新疆哈薩克族奶酪中潛在益生酵母菌的篩選

劉飛，郭孝敬，陳歡，史學(xué)偉，王斌，鄭曉吉

(石河子大學(xué) 食品學(xué)院，新疆 石河子,832003)

酵母菌在人類社會(huì)的發(fā)展中具有重要作用，不僅在醫(yī)藥學(xué)、環(huán)境方面的應(yīng)用與日俱增[1]，在食品行業(yè)中，酵母菌在制作面包、奶酪、啤酒、葡萄酒等發(fā)酵型產(chǎn)品時(shí)，也有十分廣泛地應(yīng)用，是極為重要的添加物[2]。它能夠在發(fā)酵過程中影響產(chǎn)品的風(fēng)味[3]，并且具有潛在益生特性的酵母菌還能抑制病原菌微生物和梭狀芽孢桿菌等有害菌的生長[4]，并產(chǎn)生多種水溶性維生素，提高發(fā)酵乳制品的營養(yǎng)物質(zhì)，為人體提供潛在益生功效[5-6]。目前，有相關(guān)報(bào)道從嬰幼兒糞便和乳制品中發(fā)現(xiàn)了具有潛在益生特性的酵母菌，如釀酒酵母(S.cerevisiae)和東方伊薩酵母(I.orientalis)等，它們能在低pH 值和膽鹽環(huán)境下生存，具備在人體胃腸道內(nèi)生存的能力。將這些具有益生特性的酵母菌作為生物治療劑，能夠抑制或治療與抗生素相關(guān)的腹瀉和腸炎、預(yù)防和治療急性痢疾[7]、降低膽固醇[8]、抗輻射[9]和抗氧化[10]等益生功效。現(xiàn)今，國外的一些發(fā)酵乳制品中，如Kefir、Viili(酸乳酒)、Cantal(康塔爾坎特爾干酪)干酪、Camembert(法國卡門貝所產(chǎn)的軟質(zhì)乳酪)干酪，均添加酵母菌賦予產(chǎn)品特殊的風(fēng)味和較高營養(yǎng)品質(zhì)[2]。但是也有一部分酵母菌是在食品制作過程中的污染菌、腐敗菌和有害菌，使產(chǎn)品品質(zhì)下降并出現(xiàn)產(chǎn)氣、有酵母味或其他異味、引起質(zhì)構(gòu)變化、變色等[6,11]，因此我們要準(zhǔn)確找出對(duì)人體有潛在益生性的酵母菌，使益生酵母菌在食品行業(yè)中發(fā)揮更大的作用。

我國境內(nèi)的新疆哈薩克族牧民常年居住在新疆天山山脈腳下，長期飲用含氘量很少的冰川水和冰雪融水，擁有優(yōu)質(zhì)的奶源，在這種得天獨(dú)厚的條件下，悠久歷史的哈薩克族奶酪中蘊(yùn)含了豐富多樣的酵母菌菌種資源，為新疆哈薩克族奶酪提供了獨(dú)特的風(fēng)味和極高的營養(yǎng)價(jià)值。近年來，隨著我國乳品行業(yè)的迅速發(fā)展，市場(chǎng)的不斷擴(kuò)大，從哈薩克族奶酪中篩選出具有潛在益生特性的酵母菌應(yīng)用于乳制品加工中，開發(fā)新型乳制品迫在眉睫。新產(chǎn)品的開發(fā)將伴隨新疆地區(qū)乳品行業(yè)的又一個(gè)發(fā)展熱潮。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

從新疆哈薩克族聚居的吉木乃(N)、阿勒泰(L)、伊寧(Y)、和分縣(F)地區(qū)，每地采集5塊奶酪樣品，用保鮮袋封裝后貼上標(biāo)簽放入- 4 ℃的手提式冰盒內(nèi)保藏，18 h內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，在4 ℃下冷藏保存。選取出18株生長狀況良好酵母菌L5、Y1、Y36-6、N9、L1、H2、N6、L3、H6、H1、F3、F1、N香、N2、N1、H3、Y2、L4，從中篩選出具有益生特性的酵母菌。

