甲狀腺癌患者癌組織中CD34、增殖細胞核抗原和內皮細胞特異分子-1的表達及意義

李 銳 李曉麗

(吉林省人民醫院病理科，吉林 長春 130021)

甲狀腺癌近年來發病率逐年上升，其發病因素及發病機制成為當今醫學界的研究熱點〔1〕。腫瘤的發生、發展、預后、轉移可能與多種癌基因、抑癌基因有關，也可能與多種炎性因子相關，因此腫瘤發病機制是一種多因素的生物學行為〔2,3〕。本實驗通過檢測CD34、增殖細胞核抗原(PCNA)、內皮細胞特異分子(ESM)-1在甲狀腺癌組織、甲狀腺癌旁正常組織中的蛋白含量、mRNA水平及蛋白陽性表達強度，探究其與甲狀腺癌預后及轉移的關系，為甲狀腺癌的靶向治療提供新的靶點。

1 資料與方法

1.1臨床資料和實驗分組 選取2016～2018年吉林省人民醫院病理科確診住院手術甲狀腺癌患者作為研究對象，實驗分為兩組：甲狀腺癌組織81例，男36例，平均年齡(56.3±2.1)歲，女45例，平均年齡(58.2±2.6)歲；甲狀腺癌旁正常組織28例，男10例，平均年齡(56.9±2.7)歲，女18例，平均年齡(58.3±2.9)歲。甲狀腺癌依據臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期56例、Ⅲ～Ⅳ期25例；依據病理分型，高分化31例、中分化36例、低分化14例；有淋巴結轉移19例、無淋巴結轉移62例。所有研究對象無其他臟器的病變，具有可比性(P>0.05)。

1.2實驗儀器和試劑 烘干烤箱(上海儀器設備廠)，萊卡切片機(德國，Leica2245)，包埋機和撈片機(德國，Leica2245)，移液器(芬蘭)，OLYMPUS BX51光學顯微鏡(日本OLYMPUS 公司)，7300型實時熒光定量PCR儀、Epoch酶標儀(美國ABI公司)。兔抗CD34、PCNA、ESM-1抗體由北京鼎國生物有限公司提供；SP9710和二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒由福州邁新生物有限公司提供；圖像分析軟件由廈門Motic公司提供。Trizol、反轉錄試劑盒、實時熒光定量試劑盒購于塔克拉公司；CD34、PCNA、ESM-1酶聯免疫試劑盒購于長春鼎國生物有限公司。

1.3檢測指標 取術后甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁正常組織，一部分凍存待測，一部分固定于10%的甲醛液中24 h，進行修塊、脫水、浸蠟、包埋。

1.3.1CD34、PCNA、ESM-1蛋白陽性表達強度的檢測 組織切片成3 μm，每個樣本3片，80℃烤箱烘烤3 h，常規脫蠟至水，采用檸檬酸抗原修復液煮沸10 min進行抗原修復，分別滴加CD34、PCNA、ESM-1抗體(1∶300稀釋比例)，進行CD34、PCNA、ESM-1免疫組織化學染色，DAB顯色，操作嚴格依據SP試劑盒說明書。

1.3.2CD34、PCNA、ESM-1蛋白含量的檢測 準確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(ml)=1∶9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰浴中研磨組織制備勻漿，2 500 r/min離心10 min，取上清液待測，操作嚴格依據酶聯免疫試劑盒說明書進行。

1.3.3兩組樣本中CD34、PCNA、ESM-1 mRNA水平的檢測 引物的設計和合成由上海生物工程有限公司提供，Trizol提取總RNA然后行實時熒光定量PCR(RT-PCR)，每個樣本基因擴增3次取樣本均值，采用2-ΔΔCt表示目的基因相對表達水平。

1.4統計學分析 采用SPSS16.0軟件行t、χ2檢驗。

2 結 果

2.1CD34、PCNA、ESM-1在甲狀腺癌、甲狀腺癌旁正常組織中蛋白陽性表達強度、蛋白含量及mRNA水平的比較 與甲狀腺癌旁正常組織比較，CD34、PCNA、ESM-1在甲狀腺癌組織中的蛋白陽性表達強度均明顯增強，蛋白含量及mRNA水平明顯增高，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1、圖1。

2.2CD34、PCNA、ESM-1在甲狀腺癌中的陽性表達率與甲狀腺癌臨床病理特征的關系 CD34、PCNA、ESM-1在甲狀腺癌組織中的陽性表達率隨甲狀腺癌臨床分期逐級遞增，隨病理分級高、中、低分化依次遞增，隨無、有淋巴結轉移依次遞增，且差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表1 CD34、PCNA、ESM-1在甲狀腺癌、癌旁正常組織中蛋白陽性表達強度、蛋白含量及mRNA水平的比較

與癌旁正常組織比較：1)P<0.05

臨床特征nCD34+-陽性率(%)PCNA+ -陽性率(%)ESM-1+-陽性率(%)臨床分期 Ⅰ～Ⅱ563422 60.71 35 2162.5031 25 55.36 Ⅲ～Ⅳ25214 84.001) 22 3 88.001)20 580.001)病理分級 高分化311615 51.61 17 14 54.8314 1745.16 中分化362610 72.222)26 10 72.222)25 1169.442) 低分化1413 192.863)140100.003)12 2 85.713)淋巴結轉移 無 623824 61.2938 2461.2935 27 56.45 有 1917289.474)19 0 100.004)16 384.214)

與Ⅰ～Ⅱ 期比較：1)P<0.05；與高分化比較：2)P<0.05;與中分化比較：3)P<0.05；與無淋巴結轉移比較：4)P<0.05

3 討 論

甲狀腺癌是發病率增速最快的腫瘤之一，同時它也是內分泌系統最常見的腫瘤〔3〕。由于甲狀腺癌的發病率增速快及復發率高，對甲狀腺癌患者術后提供相應的靶向治療尤為重要，以便對預后給予準確預判，提高患者的生存率及生存質量。

以往研究〔4,5〕多從與甲狀腺腫瘤相關的多種癌基因、抑癌基因及炎性因子著手，本實驗側重于腫瘤內的微血管、內皮細胞因子及增殖細胞核抗原的研究，觀察血液供應與甲狀腺腫瘤發生、發展、浸潤及轉移的相關性。

CD34(人類造血干細胞抗原)起源于間質，是高原糖基化的跨膜糖蛋白，是血管內皮分化的標志物，特異度較高，能通過微血管密度反映腫瘤微血管的生成狀況〔6,7〕。PCNA存在于細胞核內且在細胞核內合成，細胞周期中反映DNA的復制、合成狀態，因此僅在增殖細胞的細胞核中表達，是判斷腫瘤細胞增殖狀態的標志物及良好指標〔8,9〕。

ESM-1主要表達于血管內皮細胞，是一種可溶性的糖蛋白，在許多惡性腫瘤中都呈高表達狀態，與腫瘤的侵襲、轉移、預后密切相關，其表達受多種因素調控，是腫瘤內皮組織血管侵襲的標志物〔10,11〕。

綜上所述，CD34、PCNA、ESM-1在甲狀腺癌組織的高表達反映了癌組織血液供應的豐富，提示甲狀腺癌患者術后進行CD34、PCNA、ESM-1聯合檢測，有助于判斷癌癥患者的預后、轉移，并開展針對性的靶向治療。