半夏與虎掌南星、天南星的鑒別研究

黃雍 劉夢(mèng)嬌 張琴 張?jiān)Ｃ? 張志國(guó) 楊磊

〔摘要〕 目的 探索半夏與虎掌南星、天南星的鑒別特征，確保臨床用藥安全有效。方法 采用性狀鑒別、薄層定性鑒別以及HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究。結(jié)果 半夏呈類球形，偶有1～2個(gè)小側(cè)芽，無(wú)序著生；虎掌南星呈扁半圓形，側(cè)芽數(shù)量1至多個(gè)，且與主塊莖多在一個(gè)平面，排列有規(guī)律，形如虎掌；天南星呈扁球形，少有側(cè)芽；薄層鑒別結(jié)果顯示三者在Rf值0.05、0.23和0.99處顯相同顏色斑點(diǎn)，虎掌南星在Rf值0.91左右處的斑點(diǎn)隨著側(cè)芽數(shù)量的增多，逐漸趨向天南星，與半夏存在一定差別；指紋圖譜結(jié)果顯示虎掌南星在20.38 min和55.79 min處比半夏新增2個(gè)峰，與半夏指紋圖譜相似度在0.88左右，天南星在6.663 min、20.858 min、42.412 min和63.287 min處比半夏新增4個(gè)峰，與半夏指紋圖譜相似度為0.697。結(jié)論 半夏、虎掌南星、天南星在性狀鑒別、薄層鑒別、指紋圖譜鑒別均存在較大差別，其變異品種也存在差異，建議臨床區(qū)別應(yīng)用。

〔關(guān)鍵詞〕 半夏；虎掌南星；天南星；性狀鑒別；TLC；HPLC

〔中圖分類號(hào)〕R285.5 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.04.010

〔Abstract〕 Objective To explore the identification characteristics of Pinelliae Rhizoma （Banxia）， Pedate Pinellia Rhizoma （Huzhangnanxing） and Arisaematis Rhizoma （Tiannanxing）， and ensure safe and efficacy of clinical use. Methods This three kinds medicines were identified by using character identification， thin layer qualitative identification and HPLC fingerprints. Results Banxia was spherical， with occasionally one to two small buds， growing disorded. Huzhangnanxing was flat semi-circular， with one to more lateral buds， and with the main tuber in a plane， arranged in a regular， shaped like a tiger palm. Tiannanxing was flat spherical with few lateral buds. The TLC of this three medicines showed same spots at Rf values of 0.05， 0.23 and 0.99. With the increase of lateral buds， the spot of Huzhangnanxing at Rf 0.91 gradually tend to Tiannanxing， and was different with Banxia. The fingerprint of Huzhangnanxing showed two new peaks at 20.38 min and 55.79 min compared with Banxia， their similarity was 0.88. Tiannanxing added 4 peaks at 6.663 min， 20.858 min， 42.412 min and 63.287 min than Banxia. And the similarity of fingerprint of Tiannanxing and Banxia was 0.697. Conclusion The morphological identification， thin layer identification and fingerprint identification of Banxia， Huzhangnanxing， Tiannanxing are significantly different， and their variants also have some differences. So it is suggested that clinical application should be different.

〔Keywords〕 Pinelliae Rhizoma； Pedate Pinellia Rhizoma； Arisaematis Rhizoma； character identification； TLC； HPLC

半夏來(lái)源于天南星科半夏Pinellia ternate （Thunb.）Berit.的塊莖，性溫、味辛、有毒，具有燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結(jié)的功效[1]。

虎掌南星來(lái)源于天南星科半夏屬掌葉半夏Pinellia pedatisecta Schott.的塊莖，性溫，味苦、辛，有小毒，具有降逆止嘔，燥濕化痰，消痞散結(jié)等功效[2-3]。天南星來(lái)源于天南星科天南星屬天南星Arisaema erubescens（Wall.）Schott、異葉天南星Arisaema heterophyllum BL.或東北天南星Arisaema amurense Maxim.的塊莖，性溫，味苦、辛，有毒，具有消腫散結(jié)的功效[1]。近年來(lái)，半夏臨床需求較大，野生資源日益枯竭，更由于環(huán)境因素的影響，半夏屬植物形態(tài)變異豐富[4]，部分人工栽培品生有不規(guī)則小側(cè)芽，個(gè)體細(xì)小的虎掌南星外型與之極為相似，常誤做半夏用，從而影響半夏質(zhì)量及臨床用藥安全。本實(shí)驗(yàn)采用性狀鑒別、薄層定性鑒別以及HPLC指紋圖譜研究對(duì)半夏、虎掌南星、天南星以及臨床收集的一些疑似品種進(jìn)行鑒別，以期為三者鑒別方法的建立提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為臨床用藥安全提供保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津），AL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），HX-06型超聲清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司），HY-SY4型水浴鍋（長(zhǎng)沙匯一儀器有限公司）。

1.2 試藥

乙腈（色譜純，ACE），乙醇（安徽安特生物化學(xué)有限公司），硫酸（衡陽(yáng)市凱信化工試劑有限公司），石油醚（天津市恒興化學(xué)制造有限公司），乙酸乙酯（天津市大茂化學(xué)試劑廠），丙酮（衡陽(yáng)市凱信化工試劑有限公司），甲酸（成都市科龍化工試劑廠），甲醇、磷酸（湖南匯虹試劑有限公司），以上試劑均為分析純，水為娃哈哈純凈水。半夏對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（121272-200401），1～8號(hào)供試品按外觀側(cè)芽數(shù)量由無(wú)到多排列（見(jiàn)圖1）。經(jīng)湖南省藥品檢驗(yàn)研究院方石林教授鑒定1號(hào)為半夏，4～6號(hào)為虎掌南星，8號(hào)為天南星，2、3、7號(hào)為臨床上遇到但無(wú)法確定品種的藥材。40 ℃低溫干燥后粉碎過(guò)80目篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

