豬鏈球菌病及其自家滅活疫苗的制備

摘 要：豬鏈球菌病是由多種致病性豬鏈球菌感染引起的一種人畜共患病，該病臨床上常表現為敗血癥、腦膜炎、淋巴膿腫、關節炎等癥狀。由于鏈球菌血清型較多，較有效的預防方法是分離本場豬鏈球菌，制備成自家滅活苗進行免疫。

關鍵詞：豬鏈球菌病 疫苗制備 自家滅活苗

一、豬鏈球菌病的特點

（一）病原特點

豬鏈球菌是一種革蘭氏陽性球菌，呈鏈狀排列，無鞭毛，不運動，不形成芽胞，但有莢膜。為兼性厭氧菌，但在無氧時溶血明顯，培養最適溫度為37℃。菌落細小，直徑1～2mm，透明、發亮、光滑、圓形、邊緣整齊，在液體培養基中呈鏈狀。到目前為止，共有35個血清型（1～34，1/2型），最常見的致病血清型為2型。

（二）致病性

豬鏈球菌的主要毒力因子包括莢膜多糖、溶菌酶釋放蛋白、細胞外因子以及溶血素等。我國科研工作者研究比較多的是溶菌酶釋放蛋白（MRP）和細胞外蛋白 因子（EF），二者均為陽性的菌株，一般具有較高的毒力，它們是評價豬鏈球菌2型毒力的重要指標。CPS是抵抗巨噬細胞吞噬的重要物質，是豬鏈球菌進行分型的標志，是目前唯一被確認的毒力因子。

（三）流行特點

1 病原廣泛存在

豬鏈球菌常污染環境，可在糞、灰塵及水中存活較長時間。該病四季均可發生，但在炎熱，潮濕季節多發。豬鏈球菌經呼吸道、消化道、傷口及黏膜感染，也可垂直傳播，昆蟲媒介在該病的傳播中也起著重要作用。豬的鏈球菌是條件性致病菌，只有在它適宜的環境中，豬只抵抗力低下的情況下才能發病，多呈散發和地方性流行，偶有暴發。新疫區可呈暴發流行，發病率和死亡率較高。各種品種，各種年齡的豬均易感染。

2 仔豬發病死亡率高

仔豬多發生于1，2月齡，此時的母源抗體水平相對較低，本身抵抗力差，在應激，其他病原的侵襲等誘因下多發生；同時可通過小豬咬架的傷口，帶菌者的唾液及血液傳播，因此仔豬的發病率和死亡率較其他生長階段要高。臨床上仔豬多見于敗血型和腦膜腦炎型。

二、自家滅活苗的制備

（一）病料采集

挑選有典型腦神經炎癥狀及有關節炎癥狀的產房仔豬及保育仔豬多頭，要求為發病初期未使用任何抗生素治療，且體溫升高在41℃以上的病豬。剖檢發現病豬的腦軟膜、肺、肝、淋巴結有不同程度的出血點，心包、腹腔有纖維素性滲出物。關節腔內充滿黃色膠樣液體，有的形成干酪樣物附著在關節面。無菌采取病豬的關節病變部位的關節液，進行細菌的分離和鑒定。

（二）病原分離與鑒定

1 細菌的分離培養

病料采集，主要采集病豬的關節液。將采集的關節液分別接種到血液瓊脂平板培養基上和腦心湯液體培養基中，37℃培養12—24 h。該菌培養結果為有針頭或針尖大小的灰白色、濕潤、黏稠、周圍隆起的半透明菌落，在血液瓊脂平板上菌落周圍有β溶血。革蘭染色鏡檢，鏡下可見單個或成對排列的圓形或橢圓形革蘭陽性小球菌。在培養基上很少形成鏈狀，而在肉湯中可形成長鏈狀。

2細菌的鑒定

對上述分離到的革蘭陽性球菌進一步做生化反應鑒定，該菌能發酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、水楊苷、海藻糖和菊糖，產酸、不產氣，過氧化氫觸酶反應陰性。

3動物接種

將經分離鑒定挑選出的鏈球菌培養液分別給4只家兔腹腔注射，2 mL/只，接種后12—36 h內觀察家兔是否死亡，如死亡則從死亡家兔的心、肝、脾等器官分離細菌。接種后12—36 h內家兔全部死亡。從死亡家兔的心、肝、脾等器官中能分離到純化的致病性鏈球菌，可確定該病豬的關節炎主要由鏈球菌感染所致。（三）疫苗制備過程

將上述分離純化的鏈球菌在無菌操作條件下接種腦心湯培養液增菌培養6—12 h，然后把每支試管培養物接種到3000 mL的腦心湯培養液中，37℃增菌培養18—24 h。菌液離心后，用滅菌的生理鹽水將菌體沉淀稀釋一定倍數，用0.3%體積的福爾馬林將菌液滅活，福爾馬林要逐滴加入，并且要一邊加入一邊振蕩，然后放入培養箱中37℃恒溫培養48 h。取滅活的培養物在血液瓊脂、沙氏培養基、肝湯液體培養基中37℃恒溫培養24 h，觀察有無菌落生長。經檢驗無菌生長后，與氫氧化鋁佐劑進行混勻及分裝。

（四）雜菌檢驗和安全檢驗

雜菌檢驗取滅活的鏈球菌培養物在血液瓊脂、沙氏培養基、肝湯液體培養基中37℃恒溫培養24 h，觀察沒有菌落生長，說明鏈球菌培養物滅活完全，沒有鏈球菌及其他細菌生長。

安全性檢驗疫苗制好后，選5頭仔豬，每頭豬分別注射5 ml自家苗，30 min內沒有出現嘔吐等異常癥狀，說明該批疫苗可以使用，若30 min內出現嘔吐等異常癥狀者，該批疫苗不能使用。

三、其他

豬鏈球菌病對于我國養豬業來說并不是一個陌生的傳染病，從1949年到現在臨診上一直有病例出現。之所以舊病新發并且來勢兇猛，造成巨大的經濟損失，甚至嚴重地威脅到人類的生命，筆者認為主要原因是人們對豬鏈球菌病的預防不夠全面。豬鏈球菌是一種條件致病菌，所以外界環境的刺激是導致發病的一個重要的原因。事實上，幾乎所有的動物疾病都有一個共同的發病原因，就是沒有做好飼養管理工作。這包括飼料質量不佳，如飼料中存在黃曲霉毒素，會對肝臟造成嚴重的損害，動物免疫力也就下降。還有環境消毒不徹底，畜舍擁擠，通風不良，夏季溫度過高等也會導致發病率增加。免疫失敗的原因主要有豬藍耳病、豬圓環病、偽狂犬病等豬的免疫抑制病存在。豬在接種疫苗之前就患病，也是導致免疫失敗的重要原因。因此，只有綜合解決上述的非疫苗因素的問題，再配合自家疫苗的免疫，才能減少或控制豬場鏈球菌病的發病率。

參考文獻

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[3] 李成明，呂雷，姚金水，等.豬鏈球菌自家滅活疫苗的制備與應用[J].黑龍江畜牧獸醫，2005年第11期.

作者簡介：劉晨晨 ，1995年-，女，籍貫： 河南省商丘市，河南農業大學，牧醫工程學院2015級動植物檢疫（動物檢疫）專業在讀本科生。