1.2 試劑

葡萄糖、酵母浸粉、瓊脂粉，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；蛋白胨，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；NaOH、HCl，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；膽鹽，天津永晟精細(xì)化工廠有限公司；胃蛋白酶，天津市福晨化學(xué)試劑有限公司；PBS磷酸緩沖液，天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.3 培養(yǎng)基

YEPD液體培養(yǎng)基:酵母浸粉10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 L;

YEPD固體培養(yǎng)基:酵母浸粉10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 L;

膽鹽培養(yǎng)基:酵母浸粉10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 L、膽鹽1、3、5 g/L;

酸性培養(yǎng)基:酵母浸粉10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 L、pH值為1.5、2.0、3.0、5.0、6.5;

LB培養(yǎng)基：蛋白胨10 g、酵母浸粉5 g、NaCl 10 g、瓊脂15 g、pH 7.4～7.6、蒸餾水1 L；

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、瓊脂20 g、pH 7.0～7.2、蒸餾水1 L。

1.4 儀器及設(shè)備

高速冷凍離心機(jī)5810R(德國eppendorf儀器公司)，萬分之一天平BS224S(美國 Mettler Toledo 公司)，冷藏冷凍箱BCD-265F(榮事達(dá)集團(tuán))，全自動(dòng)高壓滅菌鍋LAC-5040S(浙江新豐醫(yī)療器械有限公司)，標(biāo)準(zhǔn)型pH計(jì)pHS-3C(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，光學(xué)顯微鏡CX21FS1(Olympus 公司)，紫外分光光度計(jì)722光柵(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，超凈工作臺(tái)SW-CJ(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)，智能生化培養(yǎng)箱Bnp-9272(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)，水浴恒溫振蕩器SHZ-B(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)，PCR擴(kuò)增儀TC-512(英國Techne公司)，水平電泳儀Power Pac Universal(美國BioRad公司)，凝膠成像系統(tǒng)Gel DOC XR(美國BioRad公司)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 潛在益生酵母菌的篩選

2.1.1 耐酸試驗(yàn)

在篩選實(shí)驗(yàn)中，將培養(yǎng)基調(diào)配為5種不同的pH值(1.5、2.0、3.0、5.0和6.5)來測(cè)試18株酵母菌的耐酸能力。將活化后的菌懸液以4%的接種量分別接種于5種不同pH值的液體篩選培養(yǎng)基中[12]，取pH值6.6為空白對(duì)照。在30 ℃，180 r/min的搖床上培養(yǎng)24 h 后測(cè)定OD600nm下的吸光度。

2.1.2 耐膽鹽試驗(yàn)

將具有酸耐受性的酵母菌，接種在含豬膽鹽質(zhì)量濃度為0、1、3、5 g/L的固體膽鹽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48 h后進(jìn)行菌落平板計(jì)數(shù)法計(jì)算活菌數(shù)[2]。觀察酵母菌株在不同膽鹽質(zhì)量濃度下的生長狀況，對(duì)膽鹽的耐受能力用公式(1)表示：

(1)

式中：ΔX,含有膽鹽的培養(yǎng)基中細(xì)胞增長數(shù)量;ΔY,不含膽鹽的培養(yǎng)基中細(xì)胞增長數(shù)量。

2.1.3 模擬人體溫度下的生長測(cè)試

將菌液接種到Y(jié)EPD固體培養(yǎng)基上，每組2個(gè)平行，在30 ℃，180 r/min搖床上培養(yǎng)24 h后進(jìn)行活菌平板計(jì)數(shù)。

