淫羊藿提取工藝優(yōu)化研究

張建博 王合群 郭捷 李小磊 賈保險

摘 要：作為保健食品原料，淫羊藿具有補腎益精、強壯筋骨等功效，應用醇提法提取的淫羊藿苷是重要的功效成分。本文通過正交實驗設計，考察淫羊藿中淫羊藿苷的最佳提取工藝，確定最佳的醇提工藝參數(shù)為乙醇體積分數(shù)為50%，料液比為1∶10，提取時間為2h，提取溫度為60℃，提取次數(shù)為2次。將按照最優(yōu)工藝提取出的淫羊藿苷與淫羊藿苷標準品做薄層色譜對照，條帶清晰可辨，可以用于淫羊藿保健食品功效成分的快速檢測。

關(guān)鍵詞：淫羊藿苷；醇提法；正交實驗；液相色譜；薄層色譜

中圖分類號：TQ461 文獻標識碼：A 文章編號：1003-5168（2018）17-0150-03

Study on the Optimization of Extraction Process of Epimedium

ZHANG Jianbo WANG Hequn GUO Jie LI Xiaolei JIA Baoxian

Abstract： As a raw material for health food， Epimedium has the functions of tonifying kidney and essence， strengthening bones and muscles， and so on. In this paper， the optimum extraction process of icariin in Epimedium was investigated by orthogonal design. The optimum extraction process parameters of Epimedium were as follows： the ethanol volume fraction was 50%， the ratio of material to liquid was 1∶10， the extraction time was 2 hours， the extraction temperature was 60℃， and the extraction times were two times. The extraction of icariin according to the optimal process was clear and distinguishable by TLC compared with icariin standard. It could be used for rapid detection of the efficacy components of Epimedium.

Keywords： icariin；ethanol extraction；orthogonal test；liquid chromatography；TLC

當今社會，人們的生活水平不斷提高，大家對自身健康的重視程度也日益增強。西方醫(yī)藥雖然具有見效快、成分明確的優(yōu)點，但伴隨的往往是藥效持久性差和副作用。因此，傳統(tǒng)祖國醫(yī)學、中西醫(yī)結(jié)合的理論越來越受到廣大群眾的認可和歡迎。一些藥食同源、食藥兩用的功能性植物也受到大家的廣泛關(guān)注，分離植物含有的活性化合物，確認其保健功能，并將其進一步開發(fā)成具有中醫(yī)藥特色的功能性食品，是目前食品和保健食品科學的一個重要研究方向。

淫羊藿作為一種功能性的保健食品原料，富含有蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮類化合物、多糖、生物堿、木脂素和微量元素等多種營養(yǎng)成分和活性物質(zhì)，味辛甘性溫，走肝腎二經(jīng)，為補命門、益精氣、強筋骨、補腎壯陽之藥[1]。其中，淫羊藿所含的淫羊藿苷是主要的功效成分，具有增強機體免疫功能、加強性腺分泌、促進骨細胞生長、抗衰老和促進內(nèi)分泌機能等作用[2]。因此，淫羊藿苷的提取和在保健食品、功能食品中的組方應用成為近年來研究的熱點。

本文通過正交實驗設計，考查淫羊藿中淫羊藿苷的最佳提取工藝，從而指導生產(chǎn)應用，提高提取效率并節(jié)約成本。考查工藝參數(shù)為乙醇體積分數(shù)、料液比、提取時間、提取溫度和提取次數(shù)。

1 實驗儀器和試劑

實驗儀器為液相色譜儀、恒溫電爐、圓底燒瓶、冷凝管、超聲波清洗機、三角瓶、容量瓶、量筒和移液管。試劑為95%乙醇、無水乙醇（分析純）、乙腈和超純水。

2 實驗材料

淫羊藿葉購自貴州，產(chǎn)地為貴州黔南；淫羊藿苷對照品由中國藥品生物制品檢定所出品。

3 實驗方法

3.1 單因素實驗

3.1.1 實驗（一）。研究不同的乙醇體積分數(shù)（40%、50%、60%和70%）對淫羊藿苷提取率的影響，對比醇提法和水提法的提取率[3]。料液比（質(zhì)量體積比）為1∶20，提取時間為1h，提取溫度為60℃，提取次數(shù)為1次。

實驗結(jié)果表明（見圖1），乙醇體積分數(shù)為50%，淫羊藿苷的提取率最高，乙醇體積分數(shù)大于60%，淫羊藿苷的提取率反而降低。這主要是因為乙醇體積分數(shù)不同，對淫羊藿中淫羊藿苷化合物的溶出率差別較大，隨著乙醇體積分數(shù)的升高，一些脂溶性物質(zhì)溶出增加，反而會影響淫羊藿苷的浸出，所以選用5O%乙醇為最佳溶劑。

