國產(chǎn)粒細(xì)胞集落刺激因子動員健康供者造血干細(xì)胞的臨床觀察

羅暢如 陳偉紅 李明 杜新

【摘要】 目的：觀察國產(chǎn)粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）對32名健康供者外周血造血干細(xì)胞動員效果及不良反應(yīng)。方法：選取2017年4-11月期間32名健康供者應(yīng)用G-CSF 5～10 ?g/（kg·d）連續(xù)5 d皮下注射，若第4天白細(xì)胞低于30×109/L，第4.5天開始采集前2 h加用G-CSF 5 ?g/kg皮下注射，用COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)采集外周血造血干細(xì)胞，若采集數(shù)量不夠，第5.5天再采集1次。觀察供者動員前后血常規(guī)的變化和采集造血干細(xì)胞結(jié)果，以及出現(xiàn)的不良反應(yīng)。結(jié)果：動員后第4.5天白細(xì)胞明顯高于動員前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。32名供者均成功采集，外周血單個核細(xì)胞（PBMNC）8.5（3.17～20.95）×108/kg、CD34+6.43（2.15～17.5）×106/kg，其中4名供者需采集2次，余28名供者均采集1次。10名供者出現(xiàn)腰背部酸痛，3名出現(xiàn)乏力，均能耐受；4名供者采集過程中出現(xiàn)口唇、四肢麻木，予靜滴鈣劑后均緩解。結(jié)論：所有供者經(jīng)G-CSF動員后均可成功采集，并能耐受其不良反應(yīng)，可替代進(jìn)口G-CSF供臨床使用。

【關(guān)鍵詞】 動員； 粒細(xì)胞集落刺激因子； 造血干細(xì)胞

【Abstract】 Objective：To observe the mobilization and adverse effects of domestic granulocyte colony stimulating factor （G-CSF）on peripheral blood hematopoietic stem cells in 32 healthy donors.Method：A total of 32 healthy donors from April to November 2017 were selected for 5 consecutive days of subcutaneous injection of G-CSF 5-10 ?g/（kg·d）.If white blood cells count were less than 30×109/L on day 4，subcutaneously injected with G-CSF for 5 ?g/kg 2 hours before day 4.5.Peripheral blood hematopoietic stem cells were collected by a COBE Spectra blood cell separator，in the event that the quantity collected was not sufficient，an additional sample would be collected on day 5 and a half.The changes of blood routine before and after mobilization，the results of hematopoietic stem cells and the adverse reactions were observed.Result：White blood cells were significantly higher at 4.5 days after mobilization than those before mobilization， the differences were statistically significant（P<0.05）.All 32 donors were successfully collected，PBMNC were 8.5（3.17-20.95）×108/kg，CD34+ were 6.43（2.15-17.5）×106/kg，of which 4 donors required additional collection，with the rest needing only the initial collection.10 donors experienced lumber and back pain and 3 donors reported fatigue，both of which were tolerable.Lip and limb numbness were observed in 4 donors，who were given intravenous calcium.Conclusion：All donors are able to successfully collection after mobilization by G-CSF and can tolerable adverse reactions，which can replace imported G-CSF for clinical use.

【Key words】 Mobilization； Granulocyte Colony Stimulating Factor； Hematopoietic stem cell

First-authors address：Shenzhen Second Peoples Hospital，Shenzhen 518035，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.15.011

外周血造血干細(xì)胞移植已廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)良惡性疾病、遺傳性等疾病的治療，其中動員、采集足夠數(shù)量的外周血造血干細(xì)胞是決定其能否成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本文選取2017年4-11月期間32名健康供者應(yīng)用國產(chǎn)粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）動員、采集外周血造血干細(xì)胞的效果及其對供者產(chǎn)生的不良反應(yīng)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并按照醫(yī)院倫理委員會要求對所有的參與者提供書面通知。選取2017年4-11月期間32名健康供者，納入標(biāo)準(zhǔn)：來源于中華造血干細(xì)胞資料庫深圳分庫，經(jīng)檢索10個位點(diǎn)（HLA-A、B、Cw、DRB1、DQB1）相合，以及本科同胞HLA相合或半相合。通過體格檢查均排除感染性疾病、慢性系統(tǒng)性疾病（心血管疾病、結(jié)締組織病）及其他不適于捐獻(xiàn)情況的人員。其中男19名，女13名；年齡11～58歲，體重38.5～110 kg。

1.2 方法

1.2.1 動員 采用國產(chǎn)G-CSF（生產(chǎn)廠家：上海三維生物技術(shù)有限公司，國藥準(zhǔn)字S19980037）動員，5～10 ?g/（kg·d），第1天8 pm皮下注射，后根據(jù)供者體重情況，1次/晚或1次/12 h皮下注射，連續(xù)5 d，第2.5～6.5天每天上午查血常規(guī)，若采集前1 d外周血白細(xì)胞低于30×109/L，于采集前2 h皮下注射賽格力5 ?g/kg，以增加骨髓中的造血干細(xì)胞向外周血液的釋放。