2.1.4 模擬人體胃液環(huán)境

將篩出的酵母菌進(jìn)行活化后，取30 mL酵母菌培養(yǎng)物在4 ℃，3 000g下離心10 min，細(xì)胞用滅菌后的PBS緩沖溶液(0.1 mol/L，pH 7.2：內(nèi)含80 g/L NaCl)按1∶9比列稀釋。然后取0.1 mL懸浮液添加到1.0 mL模擬胃液中，模擬胃液[13]：含3 g/L胃蛋白酶和5 g/L NaCl，加HCl調(diào)節(jié)pH值為1.2。混合物在30 ℃、150 r/min搖床上培養(yǎng)2 h后，用紫外分光光度計(jì)測(cè)培養(yǎng)前后的OD600 nm值，計(jì)算菌數(shù)變化，用公式(2)表示：

(2)

式中：OD0h,沒有放入模擬胃液中的初始吸光度;ODth,在模擬胃液中培養(yǎng)若干小時(shí)之后的吸光度。

2.1.5 抑菌性試驗(yàn)

人體胃腸道內(nèi)菌種復(fù)雜，而益生菌的增多能夠抑制有害菌的生長，對(duì)人體健康有益。采用牛津杯法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，將篩出的酵母菌進(jìn)行活化后調(diào)整菌液濃度為106CFU/mL備用。指示菌的菌液濃度也調(diào)整為106CFU/mL，吸取200 μL涂布于牛肉膏蛋白胨平板上。牛津杯滅菌后，用潔凈的鑷子輕壓于指示菌的平板上，使杯底緊貼于培養(yǎng)基上。每個(gè)培養(yǎng)基的牛津杯中加入200 μL酵母菌菌液，置于28 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，測(cè)抑菌圈大小[13-14]。

2.1.6 菌體自動(dòng)聚集能力及表面疏水性試驗(yàn)

益生菌表面疏水性和自動(dòng)聚集能力的強(qiáng)弱與其粘附性的強(qiáng)弱有密切關(guān)系，對(duì)益生菌在人體胃腸道內(nèi)的生長存活有重要的影響，一般表面疏水性越強(qiáng)與自動(dòng)聚集能力越高的細(xì)菌黏附力越強(qiáng)[15]。

(1)自動(dòng)聚集能力測(cè)定

將YEPD培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)的酵母菌懸液以6 000 r/min離心10 min，并用0.2 mol/L的PB 緩沖溶液(pH 7.2)洗滌2次。將沉淀重懸于相同的緩沖液(2 mL)中，振蕩30 s，并在37 ℃下培養(yǎng)2 h。從上層取出懸浮菌液并等分試樣(1 mL)，在OD560nm對(duì)吸光度測(cè)定[16-17]，使用公式(3)：

(3)

其中：OD0和ODt分別為培養(yǎng)前后的吸光度。Au%<30%被認(rèn)為是低的，在30%和60%之間為中，高于60%為高，一式三份進(jìn)行測(cè)定。

(2)疏水性測(cè)定

當(dāng)非極性溶液在極性水中會(huì)表現(xiàn)出不穩(wěn)定的狀態(tài)，并引起分子的重新排列分布及一系列熱能(熵)的變化[15]，是疏水性的定義。通常將細(xì)胞與十六烷結(jié)合的能力作為間接評(píng)估酵母的疏水能力，測(cè)定方法由GONG等人提出[17]。方法如下：

①將10 mL酵母菌細(xì)胞培養(yǎng)物在4 000 r/min下離心10 min;

②棄去上清液，將沉淀物懸浮在酸化至pH 2.0的25 mL PBS(0.8 g/L , K2HPO4；0.68 g/L KH2PO48.77 g NaCl)中；

③每個(gè)酵母菌制備2個(gè)不同的樣品：對(duì)照(9.5 mL細(xì)胞懸浮液+ 0.5mL蒸餾水)和活菌樣品(9.5 mL細(xì)胞懸浮液+ 0.5 mL十六烷)；

④樣品振蕩10 s后靜置10 min；

⑤通過在30，60，90和120 min后在OD600nm處的吸光值來評(píng)估十六烷捕獲細(xì)胞的能力。將水相吸光度的降低作為細(xì)胞表面疏水性(H%)的度量，按公式(4)計(jì)算：

(4)

