大鯢抗菌肽基因KK1/KK5/KK8對嗜水氣單胞菌的侵染響應

王慧 楊文佳 駱建林 李國勇 張婷 白禹 李燦

摘要：【目的】探究大鯢（Andrias davidianus）抗菌肽家族基因對嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）侵染的響應，為揭示抗菌肽家族基因的功能提供理論依據?！痉椒ā客ㄟ^腹腔注射嗜水氣單胞菌感染大鯢后，采用Trizol提取組織總RNA，反轉錄合成cDNA，再以實時熒光定量PCR（qPCR）分析抗菌肽家族3個基因（KK1、KK5和KK8）在大鯢皮膚和肝臟器官的表達響應情況?！窘Y果】經腹腔注射嗜水氣單胞菌后，抗菌肽基因KK1、KK5和KK8在大鯢皮膚組織中的相對表達量在攻毒后12～36 h均顯著高于注射PBS的對照組（P<0.05，下同）；而在肝臟組織中，抗菌肽基因KK1、KK5和KK8的相對表達量分別在攻毒后24、12和24 h時顯著高于對照組，其他時間點均低于對照組，說明這3個抗菌肽基因在早期積極響應嗜水氣單胞菌的侵染，但相對于皮膚組織，其高表達量持續時間較短?！窘Y論】抗菌肽家族基因KK1/KK5/KK8在嗜水氣單胞菌侵染大鯢時積極作出應答，尤其在皮膚組織中的特異表達對啟動機體天然免疫應答抵抗病原微生物感染具有重要作用。

關鍵詞：大鯢；嗜水氣單胞菌；抗菌肽；響應；基因表達

中圖分類號： S947.3 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2018）08-1627-06

0 引言

【研究意義】抗菌肽（Antimicrobial peptides，AMPs）廣泛存在于多種生物體內，且種類繁多，是生物體非特異性免疫功能的重要組成部分，具有抗細菌、真菌、病毒、寄生蟲等多種生物學功能，尤其在生物體的天然免疫系統中發揮重要作用（Bals et al.，1998；單安山等，2012；王青等，2016），即AMPs在疾病診療等方面有著廣闊的應用前景。因此，了解AMPs對揭示病原感染免疫應答機制及制定有效控制措施具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】AMPs是免疫系統防御病原微生物入侵的一個重要組分，具有強堿性、熱穩定性及廣譜抗菌等特點，一度被認為是新型的藥物試劑。已有研究表明，成熟的AMPs具有廣譜抗菌活性以抵抗細菌、病毒和真菌的侵染（Ko?ciu-czuk et al.，2012；Gao et al.，2015；Wei et al.，2015）。AMPs作用于細菌的細胞膜，在細胞膜上形成跨膜的離子通道，造成細胞內容物泄露而導致細菌死亡。除此之外，AMPs在寄主的每個生命活動階段均發揮調節作用，如抑制細胞凋亡，促進傷口愈合，或激活免疫細胞以調節適應性免疫反應（Nagaoka et al.，2001；……