1.2.2 采集 32名健康供者用藥第4.5、5.5天采集造血干細(xì)胞，采集次數(shù)根據(jù)采集物中單個核細(xì)胞（MNC）計數(shù)及CD34+細(xì)胞計數(shù)而定，目標(biāo)采集細(xì)胞總數(shù)達(dá)到CD34+細(xì)胞>2×106/kg（受者體重）或MNC>5×108/kg（受者體重）。用COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)（美國Terumo BCT公司）采集外周血造血干細(xì)胞，選擇MNC程序，輸入患者性別、身高、體重、外周血血細(xì)胞比容等數(shù)據(jù)，Spectra系統(tǒng)將根據(jù)輸入資料自動計算出運(yùn)行結(jié)果，可根據(jù)具體情況稍做調(diào)整。采用肘正中靜脈及對側(cè)橈靜脈或肱靜脈穿刺，血流速度30～75 mL/min，以枸櫞酸（ACD）液為抗凝劑，全過程心電監(jiān)護(hù)，外周循環(huán)血量第1次12 000 mL，第2次8 000～12 000 mL。每次采集產(chǎn)品110～210 mL。

1.2.3 計數(shù) 取混勻后的采集物少量懸液計數(shù)單個核細(xì)胞數(shù)（MNC）、CD34+細(xì)胞數(shù)，并且計算每次產(chǎn)物MNC和CD34+細(xì)胞的采集總量。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察供者動員前后的血常規(guī)、MNC、CD34+的變化，以及供者動員、采集時的不良反應(yīng)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 供者動員前后血常規(guī)的變化情況比較 動員后第4.5天白細(xì)胞數(shù)為（43.3±9.7）×109/L明顯高于動員前的（7.5±1.7）×109/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而動員后血紅蛋白、血小板與動員前比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 供者采集造血干細(xì)胞結(jié)果 28名供者采集1次（第4.5天）細(xì)胞數(shù)就達(dá)到移植要求，4名供者需采集2次（第5.5天）達(dá)到移植要求，無一名供者采集3次及以上，見表2。

2.3 供者動員、采集時出現(xiàn)的不良反應(yīng)及隨訪情況 10名（31.3%）供者動員過程中出現(xiàn)腰背部疼痛，3名（9.4%）出現(xiàn)全身乏力，均可耐受，無須藥物等特殊處理；無一名供者出現(xiàn)發(fā)熱、胸悶、惡心、嘔吐、腹痛等不適。采集過程中有4名（12.5%）供者出現(xiàn)口唇、四肢麻木，無四肢抽搐、意識障礙等，經(jīng)靜脈補(bǔ)充葡萄糖酸鈣后，病情好轉(zhuǎn)，均能順利完成造血干細(xì)胞采集。所有供者出院后1～6個月接受電話隨訪，均無明顯不適。

2.4 移植后造血重建情況 采集造血干細(xì)胞送往北京、廣州、武漢、天津、深圳等地。32名患者接受外周造血干細(xì)胞移植后，均獲得造血重建。移植后12～14 d中性粒細(xì)胞絕對計數(shù)>0.5×109/L，移植后10～21 d，PLT>20×109/L。

3 討論

獲得足夠外周血干細(xì)胞是保證外周血造血干細(xì)胞移植后受者造血及免疫功能重建的關(guān)鍵。在正常生理?xiàng)l件下，骨髓中造血干細(xì)胞占有核細(xì)胞的0.5%左右，外周血液循環(huán)中的造血干細(xì)胞含量極少，僅為骨髓1%～10%，不能滿足患者移植的需要[1]。研究發(fā)現(xiàn)，通過粒細(xì)胞集落刺激因子可促使供者骨髓中大量造血干細(xì)胞遷移進(jìn)入到外周血液循環(huán)中，使用血細(xì)胞分離機(jī)分離采集供者造血干細(xì)胞，能滿足造血干移植的需要[2-4]。

國內(nèi)大多數(shù)單位采用進(jìn)口G-CSF作為動員劑，效果已得到肯定[5-8]。隨著我國經(jīng)濟(jì)、科技的發(fā)展，制藥工藝水平也不斷得到提高。許多國產(chǎn)藥與進(jìn)口藥相比效，療效、副作用相當(dāng)，但價格明顯降低，減輕患者的負(fù)擔(dān)。因此筆者應(yīng)用賽格力作為動員劑進(jìn)行療效、不良反應(yīng)觀察，為證實(shí)能否替代進(jìn)口G-CSF提供臨床依據(jù)。

目前最佳G-CSF動員劑量及采集時間尚無定論。盡管有報道隨著G-CSF劑量的升高，造血干細(xì)胞的數(shù)量也有所升高，但其副作用也隨著升高，不利于供者的安全。故筆者采用G-CSF劑量為5～10 ?g/（kg·d），與國內(nèi)外學(xué)者報道基本一致[9-11]。本研究發(fā)現(xiàn)所有供者經(jīng)G-CSF動員后白細(xì)胞明顯升高，與動員前相比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而血紅蛋白、血小板較前有所下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)（P>0.05）。有報道表明動員后第5、6天連續(xù)采集外周血干細(xì)胞為最佳時機(jī)[9-12]，而呂亮亮等[13]認(rèn)為動員第4、5天采集為最佳時機(jī)。李明等[14]于2005年報道，通過調(diào)整G-CSF用藥時間，第1天于8 pm用藥，動員第4.5、5.5天進(jìn)行采集，所采集造血干細(xì)胞數(shù)量、質(zhì)量佳，而且對供者生活影響小，一直沿用至今。筆者所觀察的32名供者中有4名采集2次，其余均1次便達(dá)到采集要求（87.5%），與H?lig等[15]報道基本一致（78.2%供者1次完成采集），即CD34+細(xì)胞>2×106/kg（受者體重）或單個核細(xì)胞>5×108/kg（受者體重）。