其中OD0和ODt分別為用正十六烷萃取前后的吸光度，該測(cè)定一式三份進(jìn)行[16,18]。

2.2 菌株生理生化試驗(yàn)及26S rDNA基因序列分析

(1)對(duì)篩選出的酵母菌進(jìn)行糖發(fā)酵試驗(yàn)和碳源、氮源同化試驗(yàn)[19-20]；

(2)DNA提取按文獻(xiàn)[19]、[20]操作；

(3)PCR擴(kuò)增。

反應(yīng)體系：采用50 μL反應(yīng)體系:基因組DNA模版2 μL，ITS1 2 μL，ITS4 2 μL，2xTapPCR MasterMix25 μL，使用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTAACCTGCGG-3′) ITS1(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)對(duì)應(yīng)區(qū)域內(nèi)的酵母菌DNA模版進(jìn)行擴(kuò)增，做好空白對(duì)照。

PCR反應(yīng)循環(huán)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性1 min，52 ℃退火2 min，72 ℃延伸1 min，循環(huán)35次，72 ℃延伸10 min。

(4)測(cè)序

將擴(kuò)增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳后，送往上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定，最終結(jié)果用均值+標(biāo)準(zhǔn)差的方式表現(xiàn)。先使用Origin 8.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到的結(jié)果比較采用SPSS(Vesion 19)中的ANOVA進(jìn)行顯著性分析，采用鄧肯(Ducan)多重范圍檢驗(yàn)法。

3 結(jié)果與分析

3.1 酵母菌在不同pH值下生長狀況

酵母菌在人體內(nèi)的存活與pH值有密切關(guān)系，而在益生菌的篩選中通常也把菌株是否耐酸作為一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)。表1中對(duì)18株菌在不同pH值下的生長狀況進(jìn)行了顯著性差異分析，p<0.05說明各菌株有顯著性差異。

表1 各菌株在不同pH值下OD600nm處的吸光值Table 1 Absorbance of each strain at OD600nm at different pH value

續(xù)表1

菌株pH=1.5pH=2.0pH=3.0pH=5.0pH=6.5N20.12±0.014AB0.21±0.009AB0.19±0.011B0.51±0.016A0.64±0.021AY36-60.43±0.016F0.72±0.009J0.63±0.0124H1.22±0.0125G1.41±0.017HH60.15±0.0125BC0.51±0.008H0.64±0.011H0.91±0.029E1.19±0.016FH30.27±0.025D0.25±0.012BCD0.33±0.003F0.89±0.039E1.28±0.017GH20.13±0.0124AB0.23±0.0094ABC0.19±0.0125A0.71±0.0094D1.03±0.0205DL30.22±0.0125D0.19±0.011A0.31±0.0046E0.98±0.0169F1.22±0.0125FF30.13±0.0094AB0.22±0.027BCD0.29±0.0084D0.58±0.016B0.88±0.014CF10.19±0.0205C0.23±0.025CD0.31±0.009EF1.01±0.017F1.32±0.017H

注：同列數(shù)據(jù)中右上標(biāo)字母相同者，表示差異不顯著(p>0.05)。

由圖1可以看出，在不同pH值下18株酵母菌的生長狀況，用OD600nm下不同菌株的吸光值反應(yīng)其菌落數(shù)量的變化。菌株L1、Y2、N9、N2、H2、F3在5種不同pH值下的吸光值都比較低，且不同梯度間下降幅度較大，說明其在較低pH值下菌落數(shù)較少生長受抑制。而菌株Y1、L4、H1、Y36-6在不同pH值下均能夠正常生長有較高的生長活性，在pH=1.5的高酸條件下吸光值均大于0.4，酵母菌細(xì)胞數(shù)有一定的存活率，說明這4株菌具有較好的耐酸特性。其他菌株N1、L5、N6、N香、H6在pH值為1.5時(shí)吸光度有所下降，受到一定程度的抑制，但在pH值為2.0、3.0、5.0、6.5時(shí)均有一定的生長活性，說明這些菌株在低pH值條件下有一定耐酸性。

