因子(STAT)3作為一種原癌基因，可起到信號傳導和轉錄作用，從而調控細胞生長、分化及侵襲轉移等〔3〕。同時基質金屬蛋白酶(MMPs)降解能夠導致腫瘤發生侵襲與轉移，MMP-7為其主要類型之一，可降解多種細胞外基質〔4〕。多個研究證實〔5,6〕，miR-182、STAT3、MMP-7于多種腫瘤組織中高度表達，并指出其異常表達可能和患者臨床病理和預后相關。本研究旨在探討miR-182、STAT3、MMP-7于食管癌發生中的機制，并分析其和臨床病理與預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 大慶油田總醫院2014年1月至2015年6月67例老年食管癌患者，納入標準〔7〕：均經病理組織活檢證實為食管癌；年齡≥60歲。排除標準：接受新輔助放化療；全身系統明顯病變。年齡60～79歲，平均(72.14±5.32)歲；腫瘤直徑大小2～8 cm，平均(4.33±1.02)cm。

1.2方法 ①標本收集：手術收集癌與癌旁組織，放置于液氮中并轉移至-80℃低溫箱待用。②miR-182測定：將凍存的食管細胞珠復蘇后常規傳代培養，于6孔板中接種，待細胞豐度至90%時停止培養。取磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，加入miR提取試劑盒中裂解液，采集細胞，并置于-80℃低溫箱中待用。取食管組織標本，進行固化、研碎，并加入miR提取試劑盒中裂解液。取分光光度計測定miR濃度和質量。反轉錄后，加入miR-182，放置于熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)儀中實施PCR擴增。并按2-△△Ct法計算miR-182相對表達量。③STAT3、MMP-7測定：選用免疫組織化學染色法進行，將標本組織制作為蠟塊并切片，脫蠟至水，并常規切片。經二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化，取3%過氧化氫溶液將內源性過氧化氫酶滅活。微波抗原修復，取正常養血清進行非特異性抗原封閉。再予以復染、脫水、透明并封片。在光學顯微鏡下觀察，選擇圖像分析系統拍片。選擇MIAS2000圖像分析系統處STAT3及MMP-7陽性區域平均光密度值，并以此代表陽性產物表達；STAT3于細胞核或者細胞質中陽性表達，且表現為棕黃色顆粒樣物質。MMP-7于細胞質內陽性表達，且表現為棕黃色顆粒樣物質〔8〕。

1.3統計學方法 采用SPPS18.0統計軟件進行χ2檢驗，Spearman等級相關分析，Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Cox回歸模型實施多因素影響分析。

2 結 果

2.1miR-182、STAT3、MMP-7于食管癌組織與癌旁組織中表達 miR-182于食管癌組織與癌旁組織高表達率分別為52.24%(35/67)和14.93%(10/67)，STAT3分別為64.18%(43/67)和17.91%(12/67)，MMP-7分別為55.22%(37/67)和16.42%(11/67)，三者癌組織高表達率均顯著高于癌旁組織(P<0.05)。

2.2miR-182、STAT3、MMP-7與食管癌老年患者臨床病理關系 miR-182、STAT3、MMP-7高表達與食管癌老年患者性別、年齡、腫瘤直徑無關(P>0.05)；miR-182、STAT3、MMP-7高表達與食管癌分化程度、T分期、淋巴結轉移及臨床分期有關(P<0.05)，見表1。

表1 miR-182、STAT3、MMP-7高表達與食管癌老年患者臨床病理的關系〔n(%)〕

2.3食管癌腫瘤組織中miR-182、STAT3、MMP-7表達相關性 67例食管癌中，miR-182、STAT3、MMP-7均為陽性表達者32例，均為陰性表達20例，miR-182、STAT3、MMP-7均呈正相關(P<0.05，miR-182與STAT3r=0.421，miR-182與MMP-7r=0.560，STAT3與MMP-7r=0.409)。

