北柴胡顯微特征中分泌組織類型的探究

藺明煊，肖瑤，石晉麗，何帥，姜亦南

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029)

柴胡來源于傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。按性狀不同，分別習(xí)稱“北柴胡”和“南柴胡”。具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的功效。常用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛等[1]。關(guān)于柴胡的顯微特征，各教材對北柴胡皮層及韌皮部中分泌組織的描述存在爭議。為了考察北柴胡的分泌組織類型究竟是油室(分泌腔)還是油管(分泌道)，本研究制作并觀察了北柴胡的橫切石蠟切片、縱切石蠟切片和粉末臨時裝片，以期對上述問題進(jìn)行探究，并準(zhǔn)確描述北柴胡的顯微特征，為柴胡的顯微鑒別提供依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材

北柴胡飲片購自北京雙橋燕京中藥飲片廠，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院石晉麗教授鑒定為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根。

1.2 儀器

水循環(huán)真空泵(SHZ-III型，鄭州獅鼎儀器廠)；生物制片快速處理儀(SQKC-III型，航空航天部蘭州飛控儀器總廠)；WGP-300隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(重慶四達(dá)試驗儀器廠醫(yī)療儀器廠)；YL3回轉(zhuǎn)式切片機(jī)(上海儀表廠)；恒溫攤片烤片機(jī)(TK-218型，湖北泰維醫(yī)療有限公司)；珊頓E型冰凍切片機(jī)(Thermo公司)；OlympusBX51顯微鏡(Olympus公司)；FW200高速粉碎機(jī)(北京科偉永興儀器有限公司)。

1.3 試劑

乙醇、二甲苯(均為分析純，北京化工廠)；液體石蠟、石蠟(北京華威銳科化工有限公司)；番紅:固綠(1∶1)混合染色液(谷歌生物)；加拿大樹膠(源葉生物)；水合氯醛；稀甘油。

2 方法

2.1 橫切面及縱切面顯微觀察

采用石蠟切片法制備藥材的顯微永久裝片。選取較完整的北柴胡飲片20個，用水充分浸軟后切成小段，放入試管中，加水浸沒，真空泵抽氣，抽至材料沉底為止。再用不同濃度乙醇溶液梯度脫水，乙醇-二甲苯梯度溶液透明，用石蠟緩慢替換二甲苯，在純石蠟中浸蠟，包埋，切片，展片，烘片，再以乙醇-二甲苯梯度脫蠟，番紅-固綠混合染色液染色，以乙醇-二甲苯梯度洗去浮色后用光學(xué)樹膠封片[2]。共制作北柴胡橫切石蠟切片20余張，縱切石蠟切片20余張。在顯微鏡下觀察橫切片及縱切片分泌組織特征并照相。

2.2 粉末的顯微觀察

采用粉末制片法制備藥材的顯微臨時裝片，制作并觀察13片。將北柴胡藥材打粉，過四號篩(65目)，取少許粉末置于載玻片上，滴加水合氯醛1～2滴，于酒精燈上加熱透化，冷卻后滴加少許稀甘油，蓋上蓋玻片[3]。

3 結(jié)果

3.1 北柴胡橫切面顯微特征

①木栓細(xì)胞7～8列，皮層狹窄。②皮層及韌皮部有油管(油室)散在或呈斷續(xù)環(huán)狀，部分內(nèi)含油狀物。③形成層成環(huán)。④木質(zhì)部占大部分，大型導(dǎo)管切向排列，木纖維發(fā)達(dá)，排成1至數(shù)個斷續(xù)環(huán)狀(見圖1)。

在橫切面顯微圖中無法斷定散在皮層及韌皮部中的分泌組織是油室還是油管。

圖1 北柴胡橫切面圖1.木栓層;2.皮層;3.油管(室);4.韌皮部;5.形成層;6.木質(zhì)部;7.木纖維

3.2 北柴胡縱切面顯微特征

①木栓層3～5列。②皮層狹窄，有少數(shù)類圓形油室散在，部分油室內(nèi)含油狀物，油室直徑20～70 μm不等、周圍分泌細(xì)胞多數(shù)。見圖2。③韌皮部含多數(shù)油管間隔排列，內(nèi)含條形油狀分泌物。④木質(zhì)部導(dǎo)管間隔排列，木纖維發(fā)達(dá)。見圖3。