圖1 酵母菌在不同pH值下生長狀況Fig.1 Yeast growth conditions under acidic conditions

3.2 酵母菌在膽鹽固體培養(yǎng)基上的生長狀況

由圖2酵母菌在不同膽鹽質(zhì)量濃度的生長狀況可知，N9、N6、N香、H3在3種膽鹽質(zhì)量濃度下活菌增長率為0，受嚴(yán)重抑制，無法生長。菌株N1、L5、H6、L1、L3、F1的活菌增長率在3種膽鹽質(zhì)量濃度下均小于22%，其中L5、H6、L3、F1在3 g/L膽鹽質(zhì)量濃度下，菌株增長率分別為11.82%、13.01%、13.86%、21.32%,達(dá)到最大，在5 g/L質(zhì)量濃度下增長率分別為3.94%、6.94 %、2.31%、17.89%，均有不同程度的下降，可以看出4株菌在1、3 g/L膽鹽質(zhì)量濃度下有較好的生長具有一定的耐受性，在5 g/L質(zhì)量濃度增長率降低生長活性受到一定的抑制。菌株L1、N1在1 g/L膽鹽質(zhì)量濃度下菌株增長率分別為15.68%、6.07%，而在5 g/L膽鹽下增長率分別為13.51%、3.82%，增長率略微下降，說明L1、N1在5 g/L膽鹽下具有一定的生長力、耐受性。菌株Y1、L4、H1、Y36-6在不同膽鹽質(zhì)量濃度下活菌增長率都在30%以上，14株菌中在3 g/L膽鹽質(zhì)量濃度下Y36-6活菌增長率最高56.66%，5 g/L膽鹽質(zhì)量濃度下Y1增長率最高49.08%，4株菌在高膽鹽質(zhì)量濃度下不受抑制均有較強(qiáng)的生長力和耐膽鹽性，適合進(jìn)行下一步的其他潛在益生特性研究。

圖2 酵母菌在膽鹽固體培養(yǎng)基上的生長狀況Fig.2 Yeast growth on bile salt solid medium注：圖中同一膽鹽質(zhì)量濃度下不同字母表示差異性顯著(p<0.05)。

3.3 模擬胃液中酵母菌生長狀況

益生菌在人體胃腸道內(nèi)存活時(shí)，對(duì)胃腸液的耐受能力是可變，而且具有菌株特異性。根據(jù)圖3中酵母菌的生長狀況顯示，10株菌在模擬胃液中培養(yǎng)0.5 h后，F(xiàn)1、L5、L1這3株菌的活菌下降率較高在15%以上，其余菌株下降率都較低在10%以下，但在培養(yǎng)3 h后，除了Y1、L4、H1、Y36-6這4株酵母菌數(shù)量略微降低，其余6株菌的活菌數(shù)迅速下降，下降率達(dá)到30%～55%。綜上可知長時(shí)間處在模擬胃液的條件下只有Y1、L4、H1、Y36-6有較好的耐膽鹽性，具有一定的存活性。

3.4 模擬人體溫酵母菌生長試驗(yàn)

將篩出的10株酵母L5、F1、L4、Y1、H1、L3、H3、L1、Y36-6、N1置于37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察生長情況。由圖4酵母菌在37 ℃和室溫下的生長狀況可看出，在培養(yǎng)24 h后菌株H3的菌落數(shù)量最少，生長較緩慢,其余9株菌的菌落數(shù)均沒有較大的下降。可以看出在24、37 ℃情況下，這10株酵母菌均可以正常生長，說明37 ℃下并不會(huì)對(duì)菌株生長活性造成較大影響。

圖4 酵母菌在模擬人體溫下生長狀況Fig.4 Yeast in simulating the growth of human body temperature

3.5 益生酵母菌抑菌結(jié)果

通過表2抑菌試驗(yàn)結(jié)果，得出L5在金黃色葡萄球菌上有抑菌圈，在大腸桿菌上沒有抑菌圈，不具有抑制大腸桿菌特性，F(xiàn)1、H3、L1在大腸桿菌和金黃色葡萄球菌上都沒有抑菌圈，不具備抑制有害菌能力。H1、Y1、Y36-6、L4在金黃色葡萄球菌和大腸桿菌上都有抑菌圈。

