甘丙肽在阿爾茨海默病患者血漿中的表達及意義

李 雷 李 嫻 于 婷

(濟寧醫學院診斷教研室，山東 濟寧 272067)

阿爾茨海默病(AD)是一種以漸進性學習能力損害及近期記憶障礙為主要表現的神經變性疾病。AD的早期臨床診斷因缺乏必要的生物學標志物而十分困難。人源甘丙肽(GAL)是由30個氨基酸構成的神經肽，廣泛分布于中樞及外周神經系統，具有重要的神經生物學功能，主要參與遞質釋放、學習、記憶等生理功能的調節〔1〕。對AD患者的尸檢〔2〕及AD動物模型研究〔3〕已證實GAL及其受體在腦內高表達，但是AD患者血漿GAL的表達是否出現改變目前尚不清楚。本研究檢測AD患者血漿GAL水平，并探討其與認知功能及海馬體積的相關性。

1 資料與方法

1.1研究對象 選擇濟寧醫學院附屬醫院2013年6月至2015年12月門診及住院的AD患者53例，入選病例均符合美國精神醫學會的精神障礙診斷統計手冊第4版(DSM-Ⅳ)規定的 AD型癡呆的診斷標準，由3名醫師獨立做出診斷，應用認知功能評定簡易智能狀態檢查(MMSE)量表判斷癡呆分級屬于輕度癡呆(20～25分)及中度癡呆(10～19分)。其中輕度癡呆AD患者24例，男14例，女10例，年齡60～79歲，平均67.3歲；中度癡呆AD患者29例，男16例，女13例，年齡63～80歲，平均69.5歲。正常對照組32例，選自同期該院老年體檢者，男17例，女15例，年齡60～83歲，平均68.7歲；無神經及精神疾病史，神經系統檢查無定位體征，常規磁共振成像(MRI)無梗死等其他特殊表現，MMSE量表≥25分。3組研究對象均無心、肺、肝、腎等重大疾病，組間年齡、性別及教育程度比較差異無統計學意義。

1.2方法 收集AD患者及正常對照組禁食12 h的空腹肘靜脈血4 ml，加入含有EDTA-Na2 1.5 mg/ml及抑肽酶500 IU/ml的試管中，全血4℃離心(3 000 r/min，20 min)分離血漿，分裝后-80℃凍存待測。采用雙抗體夾心酶標免疫分析法(ELISA)檢測血漿GAL含量，檢測試劑盒為美國USCNLIFE公司產品，實驗過程按說明書操作,結果用酶標儀在450 nm波長比色測定吸光度(OD值),根據標準品濃度計算血漿標本GAL的濃度。由3名醫師獨立應用如下工具對認知功能進行評定:(1)MMSE量表，反映被檢查者的智能狀態。(2)日常生活能力量表(ADL)，反映癡呆患者日常生活能力的損害程度。(3)Pfeffer功能活動調查表(FAQ)，反映被測者功能活動能力。(4)Fuld物體記憶測驗(FOM)，反映被測者以記憶缺損為主的廣泛認知功能障礙。(5)快速詞匯測驗(RVR)反映被測者語義記憶貯存功能。對象均進行MRI檢查。采用Philips GyroscanT5NT超導MRI成像系統，運用國際上具有權威性的腦功能成像處理分析軟件即統計參數圖的個體腦結構分析(IBASPM)系統,標記腦中各解剖結構在MRI 的具體位置,計算出左海馬體積〔3〕。為消除顱腔容積的影響,根據如下公式行標準化處理:Vs =Vp×Cn/Cm(Vs為標準化的海馬體積,Vp為原始海馬體積,Cm為全體受試對象平均顱腔體積,Cn為個體顱腔體積)。全部受試對象為右利手,較好控制利手對海馬體積的影響，取左側海馬體積進行分析。

1.3統計學處理 利用SPSS13.0軟件，數據進行正態性檢驗均符合正態分布。用單因素方差分析3組之間的差異，并用Student-Newman-Keuls進行兩兩比較；采用Spearman相關分析。