2.4miR-182、STAT3、MMP-7表達和食管癌患者預后聯系 miR-182高表達者和低表達者2年生存率分別為(19/35)和(25/32)，STAT3分別為(23/43)和(19/24)，MMP-7分別為(17/37)和(24/30)，miR-182、STAT3、MMP-7高表達者2年生存率均分別顯著低于低表達者(P<0.05)，見圖1。Cox比例風險顯示，分化程度、T分期、臨床分期和食管癌患者預后無關，淋巴結轉移、miR-182、STAT3、MMP-7高表達為食管癌患者預后獨立危險因素。見表2。

圖1 食管癌患者不同miR-182、STAT3、MMP-7表達的生存分析

因素BSBWaldχ2值P值OR95%CI分化程度0.5710.3822.2340.1381.7730.820～3.776T分期0.6870.3623.6010.0722.0100.984～4.130淋巴結轉移0.8310.3754.9110.0242.3411.020～4.873臨床分期0.1650.4080.1640.6731.1860.539～0.268miR-1820.7780.3624.6190.0282.1101.084～4.321STAT30.6420.4402.1290.0193.1211.248～8.761MMP-70.7090.3414.2250.0322.0850.874～3.720

3 討 論

盡管目前多個臨床病理學特征能夠一定程度地評估預后，但由于個體及腫瘤差異無法準確預測腫瘤預后〔9，10〕。近年來，隨著臨床對細胞癌變機制的不斷認識，發現部分分子標記物能夠于腫瘤發生發展及預后評估中起重要作用〔11〕。既往研究已證實〔12〕基因異常表達是腫瘤發生的主要機制，miR可通過誘導特異性基因沉默，引起靶mRNA降解并影響蛋白質合成，轉錄后可負性調節基因表達，起到抑癌基因或癌基因作用，為基因表達的新型調控因子。目前miR在食管癌中表達備受臨床關注，多種miR可異常表達，其中miR-203及miR-375下調能夠避免促進腫瘤細胞凋亡，降低腫瘤分期；miR-106b及miR-192等明顯上調，能夠導致腫瘤細胞增殖與轉移〔13，14〕。魯之中等〔15〕研究表明，食管癌組織中miR-182表達明顯高于癌旁組織，并指出其可于食管癌發病中發揮癌基因作用，和本結果研究相似。本研究說明miR-182可能調控食管癌發生發展，是影響食管癌患者預后的獨立危險因素，可作為預后判斷的觀察指標。

細胞信號傳導障礙能夠影響細胞正常生長、分化及代謝，導致腫瘤發生。STAT3通路可于細胞周期調控和凋亡中起到重要作用，機體正常狀態下其激活相對快速且短暫，從而維持正常細胞生理功能〔16〕。其調控異常可持續性激活，刺激相關基因異常表達，并經多種途徑導致細胞發生增殖及惡性轉化，引起免疫逃逸，并發揮致癌作用。研究證實〔17，18〕，STAT3可于乳腺癌、結直腸癌等實體腫瘤組織中持續激活，促進腫瘤細胞形成并抑制其凋亡。本文結果和臨床研究報道〔19〕相似，提示其可一定程度反映食管癌的分化程度與侵襲轉移等惡性特征。

目前認為腫瘤侵襲轉移為多步驟的復雜過程，其中細胞外基質與基底膜降解為其中心環節，臨床研究證實〔20〕，MMPs能夠通過降解相關蛋白質，引起腫瘤侵襲及轉移，且可誘導血管新生，加劇腫瘤形成。MMP-7作為其重要成員，對細胞基質有廣泛降解作用，且可刺激其他MMPs表達。相關研究報道〔21〕，MMP-7主要于食管癌細胞質和細胞膜中表達，且呈異質性表達，本研究也支持此觀點。本研究提示MMP-7高表達能夠促進腫瘤進展，并可反映腫瘤病理體征，一定程度預測腫瘤惡性程度，與Ishikawa等〔22〕研究報道結果相似。本研究結果顯示，食管癌miR-182、STAT3及MMP-7之間表達呈正相關，可能與其存在共同通路，或者可于共同刺激因素下激活，有待研究證實。