表2 抑菌試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Yeast inhibition zone size

3.6 表面疏水性測(cè)定結(jié)果

圖5顯示了所研究菌株獲得的疏水性值，范圍為39.75%～82%，最高值對(duì)應(yīng)于馬克斯克魯維酵母H1(82.21%)，而Y1釀酒酵母也有較高疏水性值71.59%。畢赤酵母屬菌株L4和Y36-6的疏水性值分別為39.75%、42.94%,具有中等能力的疏水性，由于它們種屬固有的凝集條件不同而顯示出不同能力的疏水性值。

圖5 表面疏水性Fig.5 Surface hydrophobicity

3.7 菌體自動(dòng)聚合能力測(cè)定結(jié)果

菌株H1、 Y1、 Y36-6、 L4的自動(dòng)聚集能力如圖6所示。其中L4的自動(dòng)聚合能力較高為59.99%，Y36-6較低為49.46%，4株菌都顯示出了中等程度的自動(dòng)聚集能力。

圖6 菌體自動(dòng)聚合能力Fig.6 Cell autolytic capacity

3.8 菌株生理生化及26S rDNA測(cè)序分析結(jié)果

由表3的生理生化試驗(yàn)及圖7的發(fā)育樹結(jié)果分析，H1菌株屬于Kluyveromyces馬克斯克魯維酵母菌屬，與其相似度為99%，Y1菌株屬于saccharomycete釀酒酵母屬，與其相似度達(dá)到99%，Y36-6和L4都屬于Pichiakudriavzevii畢赤酵母屬，與其相似度達(dá)到99%。

表3 生理生化試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Physiological and biochemical test results

注：“+”表示陽性，“-”表示陰性。

圖7 酵母菌發(fā)育樹Fig.7 Yeast developmental tree

4 結(jié)論

通過益生菌篩選試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在pH分別為1.5、2.0、3.0的條件下進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，pH值越低，酵母菌生長活性受到的抑制越強(qiáng)，在pH為1.5時(shí)酵母菌生長活性最低，其中H2、F3、N2、Y2四種菌在3種酸度下均受到的較強(qiáng)的抑制，幾乎無法生長。在耐膽鹽試驗(yàn)中，N6、H3、N9、N香4種菌無法正常生長，受到的抑制性較大。在模擬胃液和37℃的條件下，篩選出9株能夠在人體胃腸道存活的酵母菌，并對(duì)這9株菌進(jìn)行了抑菌試驗(yàn)。其中，L5、L3只在金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基上有抑菌圈，F(xiàn)1、L1、H3在兩種指示菌的平板上均沒有抑菌圈，只有H1、Y1、Y36-6、L4四株菌可以在兩種指示菌上看到明顯的抑菌圈。經(jīng)過以上的益生特性篩選試驗(yàn)后得到H1、Y1、Y36-6、L4這4株菌為潛在益生酵母菌，并對(duì)4株菌的疏水性及自動(dòng)聚集能力進(jìn)行測(cè)試后發(fā)現(xiàn)，菌株H1、Y1具有高度疏水性，Y36-6、L4具有中度疏水性，且4株菌都具備中等自動(dòng)聚集能力，說明它們都具有良好的黏附性在胃腸道內(nèi)能有較好的存活能力。對(duì)4株酵母菌DNA測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果比對(duì)分析后得出，菌株H1屬于馬克斯克魯維酵母菌屬，菌株Y1屬于釀酒酵母屬，與其相似度達(dá)到99%，Y36-6和L4都屬于畢赤酵母屬，與其相似度達(dá)到99%。后期將對(duì)篩選出的4株具有潛在益生功能的酵母菌，進(jìn)行益生功能性乳產(chǎn)品的研制，對(duì)其在實(shí)際應(yīng)用中的抗氧化性和益生活性等方面進(jìn)行研究。