采用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別方法對(duì)半夏，虎掌南星和天南星的性狀、直徑、表面、顏色、質(zhì)地、斷面、氣味等特征進(jìn)行觀察和比較。見(jiàn)表1。

2.2 薄層定性鑒別

2.2.1 對(duì)照藥材溶液的制備 取半夏對(duì)照藥材粉末1 g，加乙醇10 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5 mL即可。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取1～8號(hào)供試品粉末1 g，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。

2.2.3 色譜條件與方法 吸取對(duì)照藥材溶液及1～8號(hào)供試品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（30∶6∶4∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[1]。見(jiàn)圖2。

2.3 HPLC指紋圖譜研究

2.3.1 色譜條件 色譜柱Sepax C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫：0～55 min 5%～55%A，55～70 min 55%～65%A，70～80 min 65%～80%A，80～90 min 80%～90%A。檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫26 ℃。

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取半夏對(duì)照藥材溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，RSD分別為1.70%、2.30%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取半夏對(duì)照藥材溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于室溫下0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，計(jì)算24 h內(nèi)各色譜峰相對(duì)峰面積，RSD 1.40%，表明樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取半夏對(duì)照藥材約1 g，精密稱定，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試液，平行6份，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算各色譜峰相對(duì)峰面積，RSD 1.69%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5 指紋圖譜的建立 精密吸取半夏對(duì)照藥材溶液及各供試品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。見(jiàn)圖3。

2.3.6 指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，以半夏對(duì)照藥材為參照?qǐng)D譜計(jì)算相似度。見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 性狀鑒別

半夏部分栽培品長(zhǎng)有少數(shù)不規(guī)則小側(cè)芽，易與較為細(xì)小的虎掌南星混淆，經(jīng)查閱大量文獻(xiàn)和實(shí)物考證，歸納出兩者主要鑒別點(diǎn)：半夏呈類球形，質(zhì)地呈粉性，在莖痕周圍，半夏密布的根痕為明顯的凹點(diǎn)狀，偶有1～2個(gè)小側(cè)芽，無(wú)序著生，常不在一個(gè)平面。虎掌南星呈扁半圓形，由主塊莖及多數(shù)附著的小塊莖組成，每一塊莖中心都有一莖痕，側(cè)芽數(shù)量1至多個(gè)，且與主塊莖多在一個(gè)平面，排列有規(guī)律，形如虎掌。天南星呈扁球形，少有側(cè)芽，無(wú)序著生。因此，性狀鑒別著重觀察側(cè)芽的數(shù)量和著生方式，可作為半夏、虎掌南星、天南星鑒定和質(zhì)量控制的依據(jù)之一。

3.2 薄層定性鑒別

薄層定性鑒別結(jié)果顯示半夏、虎掌南星、天南星在Rf值0.05，0.23和0.99處顯相同顏色斑點(diǎn)，虎掌南星在Rf值0.91左右處的斑點(diǎn)隨著側(cè)芽數(shù)量的增多，逐漸下移并趨向天南星，與半夏存在一定差別，但差別不明顯，尚不能作為區(qū)分三者的鑒別方法。

3.3 HPLC指紋圖譜鑒別

本實(shí)驗(yàn)在指紋圖譜建立時(shí)，分別考察了Generall C18AQ（250 mm×4.6 mm，5 um）和Sepax C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，其中Sepax C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱所得譜峰最多，分離度較好。在選擇流動(dòng)相過(guò)程中分別考察甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%冰醋酸、和乙腈-0.1%甲酸等流動(dòng)相，結(jié)果乙腈-0.1%甲酸水溶液的洗脫效果最好，故選擇此作為流動(dòng)相。分別考察254 nm和270 nm波長(zhǎng)，結(jié)果表明在270 nm處各色譜峰峰形較好，色譜信息較為豐富，分離度較好，故選用270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

虎掌南星指紋圖譜在20.38 min和55.79 min處比半夏新增2個(gè)峰，與半夏相似度在0.88左右，天南星指紋圖譜在6.663 min，20.858 min，42.412 min和63.287 min處比半夏新增4個(gè)峰，與半夏的相似度為0.697。2、3、7號(hào)藥材是在臨床上遇見(jiàn)，但不能確定品種的藥材，根據(jù)專家推測(cè)為半夏的變異品種，其指紋圖譜與半夏對(duì)照藥材指紋圖譜對(duì)比，2號(hào)在41.006 min；3號(hào)在41.603 min各新增1個(gè)峰；7號(hào)在30.893 min，38.274 min，45.406 min新增3個(gè)峰。因半夏和虎掌南星為同科同屬植物，親緣性較大，半夏屬植物形態(tài)變異豐富，臨床上出現(xiàn)很多變異品種，且半夏、虎掌南星和天南星均有小毒，為保障用藥安全性，臨床應(yīng)該嚴(yán)格區(qū)分。指紋圖譜研究中新增的色譜峰以及相似度均表明各樣品之間化學(xué)成分存在顯著差異，臨床療效也將不同[5-7]，新增的色譜峰可為半夏、虎掌南星、天南星及變異品種的鑒別提供參考依據(jù)。

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