同時對比水提法，水提淫羊藿苷含量僅為5O%醇提的21.2%。可見，醇提工藝明顯優(yōu)于水提工藝。

3.1.2 實驗（二）。研究不同料液比（1∶5、1∶10、1∶20、1∶30，質(zhì)量體積比）對淫羊藿苷提取率的影響。乙醇體積分數(shù)為50%，提取時間為1h，提取溫度為60℃，提取次數(shù)為1次。

實驗結(jié)果表明（見圖2），料液比為1∶20時，淫羊藿苷提取率最高，但與料液比1∶10相比提取率相差不大，而增加醇提液即乙醇的用量會相應增加提取和回收成本，因此考慮經(jīng)濟性因素，生產(chǎn)上采用料液比1∶10為最佳。

3.1.3 實驗（三）。研究不同的提取時間（1、2h和3h）對淫羊藿苷提取率的影響。乙醇體積分數(shù)為50%，料液比為1∶10，提取溫度為60℃，提取次數(shù)為1次。

實驗結(jié)果表明（見表3），提取時間達到2h后，淫羊藿苷提取率趨于穩(wěn)定，2h與3h的差別不大，出于經(jīng)濟性考慮，采用2h的提取時間即可[4]。

3.1.4 實驗（四）。研究不同的提取溫度（50、60℃和70℃）對淫羊藿苷提取率的影響。乙醇體積分數(shù)為50%，料液比為1∶10，提取時間為2h，提取次數(shù)為1次。

實驗結(jié)果表明（見圖4），提取溫度為50℃時，因溫度偏低提取不徹底，提取率較低，提取溫度為60℃時，提取率較高，但提取溫度達到70℃時提取率下降，主要是因為溫度較高會對淫羊藿苷造成分解破壞。所以最合適的提取溫度是60℃。

3.1.5 實驗（五）。研究提取次數(shù)（1、2、3次和4次）對淫羊藿苷提取率的影響。乙醇體積分數(shù)為50%，料液比為1∶10，提取時間為2h，提取溫度為60℃。

實驗結(jié)果表明（見圖5），隨著提取次數(shù)的增多，提取率不斷提高，但提取次數(shù)增多會增加時間投入，加大提取成本，綜合考慮，生產(chǎn)采用提取2次的工藝。

3.2 正交試驗

根據(jù)單因素實驗結(jié)果，設計L15（35）正交試驗[5]，因素與水平如表1所示。

影響因素大小為提取時間>提取次數(shù)>乙醇體積分數(shù)>提取溫度>料液比。綜合考慮提取效率和提取成本，最佳的提取工藝為A1B1C2D2E2，乙醇體積分數(shù)為50%，料液比為1∶10，提取時間為2h，提取溫度為60℃，提取次數(shù)為2次。

3.3 薄層色譜分析

按照最優(yōu)工藝提取出的淫羊藿苷與淫羊藿苷標準品做薄層色譜對照，分別用甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，吸取溶液各10μL，點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水（10∶1∶1∶1）為展開劑，展開后取出晾干，然后噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視[6]，顯出相同的橙色熒光斑點。結(jié)果見圖6。

如圖6所示，醇提法獲得的淫羊藿苷純度、濃度均較高，可以用于淫羊藿保健食品功效成分的快速檢測[7]。

4 結(jié)論

通過實驗可以得出：醇提法明顯高于水提法的提取率，最佳工藝為乙醇體積分數(shù)50%，料液比1∶10，提取時間為2h，提取溫度為60℃，提取次數(shù)2次。按照最優(yōu)工藝提取出的淫羊藿苷純度較高，通過與淫羊藿苷標準品做薄層色譜對照，條帶清晰。該方法獲得的淫羊藿苷提取物用于保健食品，既可以控制生產(chǎn)成本，產(chǎn)生較好的經(jīng)濟效益，還可以保證功效成分用量充足，同時在食品抽樣檢測時可以順利通過成分鑒別。

參考文獻：

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中國藥典[M].2015版.廣州：廣東科技出版社，2015.

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[4]李冬雪，杜守穎.淫羊藿提取濃縮干燥過程中的淫羊藿苷含量變化[J].河北中醫(yī)，2011 （4）：587-588.

[5]胡道德，顧磊，姚慧娟.均勻設計法優(yōu)化淫羊藿中淫羊藿苷提取工藝的研究[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2009（10）：799-802.

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[7]賀石麟，牛景霞，倪艷.淫羊藿中淫羊藿苷和總黃酮的閃式提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志，2011（8）：38-40.