HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量的測量不確定度評定

孫立乾

【摘要】目的：對HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量的測量不確定度進行分析和評定。方法：取適量頭孢氨芐制成溶液，將其作為本次研究對照品；與此同時，取適量頭孢氨芐膠囊（巢湖中辰藥業有限公司，國藥準字：H34021123）制成溶液，將其作為本次研究觀察品。樣本制備完成后，建立HPLC法測定數學模型，根據數學模型尋找影響不確定度的因素并對相關不確定度分量進行評定。結果：通過對各分量的相對標準不確定度進行分析后可以得出，HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量的合成不確定度以及擴展不確定度（P=95%，K=2）。結論：本次研究所建立的不確定度計算方法在測定HPLC法判斷頭孢氨芐膠囊含量的不確定度的效果方面有較高使用價值，值得推廣。

【關鍵詞】HPLC法；頭孢氨芐膠囊；不確定度；評定

[中圖分類號]R1 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2018）02-131-02

頭孢氨芐膠囊屬于抗生素復方制劑的一種，常被臨床用于耐青霉素的葡萄球菌、鏈球菌等感染的治療[1]。在對頭孢氨節膠囊的質量和臨床治療效果進行評價時，對其含量的測定是前提和關鍵，大量研究叼證實，頭孢氨芐膠囊含量測定準確性的高低，不僅將直接影響到藥品質量的評定，同時還將直接關系到患者用藥安全性的高低。基于此，本文以相關文獻為參考，對HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量過程中的相關不確定因素進行了分析和合成，以評定其含量的不確定度。現報告如下。

1 方法

制備對照品溶液：將適量（24-25mg）的頭孢氨芐（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：1300408-200209，純度：94.2%）放置在容量為25mL的量瓶中，靜置片刻后，將適量流動相（水-3.86%醋酸鈉溶液一甲醇一4%醋酸溶液，比例分別為742：15：240：3）加入量瓶之中，然后對量瓶內液體進行超聲處理，時長控制在5-8min之間，至液體溶解且全部混合均勻即可；將溶解完成的量瓶于室溫內放置保存，與此同時，在其中加入適量流動相至液體稀釋至刻度，搖勻；從量瓶中精密量取10mL溶液至容量為50mL的量瓶之中，繼續加入適量流動相稀釋至刻度，搖勻，制備完成。

制備觀察品溶液：取20粒頭孢氨芐膠囊（巢湖中辰藥業有限公司，國藥準字：H34021123，規格：0.125g），將膠囊研磨成細粉，精密稱取適量（110-125mg）置入容量為100mL的量瓶中，在其中加入適量流動相并對其進行超聲處理，處理時長控制在5-8min之間，至量瓶內物質全部溶解即可；將溶解完成的量瓶于室溫內保存，放置片刻后，再在其中加入適量流動相，將量瓶內液體稀釋至刻度，搖勻，濾過；與量瓶內精密量取10mL液體并將其放于50mL的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制備完成。

樣品制備完成后，對其進行測定，選擇LC-10Atvp型高效液相色譜儀（日本島津）、AB135-S電子天平、SPD-10Atvp型紫外檢測器；試劑方面，除甲醇為色譜純以外，其他試劑均為分析純；此外，檢測流速為：1.0ml/min，檢測波長為254nm，進樣量為20ml。

精密吸取20ml對照品溶液和20ml觀察組品溶液，將其分別注入液相色譜儀之中，然后按照相關操作說明進行測定。然后按照以下公式對觀察品和對照品的頭孢氨芐含量進行測

式中：Y=測得的氨芐膠囊標示百百分含量；A樣=供試品峰面積，A對=對照品峰面積，w對=對照品重量（mg）；W樣：觀察品重量（mg）；W樣：觀察品平均裝量（mg）；f對：對照品稀釋倍數（ML）；f樣=觀察品稀釋倍數（mL）；標示量=0.125g。

2 結果

2.1 不確定度分析

首先，稱量的相對標準不確定度。天平稱量重復性不確定度，本次研究所用電子天平（d=0.01mg）的鑒定證書所允許的重復性誤差為±0.02mg，按矩形分布，可用以下公式進行表示，即：

W=0.02/√3=0.08±10-2mg

其次，在純度的標準不確定度方面，本次研究的對照組品屬于B類不確定度，其純度為94.2%由于現階段尚無其他的關于樣品不確定度的說明，因此假定其分散區間的半寬度0.25%，按均勻分布換算，設定u（s）=0.25%/√3=0.14%，此時，樣品的相對標準不確定度為：

最后，在稀釋引起的相對標準不確定度方面，在對對照品和觀察品進行配置的過程之中，使用到了2個10mL級別為A級的單標移液管以及2個25mL級別為A級的量瓶和2個50mL級別為A級的量瓶。通過計算，有上述裝備和配置引起的相對標準不確定度，可用以下公式進行表示：

2.2 各相對標準不確定度分布情況

通過對各相對標準不確定度的分布情況進行統計后，可以得到下圖（圖1）。

3 討論

頭孢氮節膠囊屬于抗生素類復方制劑的一種，相關資料中，在對頭孢氨芐膠囊進行含量測定時，其設置的檢測波長為235nm，選擇的流動相為0.02mol·L-1磷酸溶液（用20%氫氧化鈉調節pH值至3.0±0.05）-乙腈（88：12）。但近年來，隨著臨床研究的不斷深入，越來越多的實踐結果顯示，該測定方法在測試頭孢氨芐膠囊頭孢氨芐含量時存在較多問題，在液相色譜儀記錄的色譜圖中，頭孢氨芐與甲氧芐啶兩種成份的峰形較差，最終檢測結果的重復性和準確性與實際情況有著較大出入[4-5]。

鑒于此，本文對HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量的測量不確定度采用了全新公式進行評定，研究數據顯示，頭孢氨芐膠囊含量測定的擴展不確定度為1.8%，研究結果證實了該公式測定HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量的測量不確定度的有效性，其結果的分散程度符合HPLC法對準確度的要求，有著較高的準確性與可靠性。此外，筆者認為為進一步提升HPLC法測量頭孢氨芐膠囊含量的精準度，在使用外標法時，可酌情增加測定次數并選擇定容體積較大的樣品、適當增加對照品取樣量，以有效減小各步驟的不確定度分量，提高測定結果的準確性和可信度。

參考文獻：

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