2 結 果

2.1各組檢測指標比較 各組AD患者的血漿GAL水平，ADL、FAQ評分均顯著高于正常對照組，MMSE、FOM、RVR評分及左海馬體積均顯著低于正常對照組(P<0.05或P<0.01)；并且中度癡呆組血漿GAL水平，ADL、FAQ評分均顯著高于輕度癡呆組，MMSE評分及左海馬體積顯著低于輕度癡呆組(P<0.05或P<0.01)。中度癡呆組FOM及RVR評分與輕度癡呆組相比差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2AD患者血漿GAL水平與MMSE、ADL、FAQ、FOM、RVR及左海馬體積的相關性 中度癡呆的AD患者血漿GAL水平與MMSE、FOM、左海馬體積呈負相關，與ADL及FAQ呈正相關，與RVR無顯著相關性。輕度癡呆的AD患者血漿GAL水平與MMSE及左海馬體積呈負相關，與ADL及FAQ呈正相關，與FOM及RVR無顯著相關性。見表2。

表1 各組檢測指標比較

與正常對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，與輕度癡呆組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

表2 AD患者GAL水平與MMSE、ADL、FAQ、FOM、RVR及左海馬體積的相關性

3 討 論

AD患者的神經病理損害早于臨床癥狀，并且AD患者從出現癥狀到明確診斷的時間一般需要32～57個月，此時的治療措施已較難干預疾病進程〔4〕。因此，對于AD的研究熱點集中在疾病的早期診斷,從而及時治療可能減輕腦功能損害程度。

GAL作為一種神經肽，其調節學習記憶功能的機制為：GAL的過度表達伴隨學習記憶相關部位去甲腎上腺素、5-羥色胺、多巴胺和乙酰膽堿失去平衡，學習記憶功能處于病理狀態；GAL可以破壞興奮性膽堿能突觸前受體，反饋性減少乙酰膽堿釋放；引起神經細胞膜超極化及外向性鉀離子流，產生抑制性突觸后電位；降低突觸前膜興奮性谷氨酸釋放，損傷突觸可塑性〔1〕。AD早期杏仁核GAL過度表達，在邊緣系統相關行為變化中起關鍵作用〔5〕。GAL的過度表達抑制了膽堿傳遞，限制海馬長時程增強，可能加劇AD的臨床表現，但分析從AD組織中獲取的基底前腦膽堿能神經元基因表型，結果提示GAL的過度表達對促進基底前腦膽堿能神經元生存及功能的基因表達起到正向調節作用〔6〕。近期的研究顯示外源性GAL可以減輕AD模型大鼠海馬淀粉樣肽沉積及減輕空間記憶障礙〔7〕。改善盡管GAL及其受體系統在AD狀態下的高表達產生保護作用還是損傷作用存在爭議，但普遍接受AD患者腦內GAL高表達的觀點。與以往的研究結果〔2〕相符，本研究證實AD患者血漿GAL水平顯著升高，提示血漿GAL水平作為早期診斷AD及監測AD病情進展的生物學標志物的可能性。認知功能評定量表是目前較為實用的判斷AD病情嚴重程度的方法。AD患者表現為學習、記憶、日常生活能力及功能活動能力減退,但其各方面的損害程度與病情的嚴重程度并不一致,并且各方面減退是不平行的〔8〕。本研究提示無論是輕度還是中度AD患者，其血漿GAL水平均與認知功能損害程度存在一定的相關性，并且與MMSE、ADL及FAQ的相關度較好。

海馬的損傷和萎縮在AD的早期已出現〔9〕，通過MRI計算海馬體積輔助診斷AD具有一定的臨床實用性。與以往的研究結果〔8〕類似，本研究證實綜合分析左海馬體積及血漿GAL水平對于診斷AD及判斷病情嚴重程度有重要作用。

綜上所述，血漿GAL水平結合臨床表現及影像學依據可應用于AD 的早期診斷，并且動態監測其水平可能預測AD癥狀的進展，為臨床干預AD的病程進展提供客觀依據。但由于本研究樣本量較小，血漿GAL水平對AD的診斷價值及其臨床意義還需要深入研究。