圖2 北柴胡縱切面油室顯微特征圖

圖3 北柴胡縱切面圖1.木栓層;2.皮層;3.油管;4.韌皮部;5.木質(zhì)部;6.油室

3.3 北柴胡粉末顯微特征

粉末灰棕色。①油管居多，呈碎片狀，管道中含黃棕色條狀分泌物。②油室及其碎片少見，內(nèi)含油滴狀分泌物。見圖4。③木纖維成束或散在，無色或淡黃色，呈長梭形，紋孔稀疏，紋孔溝隱約可見。④導(dǎo)管多為網(wǎng)紋、雙螺紋。⑤木栓細(xì)胞黃棕色，常數(shù)層重疊，表面觀呈類多角形，壁稍厚。

圖4 北柴胡粉末油室及油管顯微特征圖A.油管;B.油室

4 討論

關(guān)于柴胡的顯微特征，《中國藥典》2015年版中柴胡鑒別項下未規(guī)定[1]，各教材對北柴胡皮層及韌皮部中分泌組織的描述存在爭議。

《生藥學(xué)》[4]中關(guān)于北柴胡的橫切面及粉末顯微特征只描述了油室，并未提及油管，且油室位于栓內(nèi)層和韌皮部，記載如下：橫切面“栓內(nèi)層窄，有油室7～11個，類圓形，周圍分泌細(xì)胞6～8個。韌皮部油室較小。”粉末“油室碎片含黃棕色條狀分泌物，周圍薄壁細(xì)胞大多皺縮”。中國中醫(yī)藥出版社2012年出版的第9版《中藥鑒定學(xué)》[5]中北柴胡顯微特征只描述了油管，未提及油室，且油管在皮層和韌皮部中都有，記載為：橫切面“皮層散有油管及裂隙……韌皮部有油管”；粉末“油管多碎裂，管道中含黃棕色或黃綠色條狀分泌物，周圍薄壁細(xì)胞大多皺縮”。中國醫(yī)藥科技出版社2004年出版的《中藥鑒定學(xué)》[6]描述與中國中醫(yī)藥出版社第9版《中藥鑒定學(xué)》相同。中國醫(yī)藥科技出版社2015年出版的第3版《生藥學(xué)》[7]中北柴胡的橫切面顯微特征與粉末特征描述不一致，橫切面顯微特征只描述了油室，與人民衛(wèi)生出版社2016年版相同，而粉末特征卻僅描述了油管。中國中醫(yī)藥出版社2017年出版的第10版《生藥學(xué)》[8]中對北柴胡分泌組織的特征描述，油管和油室均有涉及，“橫切面栓內(nèi)層散有油室及裂隙，韌皮部有油管；粉末油管碎片有黃棕色不規(guī)則條狀分泌物，周圍細(xì)胞多皺縮，細(xì)胞界限不明顯”。

北柴胡的顯微特征，僅通過其橫切面顯微圖很難看出分泌組織是油室還是油管，需通過縱切面顯微圖加以判斷，粉末顯微圖加以驗證。從本實驗結(jié)果不難看出，北柴胡顯微特征中的分泌組織，并非如某些教材中所述，橫切面特征僅含有油室或者油管，而是既有油室(分泌腔)，又有油管(分泌道)。橫切面特征的皮層中含有油室，韌皮部中含有油管；粉末特征顯示兩者均有，以油管居多。

綜上所述，本文對現(xiàn)有《生藥學(xué)》及《中藥鑒定學(xué)》等教材中對北柴胡顯微特征的描述進(jìn)行了探究，明確了北柴胡顯微特征中分泌組織的類型，準(zhǔn)確描述了北柴胡的顯微特征，為柴胡的顯微鑒別提供了依據(jù)。