間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境形成中的作用

丁潔

（貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

近年來，隨著居民生存環(huán)境及生活習(xí)慣的不斷變化，惡性腫瘤的發(fā)病率明顯升高。目前，臨床用于惡性腫瘤的治療方案仍以根治術(shù)+放化療為主，治療期間，患者的痛苦往往較大，生活質(zhì)量低。明確腫瘤的形成機(jī)制，是進(jìn)一步提高疾病控制率的基礎(chǔ)。

本文選取小鼠作為樣本，以結(jié)腸癌為例，經(jīng)對比實(shí)驗(yàn)，觀察間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境形成中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

選取小鼠60只作為樣本，將其分為空白組、模型組、治療組3組，3組小鼠均為20只。3組小鼠入選時，均為健康小鼠。空白組小鼠包括雌性8只，雄性12只，小鼠最高體重30.26 g，最低12.50 g，平均（25.20±1.64）g；模型組小鼠包括雌性9只，雄性11只，小鼠最高體重30.71 g，最低12.20 g，平均（25.33±1.75）g；治療組小鼠包括雌性9只，雄性11只，小鼠最高體重30.08 g，最低12.14 g，平均（25.48±1.62）g。3組小鼠具有可比性（p＞0.05）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 處理方法

空白組小鼠給予高壓滅菌水飲用；模型組小鼠采用炎癥誘發(fā)試劑（DSS）+誘發(fā)試劑（AOM）建立結(jié)腸癌模型；治療組小鼠采用炎癥誘發(fā)試劑（DSS）+誘發(fā)試劑（AOM）+間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）治療。

1.2.2 腫瘤增殖

樣本處理：樣本處理70天后，將小鼠處死，取結(jié)腸，采用PBS沖洗，甲醛浸泡。

樣本染色：制備腸組織石蠟切片，按照DAB免疫組化試劑盒脫蠟與水化，DBA顯色，脫水、封片、鏡檢。

數(shù)據(jù)觀察：觀察PCNA增殖情況及Ki-67情況，選取5個視野進(jìn)行樣本計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察3組樣本的腫瘤增殖情況。觀察3組樣本的Ki-67與PCNA表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)采用χ2檢驗(yàn)，以“%”表示。計(jì)量采用t檢驗(yàn)，以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。“p＜0.05”視為數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組樣本的腫瘤增殖情況

通過對3組樣本腫瘤生長情況進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)：①空白組小鼠結(jié)腸未見任何腫瘤結(jié)節(jié)；②模型組小鼠腸腔內(nèi)可見大量腫瘤結(jié)節(jié)，表明結(jié)腸癌小鼠模型建立成功；③治療組小鼠腸腔內(nèi)雖可見腫瘤結(jié)節(jié)，但數(shù)量明顯比模型組小鼠少。

2.2 3組樣本的Ki-67與PCNA表達(dá)情況

通過對3組樣本Ki-67與PCNA表達(dá)情況的觀察發(fā)現(xiàn)，空白組小鼠的Ki-67與PCNA表達(dá)均未見異常；模型組小鼠與治療組小鼠的PCNA表達(dá)對比情況見圖1.模型組小鼠與治療組小鼠的Ki-67表達(dá)對比情況見圖2.

上述結(jié)果表明：與模型組小鼠相比，治療組小鼠PCNA與Ki-67表達(dá)更低，兩組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。

圖1 模型組小鼠與治療組小鼠的PCNA表達(dá)

圖2 模型組小鼠與治療組小鼠的Ki-67表達(dá)

3 討論

間充質(zhì)干細(xì)胞來源于中胚層，為非造血前體細(xì)胞，在機(jī)體骨髓內(nèi)含量極高。間充質(zhì)干細(xì)胞可釋放多種因子。在腫瘤微環(huán)境中，多種生長因子均能夠促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向腫瘤遷移[1-2]。可見，間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤基質(zhì)的形成過程中廣泛參與，且能夠使腫瘤的微環(huán)境得到調(diào)節(jié)。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞屬于腫瘤間質(zhì)的主要細(xì)胞，臨床研究發(fā)現(xiàn)，該細(xì)胞可能來源于纖維母細(xì)胞，當(dāng)纖維母細(xì)胞分化時，該細(xì)胞隨之形成。除此之外，機(jī)體的腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化，同樣會產(chǎn)生腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞[3]。

為明確間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境形成中的作用，本文同樣通過小鼠實(shí)驗(yàn)的方式，對兩者之間的關(guān)系進(jìn)行了觀察。通過對3組樣本腫瘤發(fā)生及生長情況的對比研究發(fā)現(xiàn)，未建立結(jié)腸癌模型的小鼠，其結(jié)腸未見任何腫瘤結(jié)節(jié)，這表明該組小鼠機(jī)體健康，結(jié)腸部分無腫瘤出現(xiàn)；建立了結(jié)腸癌模型的小鼠，其腸腔內(nèi)可見大量腫瘤結(jié)節(jié)，表明結(jié)腸癌小鼠模型建立成功；在建立結(jié)腸癌模型的基礎(chǔ)上，給予間充質(zhì)干細(xì)胞注射的小鼠，其腸腔內(nèi)雖可見腫瘤結(jié)節(jié)，但數(shù)量明顯減少。通過上述結(jié)果分析得出，將間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用到結(jié)腸癌的治療中，能有效減少腫瘤結(jié)節(jié)，對結(jié)腸癌起到一定的抑制作用，這說明間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤微環(huán)境的形成具有一定的影響作用。通過對3組樣本Ki-67與PCNA表達(dá)情況的觀察發(fā)現(xiàn)，未建立結(jié)腸癌模型的小鼠，其Ki-67與PCNA表達(dá)均未見異常。通過對模型組小鼠與治療組小鼠Ki-67與PCNA表達(dá)情況的觀察發(fā)現(xiàn)，治療組小鼠PCNA與Ki-67表達(dá)更低，兩組對比數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。上述研究結(jié)果表明：給予間充質(zhì)干細(xì)胞治療，能夠有效減少Ki-67與PCNA表達(dá)。Ki-67與PCNA表達(dá)是腫瘤發(fā)生與進(jìn)展的主要特征，兩者表達(dá)量的降低，即表明腫瘤已經(jīng)得到控制。因此可以推斷，將間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用到結(jié)腸癌的治療中，可在一定程度上抑制病情進(jìn)展，延長患者的壽命。

受研究技術(shù)及樣本量的影響，本課題的研究成果可能存在一定的不足，但間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境形成中的作用已被證實(shí)。為使間充質(zhì)干細(xì)胞的作用及價(jià)值能夠得到體現(xiàn)，建議醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域通過臨床對比實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步明確間充質(zhì)干細(xì)胞的作用機(jī)制，為我國腫瘤患者疾病控制率的提升及壽命的延長奠定基礎(chǔ)。

綜上所述，間充質(zhì)干細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境之間可相互作用，從而影響腫瘤的增殖與分化。未來，臨床可考慮在進(jìn)一步明確間充質(zhì)干細(xì)胞作用機(jī)制的基礎(chǔ)上，將其應(yīng)用到惡性腫瘤的治療中，提高惡性腫瘤的控制率，延長患者的壽命。